教学课程资源库 更多>>

关键词： 互联网+   微信   医学细胞生物学   教学改革  

摘要： 微信的广泛使用开启了大数据时代的新篇章,医学细胞生物学作为临床医学专业的一门重要基础课程,具有知识更新快、课程内容多而零散等特点。在此背景下,我们充分利用微信的互动功能来挖掘其在教学中的作用,将课程内容与各种学习资源上传微信平台辅助传统细胞生物学教学,学生随时随地学习,打破教与学的时空限制。微信教学辅助平台可让学生达到课前预习、课中互动、课后复习,学生充分利用碎片化时间学习,教师与学生可以有效互动,提高了学生学习的主动性和自觉性,符合当代大学生学习模式,是传统教学模式的有效补充,是互联网+时代背景下细胞生物学课程学习的良好方式,提升了教学效果,在此过程中教师的教学能力也得到提升,如何更有效组织学生进行微信平台学习是我们今后需要努力的方向。

关键词： BCG   TRIM59   信号通路   巨噬细胞   调控   生物学活性  

摘要： 巨噬细胞是固有免疫的重要组成部分,参与机体多个生理及病理活动,在炎症、肿瘤、创伤修复、组织重建、抵抗病原微生物入侵等方面均发挥重要作用。TRIM59属于TRIM蛋白家族,该家族是E3泛素连接酶中RING家族成员,结构高度保守,能特异性结合泛素交联酶,作为泛素连接酶参与抗病毒和调节免疫相关信号通路,与免疫应答密切相关。本课题组前期工作发现,BCG刺激后的腹腔巨噬细胞经1%多聚甲醛固定后可以高效杀伤MCA207肿瘤细胞,同时检测到巨噬细胞膜上高表达TRIM59,但是BCG怎样调控巨噬细胞表达TRIM59的信号通路未见报导。此外,TRIM59与巨噬细胞直接接触杀伤功能密切相关,而对巨噬细胞的生物学活性如增殖、凋亡、表型、吞噬功能等调控作用并不清楚。基于以上研究背景,我们研究了BCG调控TRIM59表达的信号通路,发现BCG通过TLR2/4/IRF5调控RAW264.7细胞上TRIM59的表达;通过转染建立高表达和低表达TRIM59的RAW264.7细胞作为细胞模型,检测细胞增殖、凋亡、细胞因子分泌、吞噬功能,发现TRIM59能够促进抑炎细胞因子IL-10的分泌,抑制抗原提呈相关分子的表达,促进吞噬相关表面分子的表达,并促进IgG介导的吞噬和非调理性吞噬,抑制补体介导的吞噬;并且,TRIM59能够促进RAW264.7细胞增殖,对细胞凋亡没有明显影响。本研究探讨了BCG调控TRIM59表达的机制,阐述了TRIM59对巨噬细胞生物学活性的调节作用,明确了TRIM59在巨噬细胞中的表达意义,为阐明TRIM59调控巨噬细胞的功能提供新的实验依据和思路。

