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关键词： 人牙龈成纤维细胞   脂联素   脂联素受体   生物学作用  

摘要： 目的 探讨脂联素对人牙龈成纤维细胞(HGF)的生物学作用.方法 在口腔颌面外科收集18 ～25岁身体健康志愿者在阻生齿(无龋病或牙周病)拔除术中分离的新鲜健康牙龈组织,无菌条件下用组织块培养法培养牙龈成纤维细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态,SP鉴定细胞来源,3-6代细胞用于实验.选择建立稳定可重复的HGF体外原代培养的方法,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测其对细胞存活和增殖的影响.结果 细胞波形丝蛋白染色呈现阳性,角蛋白染色呈现阴性.利用琼脂糖凝胶电泳进行检测,Adipo R2表达呈阳性.利用MTT比色法进行检测,如果ADP浓度提高,则HGF的增殖活性也会相应增加.分组对比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脂联素对牙周组织细胞具有直接的作用,其受体2在HGF中表达呈阳性,如果达到一定浓度,可有效提升HGF的增殖活性.

关键词： 地西他滨   A431   增殖   凋亡   转移  

摘要： 目的检测地西他滨对A431细胞生物学功能的影响并初步探讨其机制。方法将0、5、10和20μmol/L的地西他滨分别作用于A431细胞,通过MTT法观察地西他滨对细胞增殖的影响,通过Western blotting和实时PCR检测地西他滨作用于A431细胞后细胞增殖相关蛋白Cyclin B1、PCNA和CDC2的改变。通过Hoechst 33258染色检测0、5和10μmol/L地西他滨对A431细胞凋亡状态的影响,采用Western blotting和实时PCR检测地西他滨对A431细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的影响。采用transwell实验检测细胞侵袭转移情况,并通过Western blotting和实时PCR检测0、5和10μmol/L的地西他滨对侵袭转移相关蛋白MMP2的影响。结果 MTT检测发现,5、10和20μmol/L的地西他滨作用于A431细胞24 h后对细胞增殖的抑制率分别为(43.81±1.53)%、(48.64±4.65)%和(50.69±4.99)%,随着药物的浓度增加,对A431细胞的增殖抑制率显著增加(P<0.05)。Hoechst 33258染色发现,地西他滨可以显著促进细胞凋亡,transwell实验也证明地西他滨可以明显抑制A431细胞的转移能力。Western blotting和实时PCR结果显示,地西他滨影响A431细胞中Cyclin B1、CDC2、PCNA、Bax、Bcl-2和MMP2蛋白及m RNA水平,地西他滨处理组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论地西他滨对外阴鳞状细胞癌的生物学功能有很强的抑制作用,可以作为治疗外阴鳞状细胞癌的化疗药物。

关键词： 人羊膜上皮细胞   生物学特性   免疫调节功能   细胞治疗   组织再生  

摘要： 人羊膜主要是由上皮层、致密层、纤维母细胞层、海绵层以及基底膜构成,属于胎儿附属物之一。而人羊膜上皮细胞主要来源于上皮层,是经胚胎内细胞团发育而成。此外,人羊膜上皮细胞是一种处于特殊分化阶段的干细胞,其在特定的环境中可向三个胚层组织分化,同时还表现出独特的免疫调节功能,提示了其在细胞治疗和组织再生等领域具有广阔的应用前景,可能成为重要的组织来源之一。且随着临床上对人羊膜上皮细胞的生物学特性以及免疫调节功能研究的逐渐深入,其在相关疾病治疗方面的应用价值也日益凸显。鉴于此,本研究通过对近年来人羊膜上皮细胞的生物学特性以及免疫调节功能的研究进展进行综述,目的在于为相关领域的研究提供参考依据。

关键词： 胃肿瘤   细胞迁移   肿瘤侵袭   瓣状核酸内切酶1  

摘要： 目的 探讨瓣状核酸内切酶1（FEN1）小干扰RNA（FEN1 siRNA）对胃癌细胞生物学特性的影响及机制.方法 培养胃癌细胞SGC7901,转染FEN1 siRNA和阴性对照序列（siRNA control）分别命名为干扰组和NC组,同时以不做处理的胃癌细胞SGC7901作为对照组.采用实时荧光定量PCR和Western blot检测FEN1 siRNA的转染效果,细胞划痕实验检测胃癌细胞SGC7901迁移能力,Transwell小室检测胃癌细胞的侵袭能力,Western blot检测胃癌细胞中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、β-连环蛋白（β-catenin）的蛋白相对表达水平.结果 干扰组细胞中FEN1 mRNA和蛋白水平明显低于对照组及NC组,差异均有统计学意义（P值均〈0.01）,而NC组细胞中FEN1 mRNA和蛋白水平与对照组比较,差异均无统计学意义（P值均〉0.05）.干扰组细胞迁移能力、侵袭能力及MMP-2、MMP-9、β-catenin蛋白相对表达水平均明显低于对照组及NC组,差异均有统计学意义（P值均〈0.01）;而NC组细胞迁移能力、侵袭能力及MMP-2、MMP-9、β-catenin蛋白相对表达水平与对照组比较,差异均无统计学意义（P值均〉0.05）.结论 转染FEN1 siRNA能够抑制胃癌细胞中FEN1的表达,可抑制胃癌细胞的迁移能力、侵袭能力,其作用机制可能与抑制MMP-2、MMP-9、β-catenin蛋白的表达水平有关.

