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关键词： 斑石鲷   细胞系   原代培养:传代培养  

摘要： 斑石鲷(Oplegnathus punctatus),是一种具有极高经济价值的海水养殖鱼类,尚未见其细胞系建立的相关报道。本研究以斑石鲷肌肉、脑组织为材料,采用组织块移植培养技术,建立了斑石鲷肌肉、脑细胞系,分别定名为OPPM、OPPB。斑石鲷肌肉细胞系已传至183代,脑细胞系已传至174代,细胞均为成纤维样细胞。OPPM细胞最适培养温度为28℃,OPPB细胞最适培养温度为26℃。在FBS浓度为10%~20%条件下细胞生长旺盛。对OPPM、OPPB分别提取DNA进行18SrRNA基因片段特异性扩增,均获得819bp DNA片段,与斑石鲷18SrRNA序列进行比对,一致性达99.6%,表明该细胞起源于斑石鲷,而染色体分析表明两个细胞系染色体数目和核型均出现不同程度变异。OPPM细胞与OPPB细胞液氮冷冻保存10个月后,复苏后经台盼蓝细胞染色,约91.2%、86.7%细胞具有活性,且复苏后增殖速度快,可正常传代。使用脂质体转染法将pEGFP-C1质粒转染至OPPM、OPPB,可高效表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)。OPPM和OPPB细胞系的建立将为斑石鲷免疫学研究及基因功能研究奠定基础。

关键词： 生物分子   中国科学院大连化学物理研究所   模拟应用   分子动力学模拟   胶质瘤细胞   底物结合   细胞生物学   磷酸化  

摘要： 中国科学院大连化学物理研究所李国辉研究员团队与上海生物化学与细胞生物学研究所杨巍维研究员团队合作,通过分子动力学模拟的手段,解释了胶质瘤细胞中关键氨基酸的磷酸化过程对肿瘤细胞生长的影响,相关结果发表于Molecular Cell。运用分子动力学模拟的方法,针对T243磷酸化前后P G K1与底物结合的分子机制进行研究,并发现T243的磷酸化影响了另一关键氨基酸(K216)的侧链朝向,进而对PGK1和底物结合的关键相互作用产生影响,导致磷酸化前后底物与P G K1亲和力发生明显变化。这一发现,从分子层面对实验结果进行了验证,并为胶质瘤治疗的新策略提供了详细的理论依据。

关键词： 人类早期胚胎   植入前胚胎   团队合作   院士   北京大学第三医院   生命科学学院   细胞生物学   研究团队  

摘要： 6月18日，北京大学第三医院乔杰院士研究团队和北京大学生命科学学院汤富酬教授研究团队合作，在《自然细胞生物学》杂志（IF=20．06）在线发表了人类植入前胚胎多组学研究新进展——“人类早期胚胎的单细胞多组学测序”。

关键词： 胶质瘤   增殖   凋亡   侵袭   塞来昔布  

摘要： 目的观察塞来昔布对胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力影响。方法噻唑蓝（MTT）法检测胶质瘤细胞U251、T98G、U87经过0、20、40、60 μmol/L的塞来昔布药物作用24、48、72、96 h后的细胞增殖情况，同时检测正常的星型细胞HA经塞来昔布作用后的细胞增殖。流式细胞仪检测40 μmol/L的塞来昔布作用48 h后的胶质瘤细胞U251凋亡。细胞划痕实验检测40 μmol/L的塞来昔布作用48 h后的胶质瘤细胞U251迁移。Transwell小室检测40 μmol/L的塞来昔布作用16 h后的胶质瘤细胞U251侵袭情况。Western blot检测细胞中环氧化酶-2（COX-2）、B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白（bax）、基质金属蛋白酶（MMP）-9、MMP-2水平。结果塞来昔布对胶质瘤细胞增殖具有抑制作用，对正常的星型细胞无明显的抑制作用。塞来昔布对胶质瘤细胞增殖抑制作用随着作用时间的增加而增加，随着药物作用浓度的增加而增加。经40 μmol/L的塞来昔布药物作用后的胶质瘤细胞凋亡率高于对照组[（3.17±0.16）%比（16.08±1.57）%，t＝14.169，P＝0.000]。经40 μmol/L的塞来昔布作用后的胶质瘤细胞U251的迁移率明显低于对照组[（100.00±5.26）%比（41.28±5.84）%，t＝12.940，P＝0.000]。塞来昔布作用后的胶质瘤细胞U251的侵袭能力明显低于对照组[（229.5±11.36）个比（97.32±7.95）个，t＝16.512，P＝0.000]。塞来昔布作用后的胶质瘤细胞中COX-2、bcl-2、MMP-9、MMP-2的水平较对照组比较明显下降，塞来昔布作用后的胶质瘤细胞中bax的水平较对照组比较明显升高（t1＝19.696，P1＝0.000；t2＝17.774，P2＝0.000；t3＝12.970，P3＝0.000；t4＝10.569，P4＝0.001）。结论塞来昔布可以抑制胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力，促进胶质瘤细胞凋亡，其作用机制与COX-2、bax、bcl-2、MMP-9、MMP-2有关。

