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关键词： 急性髓细胞白血病   ADP核糖基化因子6   造血干细胞   增殖   耐药   迁移  

摘要： 背景和目的:MLL-AF9急性髓细胞白血病恶性程度高、化疗效果差、预后不良,且具有独特的基因表达谱。阐明MLL-AF9急性髓细胞白血病发病机制,寻找特异和有效的靶向治疗方法,是目前研究的热点。ADP核糖基化因子6(ARF6)是一种分子量小的GTP结合蛋白,在非造血细胞肌动蛋白骨架形成及细胞膜内吞中发挥重要作用。其在造血干细胞内发挥的作用尚不清楚,本研究以此为出发点初步探讨了ARF6对造血干细胞(HSCs)的调控及其对MLL-AF9诱导的急性髓细胞白血病(AML)细胞生物学功能的影响。方法:1.构建突变活化型ARF6小鼠模型(ARF6-Q67L),流式细胞仪分析野生型(WT)小鼠和ARF6-Q67L小鼠骨髓和脾脏的LSK的比例。2.包装MLL-AF9(MA)逆转录病毒侵染ARF6-Q67L小鼠造血干细胞,建立MLL-AF9诱导的ARF6-Q67L小鼠AML细胞系。3.骨髓移植实验观察ARF6活化后MLL-AF9白血病细胞对小鼠生存期的影响。4.在体外通过克隆形成实验、吉姆萨染色实验、Transwell实验和AnnexinⅤ检测,探究ARF6活化后对MLL-AF9AML细胞生物学功能的影响。5.通过Western Blot检测ARF6活化后对ERK和AKT信号传导的影响,RT-PCR检测p19的mRNA表达水平。结果:1.在稳态下,ARF6活化后不影响小鼠骨髓HSCs和各分化阶段细胞的比例,在应激条件下,5-FU注射14天后,ARF6-Q67L小鼠骨髓中HSCs的数量明显受损,脾脏中HSCs的数量明显升高。***6活化后,缩短了白血病小鼠生存时间。***结果显示MA-ARF6-Q67L实验组克隆数量少于MA-WT对照组。4.吉姆萨染色结果显示MA-ARF6-Q67L实验组与MA-WT对照组相比没有出现细胞核分化。5.体外迁移实验结果显示MA-ARF6-Q67L实验组细胞迁移数量是MA-WT对照组的2.8倍。***-ARF6-Q67L实验组显示较强的Ara-c耐药性。*** Blot检测显示MA-ARF6-Q67L实验组细胞内ERK、AKT磷酸化水平与对照组相比明显升高。***-PCR检测结果显示MA-ARF6-Q67L实验组p19的mRNA表达量增多。结论:综上所述,本研究提出ARF6活化后参与了小鼠造血系统损伤后的恢复,并成功建立了MLL-AF9诱导的小鼠白血病细胞系,为以后研究靶向治疗白血病提供了新的方向,主要结论如下:1.在稳态下,ARF6并不影响骨髓造血干细胞的增殖与分化,但在骨髓损伤修复过程中,ARF6通过负调控骨髓造血干细胞的增殖,正调控脾脏造血干细胞的增殖参与应激下骨髓抑制后造血系统的恢复。2.体内实验证实ARF6加速MLL-AF9 AML的发展,体外实验证实ARF6抑制MLL-AF9 AML细胞的克隆形成能力,促进MLL-AF9 AML细胞的迁移和耐药。