关键词： 胰腺癌   Hedgehog信号通路   Smoothened基因   小干扰RNA  

摘要： 目的采用携带Smoothened（SMO）基因靶向小干扰RNA（siRNA）的慢病毒表达载体转染胰腺癌细胞后体外观察其对细胞生物学特性的影响。方法依据前期研究方法合成3条携带SMO siRNA慢病毒表达载体（滴度：5×108、6×108、5×108 TU/ml），分别转染Patu-8988细胞后采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）法检测细胞中SMO基因的表达并计算基因表达抑制率；筛选抑制率最高干扰表达载体转染Patu-8988细胞72 h，采用噻唑蓝（MTT）实验检测细胞生长情况、流式细胞仪检测细胞凋亡情况、Transwell侵袭实验检测细胞侵袭转移能力、Western blot法检测通路靶基因B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）表达情况。结果构建的3条SMO siRNA慢病毒表达载体对Patu-8988细胞SMO基因表达的抑制率分别为82.4%、93.1%及89.1%，选择抑制效率最高的干扰载体转染Patu-8988细胞72 h后，细胞生长状况良好；与阴性对照组比较，转染组Patu-8988细胞第1天至第5天细胞生长抑制率分别为（7.46±0.32）%、（25.41±0.28）%、（25.94±0.51）%、（26.01±0.94）%及（43.23±0.88）%。；细胞凋亡率为（1.35 ± 0.11）%低于对照组但可视为未发生显著凋亡（t＝－4.523，P＝0.011）；转染组侵袭小室与Transwell小室细胞数分别为（38.00±4.73）个/高倍视野与（78.00±3.71）个/高倍视野，明显低于对照组[（128.00±10.91）个/高倍视野与（306.00±9.12）个/高倍视野；t＝－22.808，P＝0.000；t＝－69.256，P＝0.000]；转染后细胞内bcl-2蛋白的相对表达量为0.24 ± 0.01明显下调（t＝－27.386，P＝0.000）。结论SMO siRNA慢病毒表达载体可有效阻断Hedgehog信号通路并显著抑制Patu-8988细胞的生长及其侵袭转移能力。

关键词： 细胞生物学   分层次教学   教学模式  

摘要： 根据学生对细胞生物学基础掌握情况和基础教育教学内容情况、学生求学就业目标情况及研究生层次对细胞生物学知识的需求,划分3个教学层次,建立相应的"分级教学班",采用分层次教材进行分类教学和考核,获得了行之有效的教学模式和良好的教学效果.

关键词： 细胞生物学   耐药   紫杉醇   Lin28B   let-7   Hep3B细胞株  

摘要： 为证明Lin28B/let-7通路与肝癌紫杉醇耐药密切相关和采用浓度梯度间歇刺激法建立Hep3B/PTX耐药细胞系。通过四甲基偶氮唑盐比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)分析Guava微流式分析对Hep3B/PTX耐药细胞系进行鉴定,realtime PCR检测耐药细胞中Lin28B及let-7表达水平。经过6个月的诱导,Hep3B/PTX耐药细胞系对紫杉醇的耐药指数为13.55;与亲本细胞相比,Hep3B/PTX处于G0/G1期的细胞比例较高,S期的细胞比例较低;0.2μmol/L紫杉醇处理亲本细胞24h后,有(41.73±1.80)%细胞发生凋亡,而Hep3B/PTX细胞凋亡率只有(17.21±3.60)%;real-time PCR发现,Hep3B/PTX与亲本细胞相比,Lin28B基因表达水平升高了49倍,而Lin28B调控的let-7家族成员表达水平均有不同程度的降低。Hep3B/PTX细胞中Lin28B基因和let-7家族成员表达量的变化揭示了肝癌细胞对紫杉醇的耐药与Lin28B/let-7通路相关,Lin28B基因可能通过影响let-7家族miRNA生物发生过程而改变肝癌细胞对紫杉醇的敏感性。