关键词： 骨髓细胞   睾丸细胞   染色体制备  

摘要： 染色体制备技术是细胞生物学的一项核心基础技术,也是高校细胞生物学实验常开的一项实验。然而染色体制备技术复杂,操作环节多,耗时长,影响因素多,在实际实验中获得理想染色体的成功率很低,因此需要进一步改进优化,提高成功率,使学生真正掌握染色体标本的制备技术,了解染色体的数目以及形态特征。本文比较了利用小鼠骨髓和睾丸细胞制备染色体的优劣,并讨论了染色体制备过程中的注意事项和改进方法。

关键词： 尾型   脂尾   脂肪沉积   脂肪间充质干细胞  

摘要： 为适应不同环境,绵羊经过长期的适应性选择形成了尾型不同的品种。脂尾型绵羊尾部较高的脂肪沉积能力使其具有较好的抗逆性,但过多的尾脂沉积已不符合当今的育种需要。绵羊的脂尾和瘦尾是由环境和基因共同决定的复杂性状,而尾部脂肪沉积又与尾部脂肪组织中脂肪间充质干细胞的增殖与成脂分化相关。本文重点讨论可能决定绵羊尾部脂肪沉积的遗传机制及影响脂肪间充质干细胞生物活性的因素,对有关绵羊尾部脂肪沉积基因组学研究及脂肪沉积相关的细胞分化的调控机制进行综述,为脂尾型绵羊脂尾(脂臀)性状的改良奠定理论基础。

关键词： 睾丸肿瘤   畸胎瘤   维甲酸  

摘要： 目的 探讨全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）对人睾丸畸胎瘤NCCIT细胞的增殖、迁移和分化的影响及其相关分子机制.方法 选取人睾丸畸胎瘤细胞系NCCIT为研究对象.分别采用MTT和Transwell小室检测细胞的增殖和迁移变化;ELISA法检测细胞产生TGFβ1的变化;Western blot检测细胞内PI3K/Akt通路及其下游关键蛋白表达的影响.结果 ATRA显著抑制NCCIT细胞的增殖和迁移,并下调培养液上清中的TGFβ1;ATRA显著下调PI3K/Akt磷酸化及其下游蛋白Ecadherin、Occludin、MMP-2和-9的表达水平.而ATRA细胞核受体RXR和PI3K/Akt通路抑制剂,分别拮抗ATRA对NCCIT细胞增殖和迁移的抑制效应,并抑制ATRA对细胞的促分化作用.结论 ATRA参与抑制人睾丸畸胎瘤细胞的增殖和迁移并促进其分化,其机制可能是通过激活细胞核受体RXR进而调控PI3K/Akt通路来发挥作用的.

