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关键词： 细胞生物学   实验教学   导学案  

摘要： 实验是生命科学探索的基本途径,实验能力是生物学工作者必须具备的技能。对于本科生来说,实验能力的习得主要依靠实验课程学习,因此,在初学阶段掌握科学的实验学习方法和培养思维能力显得十分重要。然而,一些高校在培养生物学专业学生实验能力过程中,由于存在实验课课时少的问题,导致学生实验能力的培养效果不佳。为此,该教学改革探究了导学案在细胞生物学实验教学中的应用及其效果,结果发现,导学案教学不仅可以解决课时少的问题,还有助于培养学生的实验学习习惯。该教学改革可为同等情况的高校实验教师教学提供参考。

关键词： 膀胱癌   醛缩酶A   上皮-间质转化   β-连环蛋白   细胞增殖  

摘要： 目的探究醛缩酶A对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响及机制。方法通过慢病毒感染构建干扰或过表达醛缩酶A质粒并转染至T24人膀胱移行细胞癌(T24)细胞中,将细胞分为对照组、空载组、醛缩酶A干扰组和醛缩酶A过表达组。检测醛缩酶A在膀胱癌组织和癌旁组织中的表达。检测细胞增殖、迁移和侵袭情况,同时检测EMT及Wnt/β-连环蛋白信号通路相关蛋白的表达。结果膀胱癌组织中醛缩酶A的免疫组织化学染色评分及相对表达量均高于癌旁组织[(33±7)分比(17±5)分、(63±6)%比(22±4)%](均P<0.001)。细胞计数盒8试验处理24、36和48 h后,醛缩酶A干扰组T24细胞吸光度值均低于空载组,而醛缩酶A过表达组T24细胞吸光度值均高于空载组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。醛缩酶A干扰组划痕愈合率低于空载组,醛缩酶A过表达组划痕愈合率高于空载组(均P<0.05)。醛缩酶A干扰组侵袭细胞数少于空载组,醛缩酶A过表达组侵袭细胞数多于空载组(均P<0.05)。醛缩酶A干扰组E-钙黏蛋白相对表达量高于空载组,神经钙黏蛋白、波形蛋白、β-连环蛋白、细胞周期素D1、c-Myc基因蛋白相对表达量均低于空载组(均P<0.05)。醛缩酶A过表达组E-钙黏蛋白相对表达量低于空载组,神经钙黏蛋白、波形蛋白、β-连环蛋白、细胞周期素D1、c-Myc基因蛋白相对表达量均高于空载组(均P<0.05)。结论醛缩酶A可促进膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,这可能是通过Wnt/β-连环蛋白信号通路发挥影响的。

关键词： 细胞生物学   教学改革   创新思维  

摘要： 医学细胞生物学是临床医学相关专业的重要基础学科,在新医科背景下,医学院校细胞生物学教学在培养学生探索精神和创新能力上亟待提高。本文提出了创新实验教学方式,注重学生动手能力和独立思考能力的培养,将医学案例引入细胞生物学的教学中,加深学生对科学问题的理解,提高学生从医学实例中提出科学问题,通过学习相关知识来解决这些问题的能力。此外,开展“翻转课堂”等教学方式,提高学生自主探索科学问题的能力并发展创新思维,为学生后续医学相关基础课程的学习和科研能力的提高奠定坚实的基础。

