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关键词： Notch3   骨肉瘤   增殖   凋亡   侵袭   迁移  

摘要： 目的观察Notch3在骨肉瘤细胞中的表达及下调Notch3表达后对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响,探讨Notch3在骨肉瘤细胞生物学功能中的作用。方法体外培养人骨肉瘤细胞MG63、Saos2、U2OS,采用Real-time PCR和Western blot检测3种骨肉瘤细胞系中Notch3的mRNA和蛋白表达水平;利用siRNA敲低Notch3在骨肉瘤U2OS细胞中的表达,并将细胞分为siNotch3组和阴性对照组,检测下调Notch3的表达后骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭、迁移等生物学特性的变化。结果Notch3在骨肉瘤细胞MG63、Saos2、U2OS中均呈阳性表达,并且在低级别骨肉瘤细胞系MG63中的表达明显低于高级别细胞系Saos2和U2OS(P<0.05),下调Notch3的U2OS细胞(siNotch3组)增殖、侵袭、迁移能力较阴性对照组减弱,凋亡率增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在骨肉瘤细胞U2OS中下调Notch3的表达可明显抑制细胞的增殖、侵袭、迁移能力,促进凋亡。Notch3可能是Notch通路在骨肉瘤中的关键受体之一,并参与了骨肉瘤的发生、发展。

关键词： 小胶质细胞   细胞生物学特性   神经元  

摘要： 小胶质细胞是常驻脑实质内免疫细胞,在生理状态下是高度动态的,表达多种免疫受体与神经递质受体,严格监控着中枢神经系统(CNS)微环境。近来大量研究揭示这类免疫细胞具有积极地调控神经元作用,其潜在的影响了神经元发生、突触修剪,调节突触可塑性,阻止神经毒性。小胶质细胞功能性变化对CNS的发育、成熟及退化有重要作用。

关键词： 乳牙牙髓干细胞   磁激活分选法   增殖   分化  

摘要： 目的:通过磁激活分选法(magnetically activated cell sorting,MACS)技术对人乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated teeth,SHED)进行分选,获得纯度较高的CD146阳性及阴性细胞亚群,比较其生物学特性。方法:用MACS技术对SHED进行CD146分选获得未筛选的混合细胞群、CD146阳性和阴性细胞亚群,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和集落形成实验(colony-forming unit,CFU)检测增殖能力;成骨诱导后进行茜素红染色,实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q PCR)检测成骨相关基因RUNX2、OCN、BSP表达;成脂诱导后进行油红O染色,q PCR检测成脂相关基因LPL、PPARG表达;成神经诱导后细胞免疫荧光检测神经细胞标志蛋白nestin、NeuN、GFAP,qPCR检测成神经相关基因nestin、MAP2表达。结果:CD146阳性和阴性细胞亚群的增殖能力都显著低于混合细胞群。混合细胞群、阳性细胞亚群、阴性细胞亚群的集落形成率分别为28.6%±3%、17.1%±2.3%和27.5%±2.5%。诱导后,阳性细胞亚群的矿化物沉积最多、成骨相关基因表达升高最显著;阴性细胞亚群的脂滴形成最多、成脂相关基因表达升高最显著;未分选混合细胞群和阳性细胞亚群胶质细胞标志蛋白阳性表达,而阴性细胞亚群的神经前体细胞和神经元标志蛋白和基因表达升高显著。结论:CD146阳性与阴性细胞亚群的增殖能力弱于混合细胞群;阳性细胞亚群的成骨潜能最佳,阴性细胞亚群具有更强的成脂分化潜能;混合细胞群与阳性细胞亚群倾向于胶质细胞分化,阴性细胞亚群神经前体细胞和神经元分化潜能更强。

