关键词:
RNPC1
肾癌
生物学功能
抑癌基因
摘要:
目的 RNPC1在人体肿瘤中可能是抑癌基因也可能是促癌基因,其在肾癌细胞中的角色尚不明朗。研究RNPC1对肾癌细胞生物学功能的影响,以探索RNPC1的表达与肾癌发生发展之间的关系。方法将肾癌细胞CAKI-1和CAKI-2分别构建RNPC1基因高表达(RNPC1组)、短发夹RNA干扰RNPC1基因表达(shRNPC1组),另设空白对照组以及阴性对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测RNPC1 mRNA及蛋白在肾癌细胞中的表达情况。运用慢病毒转染技术,建立稳定表达的RNPC1高表达,干扰的肾癌细胞系。检测RNPC1稳转的肾癌细胞系中mRNA及蛋白的表达情况。通过CCK-8细胞增殖实验、克隆实验、划痕实验、迁移侵袭实验,检测RNPC1对肾癌细胞增值,迁移,侵袭能力的影响。运用Western blot检测RNPC1稳转的肾癌细胞系中EMT通路蛋白表达水平的变化,探究RNPC1对肾癌细胞生物学功能影响的分子机制。结果 Western blot和qRT-PCR结果表明,与空白对照组比较,RNPC1组的RNPC1水平明显上调(P<0.05),与阴性对照组比较,shRNPC1组的RNPC1水平明显下调(P<0.05)。RNPC1组细胞A450值和克隆计数较空白对照组明显降低;shRNPC1组细胞A450值和克隆计数较阴性对照组明显升高(P<0.05)。划痕实验结果表明shRNPC1组细胞迁移距离[CAKI-1:(303.98±12.31)μm,CAKI-2:(352.50±24.60)μm]较阴性对照组[CAKI-1:(303.98±12.31)μm,CAKI-2:(237.25±12.89)μm]增大(P<0.05);RNPC1组细胞迁移距离[CAKI-1:(132.52±35.13)μm,CAKI-2:(126.50±19.24)μm]较空白对照组[CAKI-1:(281.65±19.71)μm,CAKI-2:(300.00±22.28)μm]减小(P<0.05)。细胞的迁移和侵袭实验表明,shRNPC1组迁移和侵袭的细胞数较阴性对照组明显增多(P<0.05);迁移和侵袭的细胞数少于空白对照组(P<0.05)。结论 RNPC1基因高表达能抑制肾癌细胞CAKI-1和CAKI-2的细胞增殖、迁移及侵袭能力,可以为临床治疗肾癌提供新的作用靶点。