关键词： CacyBP/SIP   子宫内膜间质细胞   增殖   迁移   侵袭   凋亡  

摘要： 目的:探讨CacyBP/SIP过表达对卵巢子宫内膜异位症(Ovarian endometriosis,OEMs)在位内膜间质细胞生物学功能的影响。方法:1、体外提取卵巢子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞,使用重组CacyBP/SIP慢病毒转染细胞之后检测病毒转染结果;2、实验分3组。实验组(Lv-hCacyBP/SIP group):表达CacyBP/SIP重组慢病毒Lv-hCacyBP/SIP处理在位内膜间质细胞;慢病毒阴性对照组(Lv-control group):慢病毒载体处理在位内膜间质细胞;空白对照组(untreated group):细胞无处理;3、CCK-8法检测细胞增殖能力;4、Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;5、流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况。结果:1、体外成功分离培养卵巢子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞;2、成功构建重组慢病毒,应用Western-Blot检测转染后各组实验细胞中CacyBP/SIP表达量:Lv-hCacyBP/SIP group(0.676±0.031),Lv-control group(0.251±0.001),两组比较,差异有统计学意义(t=21.231,P=0<0.000);Lv-control group(0.251±0.001),untreated group(0.250±0.007),两组比较,差异无统计学意义(t=0.109,P=0.921);3、CCK-8法检测细胞增殖实验结果表明:转染24h后,Lv-hCacyBP/SIP group的A值(0.247±0.007)与Lv-control group的A值(0.260±0.004)比较,差异无统计学意义(t=2.641,P=0.057);Lv-control group的A值(0.260±0.004)与untreated group的A值(0.257±0.006)比较,差异无统计学意义(t=0.741,P=0.500)。转染48h之后,所有Lv-CacyBP/SIP group的A值与Lv-control group的A值比较,差异有统计学意义(P<0.05);Lv-control group的A值与untreatedgroup(0.379±0.009)的A值比较,差异无统计学意义(P>0.05);4、Transwell检测细胞迁移能力:Lv-hCacyBP/SIP group细胞迁移数(134±21.5)与Lv-control group细胞迁移数(224±12.0)比较,差异有统计学意义(t=6.338,P=0.003);Lv-control group细胞迁移数(224±12.0)与untreated group细胞迁移数(226±15.2)比较,差异无统计学意义(t=0.207,P=0.846);5、Transwell检测细胞侵袭能力:Lv-hCacyBP/SIP group细胞穿膜数(92.33±6.8)与Lv-control group细胞穿膜数(128.67±4.7)比较,差异有统计学意义(t=5.713,P=0.029);Lv-control group细胞穿膜数(128.67±4.7)与untreated group细胞穿膜数(125.33±10.1)比较,差异无统计学意义(t=0.459,P=0.691);6、流式细胞仪技术检测细胞凋亡:Lv-hCacyBP/SIP group细胞凋亡率(8.066±2.85)%与Lv-control group细胞凋亡率(8.865±0.03)%比较,差异无统计学意义(t=0.481,P=0.677);Lv-control group细胞凋亡率(8.865±0.03)%与untreated group细胞凋亡率(8.433±1.48)%比较,差异无统计学意义(t=0.490,P=0.650)。结论:CacyBP/SIP过表达能抑制OEMs在位间质细胞增殖、迁移及侵袭能力,但对细胞凋亡无明显影响。

关键词： 医学细胞生物学   教研室   精品资源共享课程  

摘要： 医学细胞生物学是生命科学的重要分支,旨在阐明细胞生命活动的基本规律,并为人类的生命活动提供理论基础,是生命科学领域的新兴前沿学科,也是高等医学教育中的重要专业基础课程。医学细胞生物学的研究对象是细胞,而细胞又是组成人体的结构与功能单位,故学好本门课程,对医学生理解疾病的发生机制、诊断与治疗奠定基础。在医学教育中,通过医学细胞生物学的系统学习,将为后续课程如生物化学、组织胚胎学、医学遗传学、生理学、免疫学、分子生物学及临床各科专业