关键词： 干细胞   腹部   细胞,培养的   细胞结构   生物学标记   细胞因子类  

摘要： 目的体外分离、培养成人腹部来源脂肪干细胞(ASC),观察和分析其形态学特征、细胞表面标志物及细胞因子分泌情况。方法应用胶原酶消化法从接受整形植皮手术的成人患者腹部脂肪组织中分离获取ASC,进行原代及传代培养,观察细胞形态,绘制生长曲线,评估细胞增殖能力。扫描电子显微镜观察ASC超微结构形态。流式细胞仪检测第4代ASC表面标志物CD29、CD34、CD49d、CD105、CD106表达情况。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测培养1、3、6、24、72 h ASC培养上清液中转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、肝细胞生长因子(HGF)、基质细胞衍生因子1(SDF1)、白细胞介素8(IL-8)浓度。数据行单因素方差分析检验。结果成功体外分离、培养ASC,呈扁平的梭形成纤维样细胞生长,且细胞形态均一,生长曲线呈S型,传代稳定。扫描电子显微镜下可见ASC呈长梭型,细胞表面可见丰富微绒毛。ASC表面CD29、CD49d、CD105呈阳性表达,表达率分别为99.6%、44.5%和99.5%,CD34和CD106呈阴性表达,表达率分别为0.6%和0.7%。ASC可分泌TGF-β1、VEGF、bFGF、HGF、SDF1、IL-8,传代培养1 h上清液中对应的细胞因子浓度分别为(56.51±3.61)、(129.54±4.08)、(39.02±2.64)、(73.46±11.75)、(396.03±21.31)、(149.37±5.48)pg/mL;且对应细胞因子浓度均随培养时间延长逐渐增多,差异均有统计学意义(F=47.32、805.55、254.89、69.84、197.73、347.52,P值均小于0.05)。结论 ASC取材方便,培养相对容易,增殖迅速,生长稳定,表达干细胞表面标志物,具有一定的旁分泌功能。

关键词： 类肌钙蛋白   亚型   蛋白质结构   细胞生物学功能   癌症  

摘要： Calponin(类肌钙蛋白)是一个肌动蛋白细肌丝相关的调节蛋白,表达在平滑肌细胞和许多类型的非肌细胞中。哺乳动物有Calponin 1、Calponin 2和Calponin 3三个亚型,分别由三个同源基因CNN1、CNN2和CNN3编码,表达于不同的细胞类型,并执行细胞类型特异性的生理功能。除了调节平滑肌收缩功能,Calponin还调节非肌细胞肌动蛋白骨架的功能并参与多种细胞生命活动,如增殖、粘附、迁移、分化、吞噬和细胞融合等。本综述重点讨论Calponin亚型的基因进化、组织和细胞类型特异性表达、结构和功能的关系以及相关的调节机制。

关键词： 骨关节炎   软骨细胞   SOX5   MMPs   细胞凋亡  

摘要： 目的探讨转录因子SOX5在骨关节炎软骨细胞中的生物学功能。方法分离培养人骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞;运用脂质体2000转染法将si SOX5转染OA软骨细胞(OA-si SOX5),以转染NCsi RNA为阴性对照(OA-NCsi RNA);运用Real time PCR检测转染的OA软骨细胞中SOX5、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)、II型胶原(COL2A1)及蛋白多糖(ACAN)m RNA的表达水平;酶联免疫法(ELISA)检测OA软骨细胞培养上清中IL-6和IL-1β浓度;Western blot检测SOX5、基质金属蛋白酶1(MMP-1)和MMP-13蛋白表达水平;运用Annexin V-FITC及流式细胞术检测细胞凋亡。结果 OA-si SOX5细胞中IL-6(0.72±0.05)和IL-1βm RNA(0.64±0.07)表达显著低于OA-NCsi RNA细胞(1.32±0.08、1.64±0.09)(P<0.05);COL2A1(1.27±0.08)和ACAN m RNA(2.38±0.17)显著高于OA-NCsi RNA细胞(0.58±0.04,1.25±0.10),(P<0.05);OA-si SOX5细胞中IL-6(175.2±14.5)pg/ml和IL-1β(102.6±20.3)pg/ml浓度显著低于OA-NCsi RNA细胞[(584.6±74.5)pg/ml和(268.4±25.3)pg/ml)](P<0.05);细胞凋亡率OA-si SOX5[(3.04±0.86)%]显著低于OA-NCsi RNA细胞[(18.35±2.74)%](P<0.05);OA-si SOX5细胞中MMP-1(0.53±0.05)和MMP-13蛋白水平(0.46±0.08)明显低于OA-NCsi RNA细胞(1.95±0.11、2.48±0.24)(P<0.05)。结论下调SOX5表达可能通过抑制基质金属蛋白酶的表达、促进细胞外基质的合成与分泌、抑制细胞凋亡和炎症反应进而缓减OA的发展。