关键词： 多发性骨髓瘤   双歧杆菌脂磷壁酸   骨髓间充质干细胞   白细胞介素-17   白细胞介素-6  

摘要： 目的探讨双歧杆菌脂磷壁酸对多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞增殖及细胞因子分泌情况的影响。方法应用密度-梯度离心法分别获取多发性骨髓瘤患者及对照组骨髓间充质干细胞,应用流式细胞仪确定间充质干细胞表型,EDU法和ELISA法分别检测不同质量浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、6.0g/L)的双歧杆菌脂磷壁酸共培养后的骨髓间充质干细胞增殖率及培养液上清中IL-17及IL-6含量变化。结果多发性骨髓瘤患者与对照组骨髓间充质干细胞的形态及表型表达完全相同,当双歧杆菌脂磷壁酸干预质量浓度为1.0g/L和2.0g/L时,多发性骨髓瘤组间充质干细胞的增殖率显著高于正常对照组(P<0.05),质量浓度为4.0g/L和6.0g/L时,细胞增殖率反而显著低于正常对照组(P<0.05)。多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞的IL-17和IL-6水平均显著高于正常人,应用0.5、1.0、2.0和4.0g/L双歧杆菌脂磷壁酸干预后,其细胞因子的表达水平显著下降(P<0.05)。结论一定质量浓度的双歧杆菌脂磷壁酸可以促进多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞的增殖且降低其IL-17和IL-6的表达水平。

关键词： 豹猫   成纤维细胞   细胞生长曲线   冷冻存活率   核型  

摘要： 研究体外培养豹猫(Prionailurus bengalensis)细胞的形态、细胞贴壁率、冷冻存活率、生长曲线及细胞核型等生物学特性,为深入开展豹猫基因组学及濒危野生动物保护提供依据。本实验选择豹猫3种组织,即剑状软骨、心和肺,采用组织块贴壁培养法进行体细胞的原代培养;酶消化法完成细胞的传代培养;程序降温完成细胞的冷冻保存;通过细胞计数法计数细胞冷冻存活率;绘制细胞生长曲线;采用常规染色体标本制备技术,对豹猫的染色体核型及G带进行分析。细胞原代培养结果显示,剑状软骨组织在培养第3天出现纤维样细胞、培养6~7 d铺满培养瓶;心组织在培养第5天出现上皮样细胞、12 d铺满培养瓶;肺组织在培养4 d后出现成纤维细胞、8~9 d铺满培养瓶。3种来源体细胞均显示成纤维细胞特征,剑状软骨源细胞最易贴壁、肺源细胞次之、心源细胞最弱。对比3种不同来源体细胞从6代(P6)至12代(P12)冷冻存活率,剑状软骨源细胞冷冻存活率显著下降(冻存前91.0%~97.6%,冻存后76.8%~85.5%,P<0.05),心源细胞冷冻存活率亦显著下降(冻存前82.7%~88.1%,冻存后43.7%~80.5%,P<0.05),肺源细胞冷冻存活率有下降趋势,但无显著差异(冻存前83.4%~96.8%,冻存后73.9%~93.3%,P>0.05)。生长曲线分析显示,3种体细胞均呈"S"型,其中剑状软骨源细胞增殖最快、肺源细胞次之、心源细胞最慢。核型分析结果显示,3种不同来源的成纤维体细胞染色体数目均为2n=38,18对为常染色体,形态类型为6m+10sm+2st,1对为性染色体,X染色体形态类型为m。本研究建立了3种组织来源的豹猫成纤维细胞建系技术及体细胞系,揭示了该物种成纤维细胞的基本生物学特性,为动物遗传信息研究及豹猫保护提供了重要的实验材料和基础信息。

关键词： 新小杆线虫,漂亮   嗅觉   分子生物学   神经元   综述  

摘要： 嗅觉适应是动物的一项重要生理功能,可以保护自身细胞免受过度刺激,进而更好地应对周围环境变化。目前发现秀丽隐杆线虫嗅觉适应性主要与嗅觉神经元胞内信号分子和感受蛋白有关,如AWC神经元区域特异性环鸟苷酸(c GMP)反应、瞬时受体电位香草酸亚型(TRPV)离子通道蛋白OSM-9、细胞质基质抑制蛋白ARR-1和G蛋白信号通路中的甘油二酯(DAG)通路等均可以调控嗅觉适应,而神经环路方面的嗅觉适应性研究甚少。本文总结回顾了线虫嗅觉适应有关的分子细胞生物学机制,以期为高等生物嗅觉的研究提供参考。