关键词： 食管癌   PDL1   恶性生物学特征   预后  

摘要： 背景中国食管癌发病数约占全球食管癌发病总数的50%,是危害人民群众健康的主要恶性疾病。鳞癌是中国食管癌的主要病理分型,约占90%以上,发病呈地域性分布,主要分布在农村及贫困山区,是当地人民群众因病致贫及因病返贫的主要因素,同时也是制约当地社会经济发展的重要原因。食管癌治疗手段以手术、放疗和化疗为主,可是治疗的远期效果并不容乐观,患者生存质量极差,因为缺乏有效早期的预防及诊疗手段,多半食管癌诊断时已属于晚期,随着对肿瘤的免疫逃逸机制的研究进一步深入,免疫治疗被认为是肿瘤防治新选择。因此,寻找促进食管癌发生、发展的新靶点变得十分重要。T细胞活化过程中需“双重信号”及各种因子共同参与。T细胞表面受体(T cell receptor,TCR)可识别由抗原提呈细胞(antigen-presenting cells,APCs)提呈的抗原肽-主要组织相容性复合体,将胞外信号传递到胞内,为T细胞的活化提供第一信号,初步激活T细胞。APC表面的协同刺激分子可与T细胞表面的配体结合,提供第二活化信号,使初始T细胞完全活化为效应T细胞。协同刺激分子有3种分类:B7家族、TNF家族和细胞因子家族。而且仅B7族可通过APC传达相关信号给T细胞的协同刺激分子。目前B7家族共包括7个成员:B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、B7h(ICOS-L)、B7-H1(PD-L1)、B7-DC(PD-L2)、B7-H3和B7-H4(B7x、B7S1)。与B7族其他分子不一样,B7-H1具有负性调节免疫应答的作用。PDL1(programmed death-ligand 1程序性死亡配体1)是位于人染色体9q24的跨膜蛋白,胞外区有IgV和IgC样结构的,中间区有疏水结构,胞外区含有蛋白激酶C磷酸化位点,PDL1在多种正常组织中表达,但仅限于巨噬细胞系统中,研究发现许多恶性肿瘤中PDL1高表达,包括非小细胞肺癌、黑色素瘤、乳腺肿瘤、胶质瘤等。PD1(programmed death-1程序性死亡分子1 CD279)为CD28家族成员,由胞外段、疏水跨膜区、胞内段组成。胞内区含有2个酪氨酸残基,包括免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif,ITIM)、免疫受体酪氨酸转换基序(immunoreceptor tyrosine-based switch motif,ITSM),TISM的激活与效应T细胞的的应答活性密切相关。PD-1可在于活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞及单核细胞表面,同时也可在调节性T细胞(regulatory T cell Treg)检测到,促进Treg细胞的增殖,抑制免疫应答。PD1包括两个配体PDL1及PDL2,而PDL1是PD1的主要配体。PD1与PDL1结合后,ITSM可募集酪氨酸磷酸酶,进而去磷酸化TCR信号通路的多个关键分子,抑制T细胞的增值活化,发挥免疫负性调节功能,减少免疫反应对周边组织的损害,避免自身免疫的发生。肿瘤组织高表达PDL1,该信号通路的激活可促进肿瘤免疫逃逸。肿瘤逃逸的机制可能与以下的原因有关:(1)诱导T细胞耐受;(2)诱导T细胞凋亡;(3)诱导T细胞耗竭;(4)增强Treg细胞功能;(5)抑制T细胞的增殖。第一部分PDL1在食管鳞癌中的表达及临床意义目的研究PDL1在食管鳞癌中的表达及临床意义方法收集河南科技大学第四附属医院2014年1月-2014年6月食管鳞癌患者的癌组织及相应癌旁组织,采用免疫组化、Western blot实验方法检测PDL在癌组织及相应癌旁组织的表达,并分析PDL1的表达与食管鳞癌临床病理学特性的关系及预后的相关性。结果在食管鳞癌组织中PDL1的阳性率为42.0%高于癌旁组织的22.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。PDL1的表达水平与临床分期和肿瘤浸润深度有一定相关性(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明PDL1的阳性组较阴性组预后较差,30个月生存率分别为38.1%、86.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。多变量COX回归分析表明PDL1是食管鳞癌患者的独立预后因素。结论PDL1在食管鳞癌的发生发展过程起到重要作用,可能成为食管鳞癌评价预后指标,并为食管鳞癌的治疗提供新的靶点。第二部分PDL1对食管癌细胞生物学特性的影响目的研究PDL1的表达对食管癌细胞生物学特性的影响。方法1.应用CCK8实验和平板克隆实验,检测PDL1对人食管癌细胞株EC109体外增殖能力的影响。2.应用Wound-healing实验和Transwell小室实验,检测PDL1对人食管癌细胞株EC109细胞迁移和侵袭能力的影响。3.应用裸鼠移植瘤模型观察PDL1对人食管癌细胞株EC109细胞体内增殖的影响。结果***8

