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关键词： 医学细胞生物学   实验教学   设计性实验  

摘要： 文章论述了医学细胞生物学设计性实验教学的必要性,探讨了医学细胞生物学设计性实验教学的原则,分析了医学细胞生物学设计性实验教学的流程和医学细胞生物学设计性实验教学需要加强的环节,提出了医学细胞生物学设计性实验教学的实践体会。

关键词： 癌,肾细胞/病理生理学   微RNAs   细胞增殖   细胞迁移分析  

摘要： 目的观察微小RNA-613(miR-613)对人肾细胞癌细胞生物学行为的影响,并探究其分子机制。方法分别将合成的miR-613模拟物(mimics)和miR-NC通过Lipofectamine 3000转入786-0细胞中,分为观察组和对照组。实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测2组细胞中miR-613的表达量验证转染是否成功。噻唑蓝(MTT)法检测786-0细胞增殖,Transwell细胞迁移实验检测786-0细胞迁移。生物信息学预测miR-613的靶基因。双荧光素酶报告实验验证miR-613与靶基因之间的靶向关系及结合位点。qPCR和免疫印迹法(Western blot)检测靶基因的表达水平。结果 qPCR检测结果显示观察组中miR-613的表达量(16. 22±1. 08)显著高于对照组(1. 06±0. 20),差异有统计学意义(P<0. 01)。MTT结果显示观察组细胞在转染后的4、5 d时间点均表现出吸光度值降低(P<0. 05)。Transwell细胞迁移实验结果显示,对照组和观察组细胞从Transwell上室迁移到下室的细胞数分别为(199. 10±22. 74)个和(95. 55±17. 88)个,差异有统计学意义(P <0. 05)。生物信息学预测miR-613的靶基因为皮层肌动蛋白(CTTN)。双荧光素酶报告实验验证miR-613能够靶向调控CTTN基因(P<0.05)。转染后观察组细胞中CTTN mRNA及蛋白的表达量显著低于对照组(P<0.01)。结论上调miR-613的表达可抑制肾细胞癌细胞的增殖和迁移能力,其可能的分子机制是miR-613靶向抑制CTTN基因的表达。

关键词： miR-29   CDK6细胞   宫颈肿瘤   细胞增殖   细胞生物学  

摘要： 目的探讨miR-29靶向调控细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)对宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法收集20例接受手术且术前未行任何治疗的宫颈癌患者肿瘤组织和癌旁正常组织,经细胞培养生长至80%左右时消化细胞进行传代和冻存。行定量实时聚合酶链反应检测miR-29在宫颈癌组织与癌旁正常组织中的表达差异;行四甲基偶氮唑盐比色实验检测miR-29对宫颈癌细胞增殖能力的影响,平板克隆实验检测miR-29对宫颈癌细胞凝聚功能的影响;行双荧光素酶实验观察miR-29对CDK6转录活性的影响。结果miR-29在宫颈癌组织中表达较癌旁正常组织显著降低[(1.23±0.45)vs(1.91±0.35),P<0.001];LVmiR-29和LV-miR-Ctrl转染Hela、Siha细胞后,MTT实验证实miR-29显著抑制Hela、Siha细胞的增殖能力,平板克隆实验证实miR-29显著抑制Hela、Siha细胞的凝聚能力;双荧光素酶实验结果显示miR-29和CDK6之间有直接的结合位点,miR-29靶向调控CDK6的转录活性。结论 miR-29通过靶向调控CDK6可抑制宫颈癌细胞的增殖和凝聚能力,可能作为新的宫颈癌靶向标志物。

