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关键词： miR-195   口腔癌   CAL27细胞   细胞增殖   细胞凋亡  

摘要： 为了探究抑癌基因miR-195对体外培养的口腔癌细胞CAL27生物学特性的影响,本研究在口腔癌细胞CAL27中,通过质粒转染的方法,构建miR-195过表达和mimic空载体的CAL27细胞株,在用RT-PCR检测质粒构建成功的基础上,运用MTT法和Western blotting法分别检测过表达miR-195的人舌鳞癌细胞CAL27细胞增殖和凋亡的生物学特性。结果显示,过表达miR-195的CAL27细胞株构建成功（p〈0.05）;与mimic空载体的CAL27细胞株相比,过表达miR-195的细胞株增殖能力明显下降（p〈0.05）;与mimic空载体的CAL27细胞株相比,过表达miR-195的细胞株促凋亡蛋白Bax表达明显增加（p〈0.05）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低（p〈0.05）。本研究表明过表达miR-195可有效抑制口腔癌细胞CAL27的生物学特性。

关键词： 遗传学,医学   教学方法   细胞生物学   立体化教材  

摘要： 教材建设是高校教学中的重要元素。立体化教材包括纸质教材、教学课件和网络资源等。近年来,在本科细胞生物学和医学遗传学教学资源建设中,该研究室主编了医学细胞生物学理论教材、医学细胞生物学与遗传学实验指导,制作了教学PPT,自拍了实验小视频,使用了微课、慕课、微信对分易教学平台等信息化、网络化教学系统,从而改革了教学模式,丰富了教学内容,提高了教学质量。

关键词： 子宫内膜癌   PBX3基因   p38信号通路   凋亡  

摘要： 目的:探讨前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)对子宫内膜癌细胞活力和凋亡率的影响及p38信号通路调控作用。方法:将靶向抑制PBX3的小干扰RNAs(siRNA-PBX3)及阴性对照siRNA(siRNA-Ctrl)转染人子宫内膜癌Ishikawa细胞,SB203580作为p38信号通路抑制剂,未转染细胞为空白对照组,转染48h。Western blot法检测PBX3、PCNA、Bax、p38和p-p38蛋白表达; MTT及流式细胞术检测细胞活力及凋亡率。结果:siRNA-PBX3转染可明显降低PBX3表达,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。siRNA-PBX3组转染24h、48h和72h的细胞活力均降低,与siRNA-Ctrl组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。siRNA-PBX3转染细胞48h的细胞凋亡率升高,PCNA和p-p38蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,与siRNA-Ctrl组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。与siRNA-PBX3组和SB203580组比较,siRNA-PBX3+SB203580组的细胞活力均明显降低,凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:PBX3基因表达抑制可通过下调p38信号通路降低子宫内膜癌细胞活力和诱导凋亡。

关键词： 肝癌   肿瘤干细胞   CD90   ESA  

摘要： 目的研究肝癌干细胞不同亚群CD90+和ESA+细胞的生物学特性,为肝癌的治疗及预后判定提供新的思路。方法采用活细胞流式细胞术检测肝癌细胞系MHCC97L中肝癌干细胞标志物CD90、ESA的表达情况,并分选ESA+,CD90+细胞,通过甲基纤维素成球实验、Transwell、CCK8法进行体外生物学特征研究。结果肝癌细胞系MHCC97L中CD90+和ESA+细胞表达比例分别为2. 37%和3. 70%。ESA+细胞成球率明显高于ESA-细胞[成球率(35. 6±2. 1)%vs.(9. 6±1. 4)%,P <0. 01],CD90+细胞成球率明显高于CD90-细胞[成球率(29. 2±1. 3)%vs.(7. 4±0. 6)%](P <0. 01),ESA+细胞成球率明显高于CD90+细胞且ESA+细胞sphere球体积明显大于CD90+细胞体积; ESA+细胞较ESA-细胞侵袭能力提高2. 12倍[(282±15. 1 vs. 133±12. 4),P <0. 01],CD90+细胞较CD90-细胞侵袭能力提高2. 04倍[(231±18. 1 vs. 113±10. 2),P <0. 01]。CD90+细胞耐药性明显强于ESA+细胞[IC50(0. 98μg/m L vs. 0. 36μg/m L)],ESA+细胞增殖能力明显强于CD90+细胞。结论肝癌组织中存在不同的干细胞亚群ESA+细胞及CD90+细胞,这些亚群具有不同的生物学特性,影响肝癌的耐药、侵袭,了解肝癌中不同干细胞亚群的表达情况可用于指导临床个体化治疗。

关键词： miR-486   脐带间充质干细胞   外泌体   基因治疗  

摘要： 目的:观察miR-486基因修饰脐带间充质干细胞外泌体的生物学特性,评价其对大鼠H9c-2心肌细胞生物学特性的影响。方法:分离并扩增人脐带间充质干细胞(UC-MSC),并鉴定其免疫表型和成骨及成脂分化能力;用电子显微镜观测外泌体的形态结构;应用Transwell细胞迁移实验观察外泌体对细胞迁移特性的影响。用重组腺病毒载体介导间充质干细胞高表达miR-486,应用qRT-PCR确定高表达miR-486的UC-MSC。收集培养上清,通过超速离心获得外泌体,应用qRT-PCR检测UC-MSC外泌体miR-486表达量。用Dye670标记评价外泌体对心肌细胞增殖的影响;在H2O2诱导的心肌细胞凋亡模型中通过AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测外泌体对心肌细胞凋亡的影响。结果:UC-MSC分泌外泌体直径均在40-100 nm之间,且具有双膜结构。重组腺病毒能够有效介导miR-486在间充质干细胞表达,miR-486基因修饰UC-MSC分泌的外泌体中miR-486的表达显著增高。高表达miR-486的外泌体对心肌细胞有促增殖、促迁移作用及抑制心肌细胞凋亡的作用。结论:脐带间充质干细胞来源的且高表达miR-486的外泌体对心肌细胞有促增殖及抑制细胞凋亡作用。