关键词： 阿魏酸   间充质干细胞   高糖环境   生物学功能   肝细胞生长因子  

摘要： 目的探讨阿魏酸对高糖诱导受损的人间充质干细胞(MSCs)生物学功能、凋亡和肝细胞生长因子(HGF)分泌的影响。方法体外分离培养人脐带血MSCs,取第4代细胞进行成骨、成软骨和成脂诱导分化鉴定。将鉴定成功的MSCs用30 mmol/L的葡萄糖预培养120 h,用不同浓度阿魏酸(0、1、2、4、8、16 mg/L)进行干预,确定阿魏酸促进高糖诱导受损MSCs增殖的最佳浓度。将高糖诱导受损MSCs按照随机数字表法分为受损MSCs组与阿魏酸干预组,同时设置正常MSCs组,阿魏酸干预组用最佳浓度的阿魏酸干预,受损MSCs组和正常MSCs组用等容量磷酸盐缓冲液处理。三组培养24 h后,比较各组MSCs增殖、黏附、迁移和凋亡情况;通过酶联免疫吸附测定法检测各组HGF的含量。结果阿魏酸促高糖诱导受损MSCs增殖的最佳浓度为2 mg/L。与正常MSCs组相比,受损MSCs组细胞增殖OD值、细胞黏附数以及迁移实际宽度均明显降低(均P<0.01);与受损MSCs组相比,阿魏酸干预组细胞增殖OD值、细胞黏附数和迁移实际宽度均明显增加[0.35±0.02比0.25±0.03、(27.00±4.32)个比(10.17±0.53)个、(15.37±0.90)μm比(7.30±2.03)μm](均P<0.01)。与正常MSCs组相比,受损MSCs组细胞凋亡率升高(P<0.01);与受损MSCs组相比,阿魏酸干预组细胞凋亡率明显降低[(10.79±0.78)%比(15.33±0.97)%](P<0.01)。与正常MSCs组相比,受损MSCs组HGF含量明显降低(P<0.01);与受损MSCs组相比,阿魏酸干预组HGF含量明显升高[(242±31)ng/L比(52±6)ng/L](P<0.01)。结论阿魏酸能够保护高糖诱导受损MSCs,增强其生物学功能和分泌功能,减少其凋亡。

关键词： Lin28   肝母细胞瘤   细胞增殖  

摘要： 目的:研究Lin28基因在肝母细胞瘤(HB)中的表达情况,并探讨Lin28的表达对HB细胞生物学功能的影响。方法:综合分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库和3个不同来源的基因表达数据库(GEO)数据集中Lin28基因的表达差异情况;通过转染构建的siRNA分别敲低HB细胞系Huh-6和HepG2的表达水平,通过细胞克隆集落形成实验、CCK-8、流式细胞术检测Lin28对HB细胞生物学表型的影响。结果:在TCGA数据库中,Lin28在大多数肿瘤中的表达均上调(P<0.05)。在GEO数据库中,Lin28在HB肿瘤组织较癌旁组织表达上调(P<0.05)。成功构建转染si-Lin28后,Lin28在mRNA及蛋白水平表达显著下降(P<0.05);敲低Lin28的表达可以显著抑制HB细胞系Huh-6和HepG2增殖能力(P<0.01),增加细胞凋亡率(P<0.05)。结论:Lin28在HB中表达上调,敲低Lin28的表达可以抑制细胞恶性表型,提示Lin28可能是HB一个潜在的治疗靶点。

关键词： 牙髓   牙髓干细胞   浓缩生长因子   过氧化氢   氧化应激   组织工程学  

摘要： 目的探讨浓缩生长因子(CGF)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的氧化应激状态下人牙髓干细胞(hDPSC)生物学性能的影响。方法采用组织块分离法从因正畸拔除的健康恒牙中提取hDPSC, 流式细胞术检测hDPSC的表面标志物CD34、CD45、CD90、CD105, 碱性磷酸酶(ALP)、茜素红S、油红O染色和集落形成实验对hDPSC进行鉴定。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测后选用最适H_(2)O_(2)浓度构建hDPSC氧化应激模型。采用反复冻融法制备CGF条件培养基, CCK-8检测后选用最适CGF浓度用于后续实验。将hDPSC分为对照组、H_(2)O_(2)组(H_(2)O_(2)单独处理)、H_(2)O_(2)+CGF组(H_(2)O_(2)联合CGF处理)和CGF组(CGF单独处理), 细胞分组后进行后续所有实验。应用活性氧、β-半乳糖苷酶染色和蛋白质印迹法对氧化应激模型进行验证。CCK-8和细胞划痕实验分别检测CGF对氧化应激状态下hDPSC增殖和迁移能力的影响;ALP及茜素红S染色检测CGF对氧化应激状态下hDPSC成骨分化能力的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测成牙相关基因mRNA的表达, 蛋白质印迹法检测成牙、成骨相关蛋白的表达。结果分离培养的hDPSC阳性表达间充质干细胞表面标志物CD90、CD105, 阴性表达造血干细胞表面标志物CD34、CD45;hDPSC具有成骨、成脂向分化能力和克隆形成能力。200 μmol/L H_(2)O_(2)为构建氧化应激模型的最适浓度。20%CGF为用于后续实验的最适CGF浓度。与对照组相比, H_(2)O_(2)组衰老蛋白p53表达从(0.82±0.12)显著上调至(1.19±0.14)(P<0.05), β-半乳糖苷酶染色加深、活性氧荧光强度增加。H_(2)O_(2)+CGF组在第1、3、5、7天的增殖能力(0.23±0.01、0.50±0.02、1.60±0.07、1.80±0.21)均显著高于H_(2)O_(2)组(0.15±0.01、0.14±0.02、0.50±0.03、0.90±0.09)(均P<0.05);且H_(2)O_(2)+CGF组在12、24 h的细胞愈合能力[(47±7)%、(58±44)%]也均显著高于H_(2)O_(2)组[(36±2)%、(44±2)%](均P<0.05), ALP活性和矿化结节形成增加;在第28天时H_(2)O_(2)组中成牙相关基因牙本质涎磷蛋白(DSPP)(0.52±0.16)、牙本质基质蛋白-1(DMP-1)的mRNA表达(0.39±0.13)均显著低于H_(2)O_(2)+CGF组(分别为0.96±0.24、0.83±0.30)和CGF组(分别为1.12±0.18、1.23±0.19)(均P<0.05);第28天时H_(2)O_(2)组成牙相关蛋白DMP-1(0.27±0.04)、成骨相关蛋白Runt相关转录因子2(0.42±0.15)的表达均显著低于H_(2)O_(2)+CGF组(分别为0.66±0.18、0.68±0.04)和CGF组(分别为1.15±0.13、1.06±0.19)(均P<0.05)。结论 H_(2)O_(2)能诱导hDPSC氧化应激模型, CGF能促进氧化应激状态下hDPSC的增殖、迁移和成牙、成骨向分化能力。