关键词： 航天诱变   梅花鹿体细胞   生长曲线:核型  

摘要： 本研究以自主研发的聚偏二氟乙烯膜(PVDF)细胞培养技术进行了梅花鹿(Cervus nippon)体细胞的航天培养及生物诱变,并分析了其细胞在航天诱变后的生长曲线和核型特性。采用耳缘皮肤组织块贴壁培养的方法进行体细胞的原代培养;胰蛋白酶消化的方法完成细胞的传代培养;依照程序降温的方法完成细胞的冷冻保存;每天计数24孔板每孔的活细胞数并利用Excel 97-2003绘制出细胞的生长曲线,采用IBM SPSS Statistics 23统计软件回归分析程序中的非线性回归分析子程序Logistic曲线模型分析细胞生长曲线的拟合度;以常规染色体标本制备技术,利用细胞遗传工作站(AI)软件对梅花鹿体细胞的染色体核型进行分析。实验结果表明,新开发的PVDF膜细胞培养技术可有效保持梅花鹿体细胞在太空飞行过程中的存活并成功回收、传代建系。通过细胞传代培养观察发现,该体细胞经航天诱变后保持正常的成纤维细胞特征,生长曲线呈"S"型,航天诱变组体细胞在培养4 d进入对数生长期,与对照组体细胞在培养2 d进入对数生长期相比其细胞增殖速度减慢。拟合生长曲线分析表明,航天诱变组细胞生长拟合度值与对照组相似,但细胞增殖拐点时间、拐点细胞量分析结果证明,航天诱变后的体细胞增殖速度减慢。核型分析显示,航天诱变梅花鹿体细胞染色体数保持2n=66,染色体形态正常,核型为66(XX),其中32对常染色体,1对性染色体。本研究建立了哺乳动物在航天运行条件下的细胞培养PVDF新技术,并分析了航天诱变对于梅花鹿细胞生物学特性变化的影响,为以后进行相关研究提供了基础信息和技术支持。

关键词： 骨形态发生蛋白-4   诱导性多能干细胞   牙向分化   增殖  

摘要： 目的构建过表达骨形态发生蛋白-4(BMP4)基因的慢病毒载体,探讨其过表达后对小鼠诱导性多能干细胞(i PS)生物学活性的影响。方法采用慢病毒转染建立稳定过表达BMP4的i PS细胞株(BMP4过表达组),未作任何转染的细胞为空白组,转染慢病毒阴性对照组的细胞为空载体组。CCK8检测各组细胞增殖活性,碱性磷酸酶(ALP)活性检测细胞分化程度,荧光定量聚合酶链反应检测BMP4、成釉细胞蛋白(AMBN)、细胞角蛋白(CK)14、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨唾液酸蛋白(BSP)及骨细胞特异转录因子Runx2的mRNA表达。结果与空白组及空载体组相比,BMP4过表达组的细胞增殖活性及ALP活性升高(P<0.05),Runx2、AMBN、CK14、DSPP、BSPmRNA的表达增加(P<0.05)。结论 BMP4基因能够促进i PS的牙向分化。

关键词： 细胞生物学   基因组学   分子异质性   前列腺癌  

摘要： 前列腺癌在病理学、临床生物学及分子谱水平上表现出高度异质性。一些男性患有惰性前列腺癌,可以安全观察,而其他患者却罹患具有致命侵袭性的前列腺癌。在过去十年中,研究人员已开始揭示导致这些不同临床表型的基因组异质性,发现了不同的分子亚型,具有将前列腺癌从不了解且高度可变的异质性疾病转变为分子亚型集合的潜能。并且这些亚型的独特性已被用于预测临床结果,设计用于前列腺癌诊断的新型生物标志物,并开发新的治疗剂。本文就部分前列腺癌的分子亚型进行阐述,为将来研究前列腺癌的治疗方法提供线索。

关键词： 细胞生物学   本科教学   教学方法  

摘要： 细胞生物学是生物类专业的一门基础课程。该文针对如何提高细胞生物学教学效果这一问题,本文总结了教学过程中的几点尝试,包括通过优化细胞生物学理论课教学内容,新的教学方法探索,从而增强授课的生动性与趣味性,提高教与学的效果。