关键词： 癌,非小细胞肺   叉头框蛋白C1   基因沉默   细胞增殖   肿瘤浸润  

摘要： 目的探讨沉默叉头框蛋白C1(FOXC1)基因对肺癌A549细胞株生物学特性的影响。方法培养人肺癌A549细胞,随机分为siRNA-FOXC1组、错义siRNA组和空白对照组,应用实时荧光定量PCR技术检测细胞中FOXC1基因表达,Western blot法检测细胞中FOXC1蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力。结果siRNA-FOXC1组细胞FOXC1mRNA和蛋白相对表达量均低于错义siRNA组和空白对照组,差异均有显著性(F=2 521.827、37.226,P<0.05);siRNA-FOXC1组48、72和96h时细胞存活率均低于错义siRNA组和空白对照组,差异均有显著性(F=22.857～103.502,P<0.05);siRNA-FOXC1组细胞凋亡率高于错义siRNA组和空白对照组,差异有显著性(F=25.844,P<0.05)。划痕实验显示,siRNA-FOXC1组24h后划痕愈合率低于错义siRNA组和空白对照组,差异有显著性(F=70.260,P<0.05)。Transwell实验显示,siRNA-FOXC1组侵袭细胞数低于错义siRNA组和空白对照组,差异有显著性(F=95.879,P<0.05)。结论特异性沉默人肺癌A549细胞中FOXC1基因表达可减少细胞增殖,促进细胞凋亡,有效抑制细胞迁移及侵袭能力。

关键词： 卵巢肿瘤   肿瘤干细胞   ID8细胞   无血清培养   悬浮球细胞   干性   分离   鉴定   ALDH1   肿瘤细胞   培养基,无血清   组织工程  

摘要： 背景:肿瘤干细胞在肿瘤发生和发展中起着至关重要的作用,但鼠卵巢癌细胞系ID8中是否存在肿瘤干细胞仍未见报道。目的:分选小鼠源性卵巢癌细胞系ID8的肿瘤干样细胞,鉴定其生物学特性。方法:应用无血清培养基培养ID8细胞,将获得悬浮球细胞传代扩增。体外采用CCK8法、平板克隆、Transwell小室侵袭及体外药敏实验观察悬浮球细胞与常规培养的ID8细胞在生物学功能上的差异。应用定量PCR以及Western blot检测悬浮球细胞和非悬浮球细胞的肿瘤干细胞标志ALDH1的表达水平,并通过小鼠致瘤实验观察其成瘤能力。结果与结论:小鼠卵巢癌ID8细胞能在无血清培养基中形成可稳定传代的悬浮球细胞,与非悬浮球细胞相比,具有较强的增殖、自我更新、侵袭、耐药及致瘤的能力,并高表达肿瘤干细胞标志ALDH1。说明无血清培养法可以有效的富集具有卵巢癌干样细胞特征的ID8悬浮球细胞。

关键词： 医学细胞生物学   留学生教育   英文教学  

摘要： 当前高等教育已经进入国际化时代,在中国接受中医药相关专业教育的留学生人数一直处于各学科前列,医学细胞生物学是临床医学专业留学生必修的一门医学基础课程。在留学生医学细胞生物学英文教学实践过程中,发现学生和教师的英文水平、外国留学生学习目的多样性、教师教学方式对教学效果有影响。针对这些影响因素,结合国外大学教学实践,提出增强教师培训、优化教学流程、改变教学评价方式等提高教学质量的方法,对中医药院校留学生细胞生物英文教学进行深入探讨。

关键词： 食蟹猴   肺上皮细胞株   生物学特性  

摘要： 该研究建立了食蟹猴肺上皮细胞株并鉴定其生物学特性。以食蟹猴肺部组织进行原代培养,用差速贴壁法纯化细胞株,并通过倒置显微镜、透射电镜、扫描电镜观察,绘制生长曲线,进行核型分析以及肺上皮标志物检测等方法研究其生物学特性。结果显示,体外培养细胞生长均一、稳定,细胞倍增时间为4.8天,免疫组化CK(+)、CK-7(+)、波形蛋白(+),染色体分析表明,具有正常2倍染色体数目(2n=42),符合食蟹猴肺上皮细胞株特性。该研究成功建立第一株食蟹猴肺上皮细胞株,命名为MFLE-001,为肺部疾病研究和药物筛选提供了理想的体外实验模型。

关键词： 脂肪间充质干细胞   PKH26   细胞标记  

摘要： 目的研究PKH26荧光素染料对脂肪间充质干细胞(ADSCs)生物学特性的影响。方法分离培养新生SD大鼠的ADSCs,通过流式细胞仪、成脂、成骨、成软骨诱导鉴定ADSCs的免疫表型和多向分化的能力。用细胞膜荧光素染料PKH26对第二代脂肪干细胞进行标记,通过倒置相差显微镜、荧光显微镜以及CCK-8法评估标记后细胞的形态、荧光强度以及增殖活性的变化。结果成功分离和培养ADSCs,其纯度达95%以上,并成功将ADSCs诱导成脂肪、骨、软骨;PKH26标记24 h后,在荧光显微镜下可见细胞膜上均匀分布的强红色荧光,细胞的形态以及增殖活性与未标记的细胞无明显差异。结论 PKH26荧光素染料标记后对ADSCs的形态及增殖活性无明显影响,是一种理想的细胞标志物,能够很好的应用于示踪间充质干细胞的迁移转归及干细胞标记等方面的研究。