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关键词： 细胞生物学   实验教学   能力培养   教学改革  

摘要： 传统的细胞生物学实验以验证性实验为主,主要课程目标是对理论课知识的验证和基本操作的学习。为提高人才培养质量,推动实验课教学改革,针对"开设什么样的实验课""怎样开展实验教学"等问题,根据细胞生物学的学科发展,对细胞生物学基础实验课程进行了改革。课程以"能力培养"为核心目标,以认知、情感两个目标层次为支撑,转变原有的教学理念,匹配教学所需的资源,更新教学内容,摸索、实践相应的教学模式,形成了一套较为系统、具体、实操性强的教学方案,进一步拓展了实践教学改革的空间。

关键词： 快速原子力显微镜   细胞生物学   动态变化   DNA构象  

摘要： 快速原子力显微镜在不损失高分辨率的情况下,其扫描速度与检测精度达到了完美结合,在细胞和分子水平上实现了对生物体系动态过程的实时表征。这种超高时间分辨率和空间分辨率的结合,以及与其它先进技术的联用,为细胞生物学等生命科学领域的研究展现了诱人的前景。本文对快速原子力显微镜在细胞生物学领域的新进展进行了综述,包括环境因素对DNA构象的影响、DNA与蛋白质结合的过程、膜蛋白结构域的变化、肌球蛋白的运动、活细胞表面结构的变化等。

关键词： 胃癌   叉头盒转录因子M1   葡萄糖转运蛋白1   糖代谢  

摘要： 目的观察叉头盒转录因子M1（FOXM1）通过调控葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）的表达对胃癌细胞的糖代谢、细胞增殖和凋亡的影响。方法Western blot和实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测胃癌细胞（AGS、SGC-7901）和正常胃黏膜细胞（GES-1）3株细胞中FoxM1、GLUT1的蛋白及mRNA的表达。转染FoxM1过表达载体和小干扰RNA（siRNA）感染序列至胃癌细胞，检测FoxM1和GLUT1表达及细胞对葡萄糖的摄取变化。细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖活力，流式细胞凋亡检测分析细胞凋亡，并与阴性转染细胞比较。结果AGS、SGC-7901细胞中FoxM1 mRNA的相对表达量为2.624±0.167、3.023±0.159（t=16.686，P=0.004；t=21.810，P=0.002），GLUT1 mRNA的相对表达量为3.582±0.237、3.867±0.285（t=18.700，P=0.003；t=17.315，P=0.003），均明显高于正常胃黏膜细胞。FoxM1蛋白在AGS、SGC-7901的表达量2.852±0.271、2.533±0.243（t=11.814，P=0.007；t=10.900，P=0.008）较GES-1中1.000±0.017明显升高。GLUT1蛋白在AGS、SGC-7901的表达量3.716±0.316、3.367±0.335较GES-1中1.000±0.021明显升高（t=14.854，P=0.005；t=12.214，P=0.007）。转染FoxM1过表达载体后AGS、SGC-7901两组胃癌细胞中GLUT1的表达明显升高，糖摄取量增加（t=3.242，P=0.048；t=3.964，P=0.029）。AGS转染后48 h和72 h促进细胞增殖（t=10.062，P=0.002；t=6.466，P=0.008），抑制细胞凋亡[（1.36±0.29）%比（3.16±0.32）%，t=－7.219，P=0.006]。转染FoxM1 siRNA感染序列后两组胃癌细胞中GLUT1的表达明显降低，糖摄取量减少（t=－4.217，P=0.024；t=－3.879，P=0.030）。AGS转染后48 h和72 h抑制细胞增殖（t=－10.280，P=0.002；t=－12.530，P=0.001），促进细胞凋亡[（8.02±0.69）%比（3.03±0.26）%，t=11.722，P=0.007]。结论FoxM1调控GLUT1表达促进胃癌细胞葡萄糖摄取和细胞增殖，抑制细胞凋亡。

