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关键词： 乳腺癌   肿瘤预后   HGH1   昼夜节律  

摘要： 研究背景: 世界卫生组织国际癌症研究机构最新发布的《2022年全球肿瘤负担数据报告》指出,全球乳腺癌的新发病例数量已经达到了230万例,是女性中发病率第一位的恶性肿瘤,全球女性将可能面临这一疾病带来的沉重经济压力。昼夜节律作为一种特定的时间程序,能够将时间线索转化为单个细胞内的分子改变,昼夜节律的紊乱可能会引发一系列细胞生物学上的异常表现,包括细胞异常增殖、凋亡抵抗以及基因突变增加,这些都是恶性肿瘤发生的重要生物标志物。流行病学研究揭示了昼夜节律紊乱与肿瘤发生发展之间的紧密联系,这种紊乱与多种类型的肿瘤均存在显著的关联,如肝癌、结直肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌等。昼夜节律相关基因(如CLOCK、Per1、Per2、Per3、Cry、BMAL1等)表达水平的改变会增加乳腺癌的风险、促进侵袭和转移并增加复发率。本研究旨在深入探索乳腺癌患者中昼夜节律相关基因的表达情况,并进一步分析这些基因与乳腺癌的临床表现及预后之间的潜在联系。我们还将对经过筛选的HGH1基因展开生物学功能的验证工作,旨在进一步丰富乳腺癌中昼夜节律相关基因的研究理论及实验数据。 材料和方法: 1.生物信息学分析:借助TCGA数据库,对昼夜节律相关基因的表达差异进行了深入研究,并进行了单因素Cox回归分析,以筛选出与昼夜节律紧密相关的差异表达基因和预后相关基因。随后,利用LASSO回归和多因素Cox回归分析进一步筛选关键调控基因(CRGs),并据此构建了预后模型。为了评估该预后模型的风险评分准确性,采用了ROC曲线进行验证。此外,还构建了列线图,以便更直观地预测癌症患者复发的可能性。分析预后模型高低风险组和免疫浸润之间的关系,进行GO和KEGG富集分析探索相关的信号通路。使用TCGA和GSE96058数据集验证预后模型基因在BC中的表达和预后,并对其进行GO和KEGG分析。 2.疾病临床特征相关性研究:深入研究了经生物信息分析筛选出的昼夜节律相关基因HGH1。运用免疫组化技术,对乳腺癌组织及其邻近的非癌组织中HGH1的表达水平进行了检测,对比分析了HGH1在乳腺癌组织与癌旁组织中的表达差异。 3.体外实验:采用了蛋白免疫印迹技术和实时定量PCR方法,对正常乳腺上皮细胞系与乳腺癌细胞系中HGH1的表达水平进行了对比分析,以探究两者之间的差异。采用脂质体介导的si RNA转染技术,使用Western Blot和RT-q PCR方法对si RNA的对HGH1的干扰效率进行精准检测。为了全面评估乳腺癌细胞的相关生物学特性,我们采用了多种实验手段:集落形成实验旨在评估细胞的克隆形成潜能,而CCK-8实验则用于检测细胞的增殖状态。此外,划痕实验用于观察细胞的迁移能力,Transwell实验则用于检测细胞的侵袭能力。这些实验为我们提供了关于乳腺癌细胞在HGH1表达受干扰后的多方面表现数据。 结果: 1.经过对TCGA和GEO数据库中数据的详细剖析,我们注意到乳腺癌组织与正常组织之间,在昼夜节律相关基因的表达水平上,存在明显的不同。 2.通过对TCGA数据的深入分析,构建了一个基于SIAH2、HGH1、ADRB1、KRT17、CES1、SLC25A5、NFE2的风险模型。此模型展现了良好的预测能力,且对乳腺癌患者的总生存率(OS)具有独立的影响作用。在乳腺癌患者中,SIAH2、ADRB1、KRT17、CES1和NFE2的高表达以及HGH1、SLC25A5的低表达均与较高的总生存率密切相关。 3.通过结合年龄、T分期、N分期、M分期以及预后模型风险评分等关键信息,我们构建了一个列线图,用于预测乳腺癌患者5年、8年和10年的生存率。该列线图的校准曲线显示出良好的一致性,这充分证明了其具有较高的预测准确性和实际应用价值。 4.高低风险组GSEA分析显示,PI3K-Akt信号、癌症旁路、核糖体、P53信号通路、氧化磷酸化在高风险组中呈显著的富集;免疫浸润分析结果显示,高风险组患者的免疫评分相较于低风险患者而言较低。具体而言,低风险患者的CD8阳性T细胞、活化CD4阳性记忆T细胞、初始B细胞、记忆B细胞、单核细胞、活化NK细胞、静息树突状细胞和肥大细胞等免疫细胞的免疫活性较高,而高风险组患者在这些方面则呈现出较低的水平。 5.临床病理组织免疫组化检测结果显示,乳腺癌组织中的HGH1蛋白表达水平呈现出显著升高的趋势。根据Western Blot与RT-q PCR的检测结果,观察到HGH1在乳腺癌细胞系包括MCF-7、T47D、MDA-MB-231以及MDA-MB-361中,均呈现出高表达的特性。 ***能够有效地抑制HGH1在MDA-MB-231和MCF-7中的表达水平。通过敲低HGH1,我们观察到MDA-MB-231和MCF-7的集落形成能力、增殖能力、迁移能力