关键词： 肝细胞癌   乙型肝炎病毒   突变   内质网应激   自噬  

摘要： 背景和目的肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是全球最常见的致命性肿瘤之一,慢性乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染已被证明是HCC的主要危险因素。研究表明HBV X（HBX）基因在肝癌的发生发展中发挥重要作用。近年来越来越多的研究显示,HBX基因序列中广泛存在核苷酸点突变和序列缺失突变,并且这些突变与肝癌进程密切相关。然而,截至目前尚不明确HBX突变在HCC发生发展中的作用与机制。近期有研究报道,内质网应激和细胞自噬可能参与HCC的发生发展;同时有研究初步显示,内质网应激和细胞自噬可能受到HBX的调控。但是,HBX突变是否通过对内质网应激和自噬的调节参与肝癌进程尚属未知。因此,本研究旨在分析HBV相关肝癌组织中HBX突变的特征,并在此基础上研究HBX突变对肝癌Hep G2细胞生物学功能的影响,进一步探索内质网应激/自噬在HBX突变介导的HCC中的可能作用及机制。 方法1.收集2015年1月至2016年12月期间广西医科大学附属肿瘤医院接受手术治疗的HBV相关HCC患者的肝癌组织及邻近癌旁组织各61例。通过巢式PCR法扩增HBX基因,然后应用Sanger测序法对扩增产物进行序列测定。最后以NCBI数据库中的HBX基因序列NC003977.1为参考序列,通过Mutation Surveyor（V4.0.8）软件对获得的HBX基因序列进行分析。2.根据第一部分的研究结果,选取目的HBX突变序列进行人工合成,然后将其克隆入真核表达载体GV362。紧接着通过脂质体转染的方法将HBX-GV362重组载体导入肝癌Hep G2细胞,同时以GV362空白载体作为对照。最后通过G418筛选稳定表达HBX蛋白的Hep G2细胞,并以Western blot方法进行验证。3.通过CCK-8实验检测细胞增殖,通过平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,通过流式细胞术检测细胞周期与凋亡,通过划痕实验检测细胞迁移,进而分析HBX突变对肝癌Hep G2细胞生物学功能的影响。4.通过Western blot方法检测PDI、Grp78以及CHOP蛋白的表达水平,初步分析HBX突变与肝癌Hep G2细胞内质网应激的关系;同时通过Western blot方法检测P62、LC3以及Beclin 1的表达水平,初步分析HBX突变与肝癌Hep G2细胞自噬的关系。分别以内质网应激抑制剂4-苯基丁酸（4-Phenylbutyric acid,4-PBA）与诱导剂衣霉素（Tunicamycin,TM）处理稳定转染HBX-GV362重组载体的细胞,然后通过Western blot方法检测细胞中P62、LC3、Beclin 1蛋白表达水平的变化,同时通过流式细胞术检测细胞周期与凋亡的变化。同样,分别以自噬抑制剂氯喹（Chloroquine,CQ）与诱导剂雷帕霉素（Rapamycin,RAPA）处理稳定转染HBX-GV362重组载体的细胞,然后通过Western blot方法检测细胞中PDI、Grp78、CHOP蛋白表达水平的变化,同时通过流式细胞术检测细胞周期与凋亡的变化。综上分析HBX突变是否通过内质网应激和细胞自噬参与肝癌Hep G2细胞生物学功能的调控,同时初步探索内质网应激与细胞自噬之间是否存在调控关系。5.统计学分析。采用SPSS 16.0软件对所得数据进行统计学分析,计量资料以均数±标准差（x±s）表示,两组样本间均数的比较采用t检验,多组样本间均数的比较采用方差分析;计数资料以率或构成比（%）表示,组间比较采用卡方（x2）分析。结果均以P<0.05为差异有统计学意义。 结果1.本部分研究共获得122条HBX基因序列,其中广泛存在核苷酸点突变与序列缺失突变,详细结果如下:（1）癌与癌旁组织间HBX缺失突变的分布无统计学差异（P>0.05）,并且HBX羧基端缺失突变在癌与癌旁组织间的分布亦无统计学差异（P>0.05）。但同时结果显示,HBX基因羧基端缺失长度介于12-270 bp之间,且癌组织中的缺失长度明显大于癌旁组织（33.10±71.45 vs.12.64±23.82,P<0.05）。（2）癌与癌旁组织中核苷酸点突变的数量分别为260个和190个。其中共发现62个热点突变,但是癌与癌旁组织间有差异的热点突变只有10个,即C1653T、C1655T、C1673G、T1719G/G1721A、T1753V（C/A）、A1762T、G1764A、A1762T/G1764A、A1775G以及T1800C。除A1775G突变外,其余突变均是癌组织中的检出率高于癌旁组织（P<0.05）。2.根据第一部分的研究结果,我们选取了8种HBX基因突变序列,将其分别命名为:HBX-C1479A/A1499G、HBX-T1719G

关键词： 医学细胞生物学   教学改革  

摘要： 医学细胞生物学是高等院校生物和医学类专业主要的基础学科之一。它是21世纪自然科学的四大前沿学科之一,既是生命科学的基础学科,又是现代生命科学发展的重要支柱。根据医学细胞生物学课程在高等院校教学中的局限性及其重要性,探讨教学过程中存在的问题及改革。