关键词： STC2基因   乳腺癌   增殖   凋亡   Notch1信号通路  

摘要： 目的:探讨斯钙素-2(STC2)基因在乳腺癌中的表达及抑制其表达对癌细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:RT-PCR及Western blot分别检测乳腺癌组织中STC2基因的mRNA及蛋白表达,并分析其与病理特征的关系;将STC2-siRNA转染人乳腺癌MCF-7细胞,另设空白对照组(Control)和阴性对照组(NC-siRNA),转染48 h后,Western blot检测各组细胞中STC2、ki67、细胞周期素(cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、Notch1、Hes1蛋白表达;CCK8检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:STC2基因在乳腺癌中的mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P<0.05);STC2基因表达与乳腺癌患者年龄、组织学分级及是否发生转移无关(P>0.05),与病理分期、肿瘤大小相关(P<0.05);NC-siRNA组STC2的蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P>0.05),STC2-siRNA组STC2的蛋白表达显著低于Control组(P<0.05);STC2-siRNA组细胞存活率、S期和G2/M细胞及ki67、cyclin D1、Notch1、Hes1蛋白表达显著低于Control组,细胞凋亡率、G0/G1期细胞及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于Control组(P<0.05)。结论:STC2基因在乳腺癌中高表达,其表达与病理分期和肿瘤大小相关,抑制其表达可降低癌细胞的增殖,阻滞细胞于G1期,并诱导细胞凋亡,其机制与下调ki67、cyclin D1和上调Cleaved caspase3表达及下调Notch1信号通路有关。

关键词： OCT4A基因   K562细胞   白血病   细胞凋亡  

摘要： 目的:探讨OCT4A基因体外对K562细胞生物学行为的影响及与凋亡相关的分子机制。方法:克隆人OCT4A基因,构建靶向上调及下调OCT4A基因与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组慢病毒表达载体p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA,三质粒包装系统包装病毒,并测定滴度。实验分为空白对照、p LVX空质粒、p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA和非特异sh RNA共5组。Western-blot检测各组OCT4A蛋白表达。CCK-8法绘制各组细胞增殖曲线。采用Annexin V/7-AAD标记流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞分化抗原CD11b和CD15表达;实时定量PCR检测caspase3、BIM、BCL-x L和BAX m RNA表达变化。结果:成功克隆人OCT4A基因,并成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA。Western blot证实2种病毒感染后可分别有效上调及下调OCT4A蛋白的表达。CCK-8法检测显示,p LVX-OCT4A-Zs Green1组K562细胞体外增殖活性明显升高,而p LVX-OCT4A sh RNA组K562细胞增殖活性显著降低(P<0.05)。感染后p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA 2组K562细胞凋亡率分别为(3.48±0.52)%和(7.25±0.57)%(P<0.05),而OCT4A过表达及抑制后细胞表面分化抗原CD15、CD11b的表达无明显变化。OCT4A上调后Caspase-3、BIM、BAX较对照组均下调,但差异无统计学意义(P>0.05),而BCL-x L基因表达则明显升高(P<0.01)。结论:成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1及PLB-OCT4A sh RNA,它们可分别有效地上调及下调OCT4A蛋白表达。OCT4A基因可促进K562细胞的增殖、抑制凋亡,其抑制凋亡机制可能与BCL-x L基因上调有关。

关键词： 细胞生物学实验   开放式教学   能力培养  

摘要： 细胞生物学是现代生命科学的基础和前沿性学科,在生命科学教育中占有核心地位。人才综合素质靠加强综合训练来培养,而创新实践能力则主要靠加强实验教学和实践训练。在本研究中,笔者尝试对本校本科生细胞生物学实验课程教学方法进行革新,打破以往单一的实验教学模式,采用开放式实验教学模式,在全面优化实验教学内容的基础上,进一步完善了适应于开放式教学的实验室条件,建立了新的实验考核制度。通过近三年的实践,学生的学习热情显著提高,创新意识和实践能力均显著增强,同时也提升了学生就业、考研等方面的综合竞争能力。本研究成效明显,可为深入探索行之有效的生命科学实践教学模式提供参考。