摘要： 翻转课堂教学模式是互联网和计算机技术高速发展下，高校教育改革的体现。本教研组探索了在医学细胞生物学教学过程中，以医学文献为媒介开展翻转课堂教学，通过教师准备、任务布置、学生准备、翻转授课、课堂讨论、教师总结和点评、考核评价等环节来探索实施。不仅提高学生的主观能动性，培养自学能力，提升文献检索能力、文献阅读能力、获取新知能力和科研交流能力，而且有利于培养学生基本的科研思维、科研精神和协作精神，从而实现激发学生的想象力和创造力、培养学生独立思考和创新能力的教学目标。

关键词： 应用型本科高校   细胞生物学实验   课程改革  

摘要： 应用型本科高校“细胞生物学实验”课程教学改革，在培养科研创新人才的基础上，提高细胞生物专业人才思想先进性。但是在现阶段，应用型本科高校“细胞生物学实验”课程环境仍需改善。文章研究应用型本科高校“细胞生物学实验”课程，针对其教学改革目标，提出主体性、综合性、时代性原则，以及“以教学流程为切口，改进自主实验”等具体策略，具有一定的指导作用。

关键词： 罗哌卡因   肺肿瘤   视网膜母细胞瘤结合蛋白4   蛋白质组学  

摘要： 第一部分罗哌卡因对肺腺癌细胞蛋白质组学的影响 目的:通过高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）,观察罗哌卡因对肺腺癌A549细胞蛋白质组学的影响,筛选罗哌卡因作用于肺腺癌细胞的差异表达蛋白。 方法: 1.选择对数生长期的人肺腺癌细胞A549,随机分为对照组（NC组）和实验组（罗哌卡因,Rop组）。采用非标记定量蛋白质技术联合HPLC-MS检测肺腺癌细胞蛋白质组学的变化。按照|log2（Fold Change）|>0.58且P value<0.05的标准筛选差异表达蛋白（DEPs）。 2.对筛选出的DEPs进行GO和KEGG富集分析,构建蛋白互作网络分析（PPI）,确定罗哌卡因作用于肺腺癌细胞的关键靶蛋白。 3.利用公共数据库对靶蛋白进行生物信息学分析。 4.应用Western blot法验证罗哌卡因对靶蛋白的影响。 结果: 1.蛋白质组学结果显示:罗哌卡因处理后的A549细胞共鉴定出2672个蛋白质,其中差异蛋白有327个（上调蛋白185个,下调蛋白142个）。 ***和KEGG富集分析结果显示:DEPs参与的生物学过程包括氧化磷酸化和RNA转运、m RNA剪接、ATP合成偶联等。PPI分析显示RBBP4为罗哌卡因作用于肺腺癌细胞的下调关键蛋白之一。 3.生物信息学分析显示:在TCGA数据库中,RBBP4在肺腺癌（LUAD）中表达显著高于癌旁组织;Kaplan-Meier生存分析提示RBBP4的高表达与肺癌患者的不良预后相关。 *** blot实验结果显示:罗哌卡因可浓度依赖性地抑制肺腺癌细胞RBBP4的表达。 小结:RBBP4在肺癌中高表达并与LUAD患者的不良预后有关;罗哌卡因可降低肺癌A549细胞中RBBP4的表达。 第二部分罗哌卡因通过下调RBBP4的表达抑制肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭 目的:探讨罗哌卡因是否通过调控RBBP4的表达抑制肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭。 方法:应用小干扰RNA（si RNA）和质粒（pc DNA3.1）转染技术,在H1299和A549细胞中敲低或过表达RBBP4的表达。不同转染的细胞经1m M罗哌卡因处理48h后,采用MTS实验检测细胞增殖水平、Transwell小室和Matrigel基质胶实验检测细胞迁移与侵袭能力、流式细胞技术检测细胞周期。 结果: 1.敲低RBBP4表达,抑制H1299和A549细胞的增殖、迁移与侵袭,并诱导细胞周期阻滞。 2.敲低RBBP4表达,增强罗哌卡因抑制H1299和A549细胞增殖、迁移与侵袭的能力。 3.过表达RBBP4,可逆转罗哌卡因抑制H1299和A549细胞增殖、迁移与侵袭的能力,减弱罗哌卡因阻滞细胞周期的功能。 小结:罗哌卡因通过下调RBBP4的表达,抑制H1299和A549细胞的增殖、迁移和侵袭,阻滞细胞周期。 第三部分罗哌卡因用于区域神经阻滞对肺腺癌组织RBBP4表达及手术患者预后的影响 目的:通过回顾性的病例收集,初步探索罗哌卡因用于区域神经阻滞对肺腺癌组织RBBP4表达及手术患者预后的影响。 方法:回顾性分析自2017年6月1日至2017年12月31日在河北医科大学第四医院胸外科行肺切除术的患者,根据纳排标准筛选符合条件的病例,收集患者麻醉及手术信息、检查结果和辅助治疗的信息。按照麻醉方法分为两组:全麻组（GA组）和全麻复合区域神经阻滞组（GA+RA组）。获取石蜡包埋肿瘤标本,应用免疫组化SP法检测肺腺癌组织中RBBP4的表达。采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox风险比例模型对患者预后进行单因素及多因素分析。 结果: 1.本研究共纳入82例患者,每组各41例,两组患者年龄、性别、BMI、术前检查、合并症比较无统计学差异（P>0.05）;与GA组比较,GA+RA组术中瑞芬太尼用量和使用NSAIDs类药物的患者明显减少（P<0.05）。GA组和GA+RA组Ⅱ级或Ⅲ级的并发症发生率分别为43.9%和22.0%,差异有统计学意义（P<0.05）。两组患者5年总生存率分别为63.4%和65.9%,无复发生存率分别为61.0%和63.4%,差异无统计学意义。 2.免疫组织化学染色实验结果显示:RBBP4高表达患者共45例,其中GA组有24例（58.5%）,GA+RA组有21例（51.2%）,两组患者肺腺癌组织中RBBP4的表达差异无统计学意义（P>0.05）。 小结:本研究提示罗哌卡因用于区域神经阻滞对肺腺癌组织中RBBP4的表达、肺腺癌患者术后5年内的转移复发及总生存无明显影响。