关键词： 子宫内膜异位症   ADAR1   增殖   侵袭   迁移   凋亡  

摘要： 子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）简称内异症,是一种雌激素依赖性妇科疾病。近年来,子宫内膜异位症的发病率呈上升趋势,已成为育龄妇女最常见的妇科疾病之一[1]。内异症在组织病理学上为良性病变,但具有恶性肿瘤的生物学特征,如浸润、转移和复发等,少数患者可发生恶变。有研究显示,子宫内膜异位灶和一些相邻的妇科肿瘤有共同的基因改变,存在恶性转化的基因谱[2]。RNA编辑是一种重要的转录后修饰方式,可以造成遗传信息改变和蛋白质多样性[3]。在人类,最普遍的RNA编辑类型是A-to-I编辑,这一过程由作用于双链RNA（dsRNA）的腺苷脱氨酶家族（ADARs）催化形成[4]。ADARs家族包括三个成员:ADAR1,ADAR2和ADAR3。ADAR1和ADAR2在组织中普遍表达且具有RNA编辑活性,而ADAR3只表达于脑组织中,无编辑活性[5]。目前,ADAR1是研究最为明确且生物学功能尤为重要的一种腺苷脱氨酶。ADAR1介导的A-to-I RNA编辑的错误调控与肿瘤发生有关,其途径是灭活抑癌因子或激活促进肿瘤进展的基因。在细胞和小鼠模型研究中,ADAR1过表达可增加细胞增殖、迁移和侵袭等肿瘤相关特征,而ADAR1的下调降低了这些特征[6,7],说明ADAR1可促进细胞增殖,侵袭及迁移。子宫内膜异位症具有一些与肿瘤相似的生物学特征,因此我们猜想ADAR1是否也会对子宫内膜异位症的发生发展产生一定的影响。目前为止,关于ADAR1与子宫内膜异位症发病关系的研究尚未见报道。目的研究ADAR1对子宫内膜异位症在位内膜细胞生物学功能的影响,以探讨ADAR1在子宫内膜异位症的发生发展中所发挥的作用。材料和方法1.研究对象:选取2017年11月至2018年4月在郑州大学第三附属医院妇科行子宫全切术治疗患者的子宫内膜组织,其中包括正常子宫内膜组织（NE）和子宫内膜异位症患者的在位内膜组织（EE）各6例。纳入标准:患者术前3个月未使用激素治疗,年龄在35-49岁之间,月经规律。排除合并其他子宫内膜疾病者,如子宫内膜炎,子宫内膜癌等。实验分组:将转染过表达ADAR1质粒的正常子宫内膜细胞分为ADAR1过表达组（ADAR1-OE组）,过表达阴性对照组（OE-NC组）,空白对照组（NE组）;将转染沉默ADAR1质粒的子宫内膜异位症在位内膜细胞分为ADAR1-shRNA实验组,shRNA阴性对照组（shRNA-NC组）,空白对照组（EE组）。2.研究方法:（1）收集的内膜组织立即放入加有青霉素和链霉素的无菌生理盐水中以进行子宫内膜细胞原代及传代培养。（2）构建ADAR1过表达质粒和ADAR1沉默质粒,在慢病毒介导下转染正常子宫内膜细胞和内异症在位内膜细胞。（3）分别应用RT-qPCR和Western blot检测各组内膜细胞中ADAR1 mRNA和蛋白表达水平。（4）采用CCK-8法检测各组内膜细胞的活力,EdU法检测其增殖能力。（5）应用Transwell法检测各组内膜细胞的侵袭和迁移能力,明胶酶谱实验鉴定内膜细胞中金属基质蛋白酶-9（MMP-9）的活性。（6）流式细胞仪检测各组内膜细胞的凋亡能力。3.统计分析:实验数据以均数±标准差表示,采用SPSS 21.0软件进行统计分析,对于符合正态性和方差齐性的计量资料,两组间比较采用t检验,多组间比较运用单因素方差分析。以α=0.05为检验水准。P<0.05为差异具有统计学意义。结果1.过表达及沉默ADRA1的子宫内膜细胞株构建RT-qPCR和Western blot结果显示,ADAR1-OE组中ADAR1的mRNA和蛋白表达水平较OE-NC组明显提高（P<0.05）;ADAR1-shRNA组的ADAR1mRNA和蛋白表达水平较shRNA-NC组显著降低（P<0.05）。***1对子宫内膜细胞活力及增殖的影响CCK-8实验结果显示,ADAR1-OE组的OD450nm值明显高于OE-NC组（P<0.01）;ADAR1-shRNA1和ADAR1-shRNA2的OD450nm值与shRNA-NC相比明显降低（P<0.001）。Edu实验结果表明ADAR1-OE组的平均细胞增殖数较OE-NC组明显增多（P<0.01）;ADAR1-shRNA1和ADAR1-shRNA2组的平均细胞增殖数均较shRNA-NC组显著减少（P<0.001）。***1对子宫内膜细胞侵袭的影响Transwell实验结果显示ADAR1-OE组的侵袭细胞数较OE-NC组明显增加（P<0.01）;ADAR1-shRNA组的侵袭细胞数较shRNA-NC组明显降低（P<0.001）。明胶酶谱实验表明ADAR1-OE组的MMP-9的表达高于OE-NC组,ADAR1-shRNA1组和ADAR1-shRNA2组中的MMP-9表达低于shRNA