关键词： SOX7   胆囊癌   PTEN   增殖  

摘要： 目的探讨过表达SOX7(Sex determining region Y-box 7)基因对胆囊癌GBC-SD细胞株增殖、凋亡的影响及其可能涉及的细胞信号通路。方法用特异性的重组质粒pc DNA3.1-SOX7作为实验组转染GBC-SD细胞建立稳定过表达SOX7基因的细胞,空载体pc-DNA3.1-mock作为对照组。采用Edu细胞荧光染色法检测过表达SOX7基因对GBCSD细胞增殖的影响,同时采用Hoechst 33342细胞染色法检测GBC-SD细胞的凋亡。Western blot检测相关信号通路蛋白的表达。结果实验组中SOX7 mRNA的相对表达量为(353.0±28.1)%,相对于对照组(100.0±2.3)%表达明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组细胞在450 nm吸光度值为(4.6±0.4),较实验组(2.4±0.2)明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。Edu免疫荧光染色结果表明,对照组细胞增殖比例(33.3±3.4)%高于实验组(12.2±4.2)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Hoechst 33342细胞凋亡荧光染色结果表明,对照组细胞凋亡比例(5.2±1.3)%较实验组(10.2±2.4)%降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot实验结果表明,对照组PTEN蛋白的相对表达量为(0.2±0.02),而实验组的相对表达量为(0.7±0.04),对照组磷酸化Akt的相对表达量为(0.8±0.03),而实验组为(0.4±0.02),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论过表达SOX7基因能显著抑制胆囊癌细胞GBC-SD的增殖,导致其凋亡增加。PTEN/Akt信号通路的激活可能与之有关。

关键词： 人乳头瘤病毒   宫颈鳞癌   增殖   迁移   糖原合成酶激酶-3β  

摘要： 目的:探讨人乳头瘤病毒16(HPV16)的致癌基因E6、E7对宫颈鳞癌细胞C33A生物学行为的影响及其机制。方法:构建HPV16 E6、E7及E6/E7重组质粒,流式细胞术检测转染前后细胞周期的变化;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;克隆形成实验检测细胞的增殖能力;qPCR和Western blot检测相关基因和蛋白表达水平。结果:HPV16 E7重组质粒可引起宫颈鳞癌细胞S期比例显著增加(P<0.01),HPV16 E6、E7和E6/E7重组质粒能显著增强宫颈鳞癌细胞C33A的迁移能力(P<0.05),同时细胞的克隆形成能力也显著增强(P<0.05)。HPV16 E6重组质粒可显著上调细胞糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)mRNA水平(P<0.05);HPV16 E6、E7重组质粒可在24 h内引起GSK3β磷酸化水平升高,同时调控下游靶基因Cyclin D1和β-catenin在不同时间点的表达发生变化。结论:HPV16 E6、E7在较短时间(24 h内)可通过GSK3β蛋白磷酸化激活,发挥对GSK3β下游靶基因Cyclin D1、β-catenin基因的调控作用,从而促进宫颈鳞癌细胞的增殖、迁移及侵袭。

关键词： 柯里拉京   U251细胞   胶质瘤   细胞凋亡   迁移  

摘要： 目的观察柯里拉京(Corilagin)对人脑胶质瘤细胞U251生物学特性的影响。方法体外培养U251细胞,应用200μg/ml的柯里拉京分别干预U251细胞24、48和72h后收集细胞,应用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测药物干预前后细胞凋亡活性变化;细胞划痕实验检测200μg/ml Corilagin对U251细胞迁移能力的影响。结果 Corilagin可促进U251细胞的凋亡,U251细胞凋亡率随着培养液中Corilagin培养时间的延长而增加(P<0.05);Corilagin可抑制U251细胞的迁移,200μg/ml Corilagin的培养液培养24、48和72h后U251细胞迁移度均低于对照组(P<0.05)。结论 Corilagin对U251细胞有显著的体外细胞毒性作用,能有效促进U251细胞的凋亡和减弱U251细胞的迁移,但其具体的作用机制还有待进一步研究。