关键词： MicroRNA-155   IRF2BP2-KLF2-NF-κB通路   HaCaT细胞   炎症   银屑病  

摘要： 研究背景:银屑病是一种由遗传、免疫、感染等因素引起的慢性炎症性皮肤病。该病进展时间长,易复发,发病机制尚不完全清楚。已有相关研究表明,miR-155的异常表达与银屑病的进展密切相关。 目的:本研究旨在利用生物信息学方法筛选银屑病的差异表达基因和差异表达微小核糖核酸(micro RNA,miRNA),探讨miR-155在银屑病发生发展中的作用及其分子机制。 方法:采用GEO2R工具分别筛选银屑病患者数据集GSE166388和GSE153007中皮肤组织差异表达基因,和银屑病患者数据集GSE115293和GSE145305中皮肤组织差异表达miRNAs;采用VENNY工具分别筛选银屑病患者数据集GSE166388和GSE153007中皮肤组织共表达差异基因,和银屑病患者数据集GSE115293和GSE145305中皮肤组织共表达差异miRNAs。基于Metascape数据库同时利用R软件对银屑病患者皮肤共表达差异基因、共表达上调差异基因、共表达下调差异基因分别进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;利用CIBERSORT工具分析银屑病患者数据集GSE166388皮肤组织免疫细胞浸润情况;基于String数据库和Cytoscape软件构建蛋白互作网络(PPI)和miRNA-m RNA网络,基于Cyto Hubba插件Degree算法获得核心网络和关键元素。miR-155转染HaCaT细胞,采用CCK8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期变化;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测炎症因子IL-1β和IL-6的基因和蛋白表达水平。LPS处理HaCaT细胞构建银屑病炎症模型。q RT-PCR检测炎症下miR-155、IL-1β和IL-6的基因表达水平;ELISA检测IL-1β和IL-6的蛋白表达水平。利用GEO数据库筛选HaCaT细胞与银屑病患者皮肤组织的共表达差异基因;基于miRTarbase和Targetscan数据库预测获得miR-155的靶基因。利用q RT-PCR、蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测转染miR-155 mimics/miR-155 mimics NC、inhibitor/inhibitor NC后IRF2BP2的基因和蛋白表达水平,并通过免疫荧光检测IRF2BP2的细胞定位和表达水平。通过双荧光素酶基因报告实验验证miR-155和IRF2BP2的结合。设计IRF2BP2的siRNA,q RT-PCR检测敲低IRF2BP2对IRF2BP2-KLF2-NF-κB通路基因表达水平的影响。q RT-PCR和Western blot检测LPS刺激下IRF2BP2-KLF2-NF-κB通路基因表达水平;q RT-PCR和Western blot检测LPS刺激下转染miR-155对IRF2BP2-KLF2-NF-κB通路基因和蛋白表达水平影响。 结果:筛选出660个共表达差异基因,其中397个上调基因和263个下调基因;筛选出9个共表达差异miRNA,其中5个上调miRNA和4个下调miRNA。