关键词：
急性髓系白血病
MALAT1
遗传学特征
细胞生物学功能
摘要：
目的:
急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一种以髓系干祖细胞异常增殖和分化阻滞为特征的恶性血液系统肿瘤,伴随细胞遗传学畸变,复杂性体细胞突变和基因表达改变。肺腺癌相关转录本1(Metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)是一种长链非编码RNA,在AML及其他血液系统恶性肿瘤中异常表达,但其与AML的临床特征之间的关系尚不明确。本研究分别检测了AML患者和健康对照组骨髓单个核细胞中MALAT1的表达情况。通过构建稳定敲低MALAT1的AML细胞模型,比较敲低MALAT1前后AML细胞的肿瘤源性变化及对化疗药物敏感性的影响。
方法:
1.采用实时荧光定量PCR方法,首先检测10例健康对照及40例AML患者骨髓单个核细胞中MALAT1表达情况。收集患者的临床资料,如性别、年龄、采样时的骨髓原始细胞比例及伴随的基因突变特征等,探索MALAT1表达水平与临床特征之间的联系。此后,我们在上述研究基础上再次纳入20例AML患者,分别检测治疗前、后MALAT1的相对表达水平,对比治疗后不同缓解状态下的MALAT1的相对表达水平。
2.构建稳定敲低MALAT1的AML细胞模型,应用CCK-8实验、软琼脂克隆形成实验、流式细胞术及阿糖胞苷化疗抵抗实验评估MALAT1对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及阿糖胞苷敏感性的影响。
结果:
1.与健康对照组相比,AML患者MALAT1表达水平明显增高(P<0.0001)。
2.在AML的不同危险度分层中,低中危及高危AML患者MALAT1表达均高于健康对照组(P=0.0008,P=0.0002),但低中危与高危AML患者间差异无统计学差异(P=0.0548)。性别(P=0.945),年龄是否≥60岁(P=0.900),采样时骨髓原始细胞是否≥30%(P=0.536)及流式中原始细胞比例是否≥1%(P=0.323)的各分组间MALAT1表达差异无统计学差异。初治及复治AML患者的MALAT1表达均高于健康对照(P=0.0037,P<0.0001),但初治与复治患者间差异无统计学意义(P=0.986)。
3.在20例分别检测治疗前及治疗后MALAT1表达水平的患者中,治疗后MALAT1的表达明显低于治疗前(P<0.0001)。而在治疗后缓解的13例患者与未缓解的7例患者MALAT1的表达均较治疗前下降(P<0.0001,P=0.0062)。
4.伴有≥3个基因突变患者的MALAT1表达水平明显高于3个以下的患者(P=0.031),CEBPA突变患者MALAT1的表达明显低于野生型(P=0.013),而DNMT3A突变(P=0.016)患者的MALAT1表达高于野生型。
5.与未敲低MALAT1的AML细胞相比,MALAT1敲低的AML细胞的增殖能力明显下降。
6.敲低MALAT1会导致细胞周期在G0/G1期阻滞,但未对AML细胞的凋亡造成明显影响。
7.敲低MALAT1的细胞,对化疗药物阿糖胞苷的敏感性增强。
结论:
***1在AML患者中的表达明显高于健康人群,治疗后该基因表达较治疗前下降。伴有≥3个基因突变的AML患者的MALAT1表达水平明显高于3个以下的患者;CEBPA突变患者的MALAT1表达水平低于野生型,而DNMT3A及NPM1突变患者的MALAT1表达水平较野生型增高。
2.敲低MALAT1可抑制AML细胞的增殖,使细胞周期阻滞,但未影响细胞凋亡。敲低MALAT1增强了AML细胞对阿糖胞苷的敏感性。
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