关键词： 羟考酮   结直肠肿瘤   细胞凋亡   细胞增殖   细胞迁移  

摘要： 目的探讨羟考酮对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞生物学行为的影响。方法选择人CRC SW620细胞接种并孵育24 h后,分别以0、10、20和40μg/ml羟考酮处理24 h,然后使用CCK-8试剂盒孵育后,酶标仪板在490 nm波长下测量不同浓度组的光密度值,比较细胞增殖抑制率差异;采用流式细胞术FITC-Annexin V/PI检测不同浓度羟考酮对SW620细胞凋亡的影响;行划痕实验检测不同浓度羟考酮对SW620细胞迁移的影响;采用酶联免疫吸附法检测不同浓度羟考酮对SW620细胞中血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果相较于对照组(未经羟考酮处理组),10、20、40μg/ml羟考酮处理组SW620细胞增殖能力受到显著抑制。20和40μg/ml羟考酮处理组SW620细胞凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(t=12.64,P=0.019;t=13.94,P=0.016)。20和40μg/ml羟考酮处理组SW620细胞迁移距离比例显著低于对照组(t=11.29,P=0.036;t=12.05,P=0.009)。20和40μg/ml羟考酮处理组SW620细胞VEGF表达水平显著低于对照组(t=12.62,P=0.031;t=13.61,P=0.013)。结论羟考酮能以剂量依赖的方式对CRC细胞的增殖和迁移起到抑制作用,抑制VEGF的产生和分泌,同时还能诱导细胞的凋亡。

关键词： 动物生物学   竞赛试题   奥林匹克   国际   生物系统学   细胞生物学   动物行为学   进化生物学  

摘要： 理论考试B共3h。1-11题：动物生物学；12~14题：生物系统学；15~23题：细胞生物学；24~29题：生态学；30—31题：动物行为学；32~41题：遗传与进化生物学；42～49题：植物生物学。

关键词： 稳态强磁场   细胞取向   细胞增殖   细胞类型  

摘要： 随着科学技术的发展以及稳态强磁场在医疗诊断中的广泛应用,人们接触到1 T以上稳态强磁场的机会越来越多,稳态强磁场对人体健康的潜在影响也备受关注.虽然目前由于实验条件的限制,稳态强磁场对动物以及人体的研究报道依然有限,但是细胞作为生物体的基本单位,其研究相对较多.然而由于实验中磁场参数、细胞类型等各种因素的不同,使得稳态强磁场对细胞的影响在不同的研究中存在着差异.因此,本文不仅总结和分析了国内外1 T以上稳态强磁场细胞生物学效应的相关研究,包括细胞取向、增殖、微管和纺锤体等,而且对现有研究结果进行比较和概括,并对可能造成实验差异的因素进行分析,例如磁场强度和细胞类型等,从而为下一步研究稳态强磁场下的细胞生物学效应提供基础和依据.

关键词： ciRS-7   食管鳞状细胞癌(ESCC)   增殖   TE1   细胞   迁移   侵袭  

摘要： 目的:探讨环状RNA(circ RNA)ciRS-7在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及对ESCC细胞株增殖、迁移和侵袭的影响。方法:选取河北医科大学第四医院2016年5月至2017年4月收治的60例食管癌患者病理组织标本及配对癌旁组织,通过q RT-PCR检测ciRS-7的表达水平。过表达或者敲低ciRS-7后,采用CCK-8法检测ESCC细胞株TE1的增殖情况,同时采用划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化。最后通过动物实验在体内进行验证。结果:ciRS-7在ESCC组织中高表达,且表达水平与病理分级和淋巴结转移有关(均P<0.05)。过表达ciRS-7后,ESCC细胞株TE1的增殖、迁移和侵袭能力显著升高(均P<0.05);沉默ciRS-7后,TE1细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(均P<0.05)。动物实验结果显示,转染ciRS-7表达质粒组裸鼠的肿瘤体积和质量均明显高于空载体组(均P<0.05)。免疫组化检测结果表明,转染ciRS-7表达质粒组裸鼠的肿瘤组织中增殖相关抗原(ki67、PCNA)、转移相关抗原(MMP2、MMP9)表达明显高于空载体组(均P<0.05)。结论:ciRS-7在食管癌组织中表达上调,并且会增强食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,提示ciRS-7可以作为诊断和治疗食管鳞状细胞癌的潜在作用靶点。