660个共表达差异基因分析获得了前20条GO功能注释和前20条KEGG富集通路。397个共表达上调基因从生物过程(BP)、细胞成分(CC)、分子功能(MF)分别富集到5条GO注释并获得前10条富集通路,共表达上调基因主要与炎症反应、炎症信号转导通路相关。263个共表达下调基因从生物过程(BP)、细胞成分(CC)、分子功能(MF)分别富集到5条GO注释并获得前10条富集通路,共表达下调基因主要与紧密连接、表皮屏障功能障碍、转录因子调节通路相关。免疫浸润结果显示在银屑病患者皮肤中,CD8+T细胞、辅助T细胞和活化树突状细胞的浸润水平较高,而静息肥大细胞和Tregs的浸润程度较低。构建的miRNA-m RNA核心网络显示,miR-155为得分最高的关键元素。转染miR-155:CCK8结果显示,miR-155可明显抑制HaCaT细胞增殖;流式细胞术结果显示,miR-155可促使S期细胞数量显著增多、G2期细胞数量显著减少;q RTPCR和ELISA结果分别显示,miR-155提升IL-1β和IL-6的基因表达水平和蛋白分泌水平。在LPS诱导的炎症细胞模型中:q RT-PCR结果显示,在LPS刺激下miR-155、IL-1β和IL-6的基因表达水平明显升高;q RT-PCR和ELISA结果分别显示,LPS刺激下过表达miR-155,明显提升IL-1β和IL-6的基因和蛋白表达水平;LPS刺激下抑制miR-155,明显降低IL-1β和IL-6的基因和蛋白表达水平。基于miRTarbase和T

关键词： 基本科学指标数据库(Essential Science Indicators,ESI)   Web of Science(WoS)学科分类   细胞生物学   InCites数据库   引文主题(Citation Topics,CT)分析  

摘要： 本文从宏观至微观对比中国与美国特定学科领域JCR期刊对本国科研成果的覆盖情况，分析我国与美国之间的差距或异同，以期为我国学术期刊的发展提供参考意见。基于ESI学科分类或WebofScience(WoS)学科分类，运用WoS和InCites数据库检索并统计2003—2022年美中两国作者及期刊的发文情况。使用InCites数据库中的引文主题（Citation Topics,CT）分析功能分析2003—2022年美中两国作者及期刊的热点研究主题。结果发现，在22个ESI学科分类下，2021年以前我国各学科的作者/期刊发文量和发文质量都与美国存在较大差距，我国期刊与美国期刊的差距则更大。在WoS学科分类下的细胞生物学（CellBiology）领域中，我国期刊近年来发展迅速，发文质量也逐年变好，但发文量仍与美国存在巨大差距，美国期刊对美国作者发文的覆盖度远远优于我国期刊对我国作者发文的覆盖度，这也从侧面证实我国优质论文绝大部分流向了海外期刊。从微观层次的发文主题覆盖度来看，细胞生物学领域的美国期刊较好地覆盖了美国作者的各相关研究主题，而我国期刊对我国作者发文主题的匹配度则弱于美国期刊。可见，我国各学科领域期刊不论是发文量还是发文质量都与美国期刊存在巨大差距，我国还有多个学科存在英文期刊缺口问题；另外，我国细胞生物学领域期刊近年来发展势头较好，但与美国期刊相比发文量还存在巨大差距。因此，我们建议，在宏观上，我国应当根据需求适时创办更多英文新刊或是扩大现有期刊的发文量以适配某些学科的发展需求；在微观上，我国细胞生物学领域期刊应灵活地调整发文范围及选题，以更好地匹配我国学者的发文需求，以助力我国一流学科建设及一流期刊建设。