关键词： 膀胱癌   T24   miRNA   miR-212   HMGA2  

摘要： 膀胱癌为我国最常见的泌尿系恶性肿瘤,其发病率排在全世界恶性肿瘤的第6位,致死率排在第9位。其主要发生在膀胱移行上皮细胞,并且直接暴露于尿液,也称为尿路上皮癌,膀胱癌中约70-75%为非肌层浸润性(NMIBC),25-30%为肌层浸润性(MIBC)。非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)的5年生存率可达90%以上。而肌层浸润性膀胱癌的250%患者当中,约5%已有远处转移,并且相当比例(25%)的区域淋巴结已有转移。局部晚期或转移性病灶患者的5年生存率约为15%。其治疗方法包括手术、膀胱灌注化疗药物及免疫治疗等。膀胱镜为检测膀胱癌的有效工具。然而,该项检查后容易出现一系列并发症。为了更好的对膀胱癌进行诊断和治疗随访,需要开发更加准确的生物标志物。miRNA(MicroRNA)是一类非编码小RNA分子,长度为175个核苷酸,它能通过碱基配对的方式与靶基因的3’非翻译区(3’-UTR)互补结合,从而调控靶基因的表达。研究表明,miRNA在多种恶性肿瘤中异常表达,可以控制很多癌症相关过程,比如细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭。因此,探讨膀胱癌中miRNA的表达及对生物学功能的影响,对进一步探索膀胱癌的发病机制,寻找新的靶点,具有重要意义。目的:观察膀胱癌组织中miR-212的表达以及观察上调miR-212后对癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,研究miR-212是否通过调控HMGA2实现其作用。方法:取31例膀胱癌患者的膀胱癌病理组织标本及配对癌旁正常组织,采用逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-212和HMGA2的mRNA表达。用免疫组化法检测HMGA2蛋白在膀胱癌及癌旁组织中的表达。人膀胱癌细胞T24分为miR-212组(转染miR-212 mimics)以及对照组(转染空白对照miR-212 NC)。在培养48 h后,用MTT比色法来检测膀胱癌细胞的增殖能力,用Transwell实验检测癌细胞的侵袭及迁移能力,划痕实验检测癌细胞的迁移能力,采用Western blotting法检测膀胱癌细胞HMGA2蛋白表达。通过生物信息学网站预测miR-212的下游靶基因,并用荧光素酶报告基因验证HMGA2是否为miR-212的直接靶基因。结果:膀胱癌组织中miR-212 mRNA表达低于癌旁正常组织(P<0.05)。膀胱癌组织中HMGA2 mRNA表达高于癌旁正常组织(P<0.05)。miR-212组细胞增殖、侵袭以及迁移能力均低于对照组(P均<0.05)。miR-212组HMGA2蛋白表达低于对照组(P<0.05)。在线数据库结合荧光素酶报告实验预测并且验证了HMGA2是miR-212的下游靶基因。结论:膀胱癌组织中的miR-212呈低表达,而miR-212过表达可以抑制癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,其作用同HMGA2密切相关。