关键词： 非编码RNA   GAS5   肝细胞癌   细胞周期调控蛋白  

摘要： 目的探究生长特异性调节转录因子5(GAS5)在肝癌组织表达及GAS5小干扰RNA(siRNA-GAS5)转染对HepG2肝癌细胞的侵袭增殖的影响,并进一步分析其可能的调控机制。方法选取手术肝癌切除的癌组织及其癌旁组织20例,qRT-PCR检测肝癌及其癌旁组织长链非编码RNA GAS5(GAS5)表达以及Western blot检测周期依赖性蛋白激酶6(CDK6)表达。利用脂质体转染siRNA-GAS5干扰HepG2细胞株中GAS5表达水平,划痕实验、Transwell和CCK-8检测转染后HepG2细胞的迁移、侵袭及增殖能力,流式细胞仪检测干扰后HepG2细胞凋亡周期变化。Western blot、qRT-PCR验证细胞周期调控蛋白周期素D1(Cyclin D1)、CDK6、E2F-1表达。结果肝癌组织中GAS5表达水平低于对应癌旁组织,CDK6表达高于癌旁组织。转染siRNAGAS5的HepG2细胞迁移侵袭增殖能力明显增强。转染siRNA-GAS5的HepG2细胞Cyclin D1、CDK6、E2F-1蛋白表达下降,干扰后的HepG2细胞周期发生G1/S期改变。结论GAS5在肝癌组织的表达出现下调;GAS5可明显抑制肝癌细胞迁移、侵袭及增殖能力;GAS5调控肝癌细胞周期变化可能是通过Cyclin D1/CDK6/E2F-1通路。

关键词： 地外生命   俄罗斯科学院   DNA测序   细胞生物学   西伯利亚   生命痕迹   科学家   研究所  

摘要： 俄罗斯科学院发布消息称，俄罗斯科学院西伯利亚分院分子与细胞生物学研究所的科学家发现了DNA测序新方法。利用该方法，可以在宇宙中的冰质行星上探索地外生命。该研究将有助于发现南极冰层和木卫二欧罗巴上的生命痕迹。

关键词： 永生化人肝细胞   永生化人肝窦内皮细胞   共培养   肝功能衰竭  

摘要： 目的:探讨永生化人肝窦内皮细胞(IHLESC)能否提高肝细胞的代谢、解毒及合成功能。方法:设立永生化人肝细胞(IHH)单独培养组和IHLESC与IHH共培养组,评价两种不同培养方式对肝细胞代谢、解毒和合成功能的影响;将两组细胞分别接种于微载体上,分别与肝衰竭患者血浆共孵育,比较两组IHH的解毒功能。结果:相比于单独培养组,共培养组IHH密切接触,聚集成团。共培养组IHH的谷氨酰胺合成酶(GS)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、鸟苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶1A1(UGT1A1)、白蛋白(ALB)表达量均显著高于单独培养组(P<0.01)。共培养组血浆总胆红素的下降及血浆尿素的上升均比单独培养组显著(P<0.01)。结论:用IHH与IHLSEC在微载体上共培养制备成新型生物人工肝的核心材料,可提高生物人工肝细胞的代谢、解毒及合成功能。

关键词： “互联网+”   翻转课堂   中西医临床医学专业   细胞生物学   教学模式  

摘要： 细胞生物学是现代前沿生命科学之一,在医学科学中占有重要地位。临床医学生无论借助中医、西医角度从微观世界认识人体和疾病,细胞无疑是认识生命规律和疾病发病机制的重要载体。中西医临床医学专业学生学习细胞生物学相关课程有利于完善中医及西医知识框架,加深对生命规律及临床疾病知识的理解和认识。以互联网平台为主体,开展以设置问题为引导的课前学习和以解决和探索问题为主导的中医药与细胞生物学翻转课堂授课形式,有利于培养迎合时代需求的中西医临床医学人才。