关键词： 创新实践能力   细胞生物学   OBE+BOPPPS混合式教学模式  

摘要： 文章主张在细胞生物学实验课程引入OBE+BOPPPS混合式教学模式,以实践能力培养为导向,以微课、慕课、大学生创新课题、教师科研项目等教学形式为载体,建立细胞生物学实验线上线下教学模式。这种教学模式能提高学生的主动参与性,提高学生的实践能力和创新能力。

关键词： 细胞生物学   科学能力培养   氧化应激   综合实验  

摘要： 设计了以“菊苣酸体外抑制氧化应激的药效学评价”为主题的细胞生物学开放性综合实验。以LPS诱导巨噬细胞RAW264.7构建炎症模型,通过CCK8法检测菊苣酸的细胞毒性并确定有效剂量;以ROS指示剂DCFH-DA染色为主线,结合全波长荧光酶标仪、荧光显微镜以及流式细胞术,并辅以DHE染色进行荧光显微镜观察评价菊苣酸抑制氧化应激的能力。该课程涵盖多学科实验技术,将基础实验与创新实验有机融合,在巩固基础知识的同时深化理解重点实验技术相关知识。为学生提供了一定的创新空间。

关键词： 细胞生物学   教学改革   课堂教学   成果导向教育   教学互动  

摘要： 教师优化课堂教学设计,通过课中发布围绕重难点知识精心设计的互动话题并适时开展随堂练习,积极开展细胞生物学课堂教学互动探索实践。调查结果表明,这种教学互动模式不仅能引导学生主动思考,提高了学生的课堂参与度,更重要的是促进他们对重难点知识的理解、掌握和运用能力,同时也能让教师在互动中了解学生对所学内容的理解掌握程度。这种教学互动模式为该课程的教学改革提供了参考。

关键词： 脂肪酸   炎症   脂滴   脂质组学   脂质   小胶质细胞   磷脂  

摘要： 脂质是一类重要的免疫调节小分子,在维持细胞健康与功能中发挥关键作用。作为中枢神经系统的常驻免疫细胞,小胶质细胞通过多种机制调控细胞外环境和细胞内的脂质代谢。例如,甘油磷脂和脂肪酸通过与细胞表面的髓系细胞触发受体2(TREM2)等蛋白受体相互作用,调控吞噬作用、细胞迁移等关键功能。胆固醇不仅是小胶质细胞存活的必需物质,与脂肪酸等其他脂类共同参与脂滴的形成、功能及累积过程,从而调控炎症性疾病中的小胶质细胞活性。酰基肉碱、神经酰胺等其他脂质则参与小胶质细胞内多种信号通路。尽管小胶质细胞脂质组具有高度复杂性,但迄今仅少数研究聚焦特定脂类对其生物学功能的调控机制。本综述系统梳理主要脂类及其对小胶质细胞功能的调控作用,介绍小胶质细胞脂质组表征的新兴分析技术,并指出现有研究的空白领域,为未来深入探索小胶质细胞脂质生物学提供方向指引。