关键词： 膀胱癌   人微小核糖核酸490   核内不均一性核糖核蛋白A1基因   鼠类肉瘤病毒癌基因   上皮-间叶转化  

摘要： [背景]膀胱癌是泌尿系统最常见的肿瘤之一,当膀胱癌发展到肌层浸润期后,患者预后极差,即使经过规范治疗,5年生存率也仅为60-70%。对膀胱癌患者进行早期诊断和早期治疗,能够控制或延缓其病情进入肌层浸润期,使其生存获益。因此,深入研究膀胱癌发生进展的分子机制并寻找有效的早期诊断、控制治疗和术后监测手段,具有非常重要的临床意义。近年的研究表明microRNA(miRNA)在膀胱癌发生进展中可能发挥重要作用,有可能成为膀胱癌不同分期的新标志物以及预后生存期的新预测指标。miRNA长度约为21-25个碱基,是一种生物体内普遍存在的非编码微小RNA。人类miRNA目前已经发现有700余种,参与调控了近1/3的人类基因表达过程,影响着生命过程的多个方面,是一种重要的转录后调控方式。本研究以miRNA-490家族为着眼点,旨在研究阐明其在膀胱癌发生进展中的作用及可能的通路,加深miRNA对膀胱癌发生及由非肌层浸润性向肌层浸润性进展机制的认识。这将有助于从分子水平上探索膀胱癌的治疗新靶点,早期、全程的控制膀胱癌病程的进展。[目的]探讨miR-490家族对膀胱癌细胞EJ和RT4生物学行为的影响及其对膀胱癌细胞发生发展的作用,并对其分子机制和信号通路进行深入的研究。[方法]1.在膀胱癌细胞系EJ和RT4中应用qPCR检测miR-490的基础表达含量;***实验和划痕愈合实验检测miR-490家族对膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响;***8法检测miR-490家族对膀胱癌细胞增殖能力变化的影响;4.运用生物信息学的方法预测miR-490家族可能的靶基因;5.应用qPCR检测转染后膀胱癌细胞中miR-490家族表达变化以及可能靶基因和相关基因的表达变化;6.应用蛋白质免疫印迹实验检测miR-490家族对可能靶基因蛋白和相关蛋白表达的影响。[结果]***4细胞相较于EJ细胞miR-490的基础表达水平较低;***实验检测细胞侵袭能力的结果为:在EJ和RT4细胞中miR-490-5p模拟物转染组侵袭能力均高于对照组,在RT4细胞中miR-490-3p模拟物转染组侵袭能力高于对照组,miR-490-3p抑制物转染组侵袭能力低于对照组;划痕愈合实验检测细胞迁移能力的结果为:在EJ细胞中miR-490-5p/3p模拟物组细胞划痕面积低于对照组,miR-490-5p/3p抑制物组细胞划痕面积高于对照组;在RT4细胞中miR-490-5p/3p抑制物组划痕面积高于对照组;***-8法检测细胞增殖能力的结果为:在EJ和RT4细胞中miR-490-5p/3p模拟物组细胞增殖能力高于对照组,在EJ细胞中miR-490-5p/3p抑制物组细胞增殖能力低于对照组,在RT4细胞中miR-490-3p抑制物组细胞增殖能力低于对照组;*** 7.1数据库和miRDB数据库预测hnRNPA1是miR-490可能的靶基因之一;***检测miR-490及相关基因表达变化结果:在EJ和RT4细胞中,miR-490-5p/3p模拟物组miR-490表达水平均高于对照组,miR-490-5p/3p抑制物组miR-490表达水平均低于对照组;在EJ细胞中,miR-490-5p/3p模拟物组hnRNPA1表达水平高于对照组,而在RT4细胞中,miR-490-5p/3p模拟物组hnRNPA1表达水平低于对照组,miR-490-5p抑制物组hnRNPA1表达水平高于对照组;在EJ和RT4细胞中,miR-490-5p/3p模拟物组Kras表达水平均高于对照组;6.蛋白质免疫印迹实验检测相关蛋白表达情况结果为:在EJ和RT4细胞中,miR-490-5p/3p模拟物组Kras蛋白表达水平升高,miR-490-5p/3p抑制物组Kras蛋白表达水平降低;在EJ细胞中miR-490-5p/3p抑制物组N-cadherin表达升高,E-cadherin表达降低;在RT4细胞中miR-490-5p/3p模拟物组N-cadherin,E-cadherin表达降低。[结论]1.不同膀胱癌细胞系的miR-490基础表达情况不同,可能是影响膀胱癌细胞恶性程度的因素之一;***-490家族能促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭能力;***-490家族调控膀胱癌细胞生物学行为和信号通路是通过作用于hnRNPA1和Kras实现的;***-490家族能影响膀胱癌细胞上皮-间叶转化(EMT);***-490家族在膀胱癌发生进展过程中扮演癌基因的角色。

关键词： 细胞   细胞衰老   衰老机制  

摘要： 细胞衰老是一种抵制外界压力刺激的细胞保护性机制,可以促进受损的细胞的清除。细胞衰老的原因及诱发细胞衰老的条件,仍是当今科学研究的重点。探求细胞衰老对细胞生物学,以及其他科学研究具有重要意义。

关键词： 专业医学汉语教材   针对性   专业性   实用性  

摘要： 专业医学汉语的学习对象是来华攻读医学专业的外国留学生。因该类学生的汉语水平还不能完全适应中文授课的专业课学习,医学院校专门为其开设专业医学汉语课程,从听、说、读、写等方面提高他们的专业汉语水平。基于学习者的特殊性和课程设置的目的,专业基础医学汉语教材的编写更注重针对性、专业性和实用性原则。本文结合教材《专业基础医学汉语——细胞生物学篇》的编写经验,认为专业医学汉语教材要针对学习者的学习目的和需求等,在课文的编写、词汇和注释的编排、练习的设计等方面凸显其编写原则。

关键词： 鱼子酱   先民   细胞生物学   蛋白质   研究所   遗传学   普朗克   马克斯  

摘要： 德国马克斯普朗克分子细胞生物学和遗传学研究所的Anna Shevchenko团队检测了德国一处湖边遗址出土的一块6000年前的古老陶制炊具的碎片,发现碎片上的蛋白质和鲤鱼的蛋白质相匹配。有一些蛋白质常见于鱼卵中,另一些蛋白质则说明这些厨具曾经装过鱼肉。