关键词： 舌癌   MicroRNAs   MRP2   miR-320a   miR-320a   OTSCC   增殖   迁移   侵袭  

摘要： 目的:1、使用miRNA芯片分析比较舌鳞状细胞癌病患组和健康组别的血清miRNA,筛查出异常表达的miRNA;2、对异常表达的miR-320a进行相关的生物学分析,预测可能的靶基因。方法:1、采用组织微阵列检测48例舌鳞状细胞癌患者及50例健康志愿者血清中microRNA的表达水平,qRT-PCR验证微阵列的数据;2、锁定寡核苷酸探针原位杂交技术和免疫组织化学方法,检测舌鳞状细胞癌组织及非舌鳞状细胞癌正常舌组织中miR-320a和MRP2表达水平,寻找miR-320a调节MRP2表达的组织学证据。结果:1、微阵列检测到总共有21种miRNAs表达异常,而其中miR-320a的表达呈现最明显的降低,P<0.05。进一步对OTSCC样本和健康人中4个表达有显著异常的miRNAs,包括miR-320a,miR-129,miR-106a和miR-31进行了qRT-PCR检测验证,表达趋势与微阵列一致,P<0.05。2、原位杂交技术和免疫组织化学结果显示:舌癌组织中miR-320a的表达水平显著低于正常舌组织,P<0.01;而舌癌组织中MRP2的表达水平显著高于正常舌组织,P<0.01。结论:miR-320a在舌癌患者血清中的表达水平显著低于在正常人血清中的表达,在舌癌组织中的表达水平也低于在正常组织中的表达;但是MRP2的表达水平却是增高的。提示我们可将miR-320a表达异常降低和MRP2异常增高现象作为舌鳞状细胞癌诊断的辅助参考指标。目的:1、观察外源性mi R-320a对SCC细胞系增殖、迁移、侵袭的影响。2、在SCC细胞系中验证MRP2是否是mi R-320a的天然靶基因,并探索mi R-320a抑制MRP2表达的分子机制。3、进一步观察过表达MRP2后,能否有效逆转mi R-320a对舌鳞状细胞癌细胞增殖的抑制作用。方法:1、以人SCC细胞系为研究对象,q RT-PCR检测舌癌细胞系(SCC4、SCC1)和正常角化细胞系(NHOK)中的mi R-320a的含量。2、通过向SCC细胞系转染mi R-320a mimics,提升细胞系中mi R-320a的水平,再开展下述实验:(1)CCK-8、克隆形成及Edu实验检查mi R-320a对SCC细胞增殖的作用影响;(2)用transwell体外迁移侵袭和划痕实验,分析miR-320a对SCC细胞迁移和侵袭功能的影响。3、通过q RT-PCR检测及Western blot技术检测转染mi R-320a mimics后对舌癌细胞系中MRP2m RNA及MRP2蛋白表达水平的影响,探索mi R-320a降低MRP2表达的分子机制;为验证MRP2是否为mi R-320a的天然靶基因,我们采用荧光素酶实验进行检测。4、构建MRP2真核生物过表达质粒转染入已转染了mi R-320a mimics的SCC细胞系,继而使得细胞内有过表达的MRP2,再用CCK-8实验以及Edu实验检验过表达MRP2可否有效逆转mi R-320a对舌鳞状细胞癌细胞增殖的抑制作用。结果:1、q RT-PCR检测结果显示,NHOK中mi R-320a的表达水平明显高于所检舌鳞状细胞癌细胞系,差异有统计学意义,P<0.001。2、CCK-8实验结果显示,mi R-320a显著的抑制了SCC细胞的增殖功能,450nm吸收值显著低于NC组,P<0.01;体外克隆实验结果显示,通过两周的体外培养,SCC细胞系内NC组以及mi R-320a组都存在细胞克隆,与对应的NC组进行对比,mi R-320a组的克隆细胞的形态明显偏小,核染较NC组也明显变浅,mi R-320a组的克隆形成效率(CFE)显著低于NC组,P<0.01。3、体外划痕实验结果显示,mi R-320a组SCC的间隙存留率(各时间点存留的间距/0h的划痕间距%)显著高于NC组的存留率,P<0.01～0.001。Transwell体外迁移实验得出,SCC细胞系mi R-320a组细胞透过纤维素膜孔的数目显著低于未转染的NC组,差别有统计学意义,P<0.001;体外侵袭的分析得出,SCCmi R-320a组穿过Matrigel的细胞数明显少于对应的NC组,两组侵袭能力也有显著差别,P<0.001。4、q RT-PCR检测结果显示,SCC细胞系mi R-320a组MRP2m RNA含量明显低于对应的NC组,差异有统计学意义P<0.05。Western blot检测结果显示,SCC细胞系mi R-320a组MRP2蛋白表达水平均显著低于对应的NC组,统计分析两组Gelpro测量灰度值有显著差异,P<0.05。5、荧光素酶分析检测结果显示,在SCC细胞系,mi R-320a-WT组的活性相对于Mock-WT组以及NC-WT组显著偏低,其差异有统计学价值,P<0.001,Moc

关键词： 医学细胞生物学   形成性评价   实验内容  

摘要： 医学细胞生物学是高等医学教育的基础课程。它是一门从显微、超微和分子结构三个水平上研究细胞基本生命活动规律的科学。在医学教育中,医学细胞生物学与生物化学、组织胚胎学等医学基础课程有着密切联系,并为医学遗传学、生理学、病理学、微生物学、分子生物学等后续课程提供基础理论和相关知识。医学细胞生物学作为医学专业基础课程,在临床医学、口腔