关键词： 结直肠癌   p66SHC基因   HCT116细胞   上皮细胞间充质化  

摘要： 目的探讨干扰p66shc基因表达对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移、迁移的影响。方法实验分为对照组(不做任何处理)、NC-siRNA组和p66SHC-siRNA组,NC-siRNA组、p66SHC-siRNA组通过Lipofectamine 2000将特异性siRNA转染入结直肠癌HCT116细胞中。荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中p66SHC的表达量;四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell法观察细胞迁移、侵袭的变化;Western Blot检测细胞EMT相关蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)的水平。结果采用siRNA干扰HCT116细胞中p66SHC蛋白的表达后,细胞的增殖能力显著下降(P<0.05),明显抑制细胞侵袭、迁移能力(P<0.05),E-cadherin蛋白的水平明显上调(P<0.05),Vimentin、N-cadherin蛋白的表达水平显著下调(P<0.05)。结论干扰p66SHC基因的表达能阻碍EMT的发生,从而降低结直肠癌细胞的增殖、侵袭以及迁移能力。

关键词： 医学细胞生物学   开放性实验   教学改革  

摘要： 医学细胞生物学是临床医学和预防医学专业的重要基础课,该课程内容丰富、知识更新快,但传统的实验教学内容单一陈旧,难以激发学生的学习兴趣。教研室针对课程特点,结合宁波大学医学院实际情况,在临床医学和预防医学本科生中,以动物细胞分离、提取、培养及应用为题,进行医学细胞生物学开放性实验的教学实践。文章就实施内容、效果与反思两个方面对这一尝试进行讨论和总结。

关键词： 宫颈肿瘤   细胞系   肿瘤   微RNAs   细胞凋亡  

摘要： 目的 探讨慢病毒介导的微小RNA（miR）-1246表达下调后，对子宫颈癌细胞系SiHa细胞生物学行为的影响，以及对其下游蛋白表达的调控作用。 方法 针对人miR-1246的靶序列合成含有反向互补序列的寡核苷酸片段并克隆至慢病毒载体，构建重组慢病毒 LV-miR-1246-抑制物（inhibitor）。实验分为3组，即抑制组（感染重组慢病毒LV-miR-1246-inhibitor）、阴性对照组（LV-NC组，感染空载体病毒颗粒）和空白对照组（NC组，无干预措施仅加培养基）。采用逆转录（RT）-PCR技术检测3组SiHa细胞中miR-1246的表达水平，活细胞计数（CCK-8）法、体外侵袭实验、流式细胞仪分别检测3组SiHa细胞的增殖、侵袭、凋亡情况。建立子宫颈癌裸鼠移植瘤模型，观察miR-1246表达下调对移植瘤生长的影响，蛋白印迹（western blot）法检测3组裸鼠移植瘤组织中血小板反应蛋白2（THBS2）及基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP-9蛋白的表达。 结果 （1）miR-1246表达：抑制组SiHa细胞中miR-1246表达水平（0.11±0.13）明显低于LV-NC组、NC组（分别为1.14±0.86、1.30±0.73，P〈0.01）。（2）增殖能力：培养不同时间（分别为24、48、72、96 h）后，抑制组SiHa细胞的A值均明显低于LV-NC组、NC组，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0.01）。（3）侵袭能力：抑制组的穿膜细胞数［（71±4）个］明显少于LV-NC组、NC组［分别为（162±5）、（188±5）个，P〈0.01］。（4）细胞凋亡率：抑制组SiHa细胞凋亡率［（16.10±3.37）%］明显高于LV-NC组、NC组［分别为（5.67±0.89）%、（1.78±0.08）%，P〈0.01］。（5）移植瘤体积：抑制组裸鼠移植瘤体积［（287±59）mm 3 ］明显小于LV-NC组、NC组［分别为（571±137）、（657±144）mm 3 ，P〈0.01］。（6）与LV-NC组、NC组比较，抑制组裸鼠移植瘤组织中THBS2蛋白的表达水平明显升高（P〈0.05），而MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平明显下降（P〈0.01）。 结论 子宫颈癌SiHa细胞中miR-1246的表达下调后，抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、降低细胞侵袭能力；其机制可能是通过上调THBS2蛋白的表达，进一步影响MMP的表达而实现。