关键词： 接头蛋白   CBP   增殖   凋亡   皮肤鳞状细胞癌  

摘要： 背景与目的:Src羧基末端激酶结合蛋白(Csk-binding protein,CBP)是新近发现的通过棕榈酰化位点锚定脂筏,参与多种肿瘤的发生、发展过程的抑制性跨膜接头蛋白。本研究旨在观察棕榈酰化位点异常的CBP对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其相关的分子机制。方法:构建CBP-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合蛋白的慢病毒表达载体,采用反转录病毒转染的方法建立CBP棕榈酰化位点突变的A431细胞系以及CBP过表达的A431细胞系,实验分为4组:空白对照组(Parental组,未进行基因转染的A431细胞)、阴性对照组(Control,A431细胞转染仅含EGFP阴性对照病毒载体)、阳性(过表达)对照组(WT-CBP,A431细胞转染WT PAG1-EGFP病毒载体)、实验组(Mutant-CBP,A431细胞转染棕榈酰化位点突变的CBP-EGFP病毒载体)。采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测转染率,并用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Westernblot)检测转染后细胞中CBP mRNA表达和蛋白水平,验证转染是否成功。采用流式细胞术检测CBP棕榈酰化位点突变对细胞凋亡的影响;细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)细胞增殖实验、划痕、transwell迁移及侵袭实验检测CBP棕榈酰化位点突变对A431细胞生长、迁移和侵袭能力的影响;用Western blot检测Csk和Fyn两种下游信号转导分子蛋白水平的变化。结果:建立了稳定的CBP棕榈酰化位点突变A431细胞系和CBP过表达A431细胞系。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,结果显示,与Control组和Parental组比较WT-CBP组A431细胞的凋亡明显增多,差异有统计学意义(P<0.001);但Mutant-CBP组A431细胞的凋亡与WT-CBP组相比明显减少,与Control组和Parental组比较差异无统计学意义(P>0.05)。划痕实验结果表明,与Control组和Parental组比较野生型CBP过表达组A431细胞愈合率明显降低(P<0.001),而CBP棕榈酰化位点突变A431细胞愈合率没有明显变化(P>0.05)。Transwell迁移和侵袭实验结果表明,与Control组和Parental组比较野生型CBP过表达组A431细胞的迁移、侵袭能力明显降低(P<0.001),过表达CBP棕榈酰化位点突变A431细胞的迁移和侵袭能力与WT-CBP组相比明显增高,而与Control组和Parental组相比差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果表明:WT-CBP组Csk和Fyn蛋白与Parental组和Control组相比表达明显增加(P<0.001),而Mutant-CBP组Csk和Fyn蛋白的相对表达水平与Parental组和Control组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CBP上调可以抑制A431细胞的增殖,但棕榈酰化位点突变的CBP丧失了发挥抑制细胞增殖的功能。由此可见,棕榈酰化位点突变可影响CBP发挥其抑制细胞增殖的作用。

关键词： 喉鳞癌   MicroRNA-24   增殖   迁移   侵袭   凋亡  

摘要： 目的探讨MicroRNA-24(miR-24)对喉鳞状细胞癌(LSCC) Hep-2、AMC-HN-8细胞增殖、侵袭及凋亡等生物学行为的影响。方法应用Lipofectamine^(TM)2000转染上调Hep-2、AM C-HN-8细胞中miR-24的表达,通过荧光定量PCR验证转染效率;然后分别采用MTT法、克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验流式细胞分析技术分析外源上调miR-24后Hep-2、AM C-HN-8细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。结果 miR-24质粒稳定转染Hep-2、AM C-HN-8细胞后miR-24表达明显上调。与转染miR-NC组和空白对照组相比,转染miR-24能明显降低Hep-2细胞的增殖、迁移和侵袭能力;同时,转染miR-24能明显增加Hep-2、AM C-HN-8细胞的凋亡能力。结论 miR-24异常表达与LSCC Hep-2、AM C-HN-8细胞的生物学行为密切相关,可能发挥抑癌作用。

关键词： 多细胞生物   机制   个体结构   遗传信息   单细胞生物   发育生物学   细胞生物学   科学问题  

摘要： 问题描述单细胞生物到多细胞生物是进化中的关键事件,物种代间遗传不再基于所有个体的细胞进行,因此细胞出现了特化的可能性和特化的需求,由此带来个体结构基于细胞-细胞空间组成的复杂性提升,从而使多细胞生物能够产生更多功能。而具备本质相同遗传信息的细胞特化过程,是整个多细胞生物个体功能形成、进化的根本。这一特化过程进行广泛定义,即为细胞命运决定,其机制研究涉及发育生物学、细胞生物学、遗传学等学科的根本科学问题。