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关键词： 全转录组测序   肺鳞癌   lncRNA   细胞增殖/调亡   侵袭及迁移  

摘要： 背景: 肺癌是临床常见恶性肿瘤,根据美国癌症协会发布的最新全球癌症的统计数据,肺癌是全球发病率(占总病例数的11.6%)和死亡率(占癌症总死亡人数的18.4%)最高的肿瘤类型。并且由于早期诊断不足、恶性程度高、易对化疗药物产生耐药,致使预后不佳,肺癌的5年生存率一般不足20%。近年来随着高通量测序技术应用,基于基因突变的肺癌个体化治疗取得了巨大进步,推动了精准医学的发展,从而促进了肺癌的分子靶向治疗。长链非编码RNA在肿瘤发生、发展中的重要作用已经成为肿瘤研究的新热点。 研究目的: 通过对肺鳞癌组织及其癌旁组织进行全转录组测序,应用生物信息学分析相关联lnc RNA表达谱,筛选、验证共同差异表达的两lnc RNA分子(MIR205HG),并深入的研究MIR205HG表达对肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移等功能方面的影响及作用机制。 实验方法: (1)通过高通量测序平台,对收集的肺鳞癌手术患者癌组织及癌旁组织,进行了两lnc RNA测序,应用生物信息学分析了两lnc RNA表达谱、预测差异表达lnc RNA靶基因及功能富集,筛选共有的差异显著的lnc RNA。(2)对差异表达的7条lnc RNA进行RT-q PCR验证,并在另外的12对肺鳞癌组织中检测候选的7条lnc RNA表达水平。(3)结合lnc RNA测序分析与RT-q PCR验证、扩大样本量检测,筛选出1条lnc RNA-MIR205HG,在筛选出的SK-MES-1细胞株中,进行过表达或敲减,利用CCK-8实验检测肿瘤细胞增殖能力,平板克隆实验检测克隆成形能力,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,应用流式细胞技术检测细胞凋亡(Annexian V/PI),观察线粒体膜电位(Jc1)及线粒体(ATP)的变化,及Western-blot测定相关凋亡通路蛋白表达等技术,通过检测MIR205HG的表达水平的变化,研究它在肺鳞癌细胞中的生物特性。 实验结果: (1)在4对肺鳞癌、癌旁组织中,进行全转录组测序,筛选出差异表达的Lnc RNA共310条,共有的差异表达明显的7条,分别是:MIR205HG、CTD-2562J17.6、XLOC＿071808、FENDRR、RP11-116G8.5、RP3-523K23.2、RP5-968D22.1;(2)应用RT-q PCR对以上筛选出7条Lnc RNA进行验证,结果发现,MIR205HG、XLOC＿071808、RP11-116G8.5、RP3-523K23.2、RP5-968D22.1在肺鳞癌组织中表达上调,CTD-2562J17.6、FENDRR在肺鳞癌组织中表达下调。这与测序结果趋势相同,从而验证了测序结果可靠性。将样本扩大到12对,检测肺鳞癌组织及癌旁组织中这7条Lnc RNA的表达水平,进一步验证了之前的结果。通过靶基因预测软件、功能富集分析结合RT-q PCR验证结果,筛选出MIR205HG。(3)在肺鳞癌细胞株SK-MES-1中,敲减MIR205HG使肿瘤细胞的增殖、克隆形成及细胞侵袭、迁移能力起到明显抑制;干扰MIR205HG促进了细胞凋亡、膜电位下降,干扰组较对照组凋亡更快;且在干扰MIR205HG组,Bcl-2的表达低于对照组,其余Bax,Akt1/2/3,Caspas3、7、8、9,P53,PKB表达水平均明显高于对照组,说明干扰MIR05HG促进肺鳞癌细胞凋亡,而且很可能是通过线粒体途径介导Caspase完成的。 结论: 本研究应用高通量测序技术及生物信息学分析,获得了肺鳞癌相关Lnc RNA差异表达谱,并发现与肺鳞癌密切相关的新Lnc RNA分子。通过RT-q PCR验证MIR205HG在肺鳞癌细胞中显著上调。在肺鳞癌细胞功能研究中,敲减该基因可抑制线粒体介导的caspase依赖细胞凋亡的发生,对肿瘤细胞的增殖、克隆形成及侵袭、迁移能力有抑制作用。为更加深入地研究其在肺癌中的作用机制奠定了基础,为肺鳞癌的分子靶向治疗提供了新的依据。

关键词： 胰腺癌   侵袭转移   胰岛素受体底物   信号转导通路   增殖   蛋白磷酸化  

摘要： 前言:世界范围内胰腺癌均为一种高致死性预后极差的恶性肿瘤,其总体五年生存率不足5%,目前手术切除仍为胰腺癌的主要治疗手段,但是只有10-20%胰腺癌患者具有手术适应症,50%患者已经远处转移,35%患者出现不可切除的局部侵袭。因此,尽管科学家致力于研究胰腺癌的发生发展及侵袭转移过程,但胰腺癌的治疗仍不尽人意,其侵袭转移的分子生物学机制尚未完全明了。胰腺癌细胞蛋白质翻译后修饰过程可能在调节细胞功能方面具有重要作用,然而该作用机制并未完全阐明。因此,明确肿瘤细胞的磷酸化作用,探究肿瘤细胞整个蛋白磷酸化谱意义明显。目前,据了解,在胰腺癌的研究领域并没有针对同源性细胞(高侵袭转移习性的PC-1.0和低侵袭转移习性的PC-1)蛋白磷酸化谱的研究。本研究利用磷酸化蛋白芯片技术筛选PC-1和PC-1.0细胞中表达差异的蛋白及磷酸化位点,并对其中452个蛋白的582个磷酸化位点进行比对。此外,本研究中明确的磷酸化蛋白相关信号转导通路中各因子表现出明显变化。PI3K/PTEN/Akt/mTORC1和Raf/MEK/ERK是公认的胰腺癌中的活化通路。这些通路的下调将导致持续的细胞增殖,组织细胞的衰老和凋亡,并使细胞具有耐药性。MAPK信号转导通路是细胞外信号传递入核的重要通路,并具有高度保守性。该通路能将基因信息传递入核,并调节细胞增殖、分化、凋亡、基因表达和细胞对外界环境反应。以上述通路中关键蛋白为靶点,将成为胰腺癌和其他肿瘤的新型治疗方法。我们用液相色谱-质谱联用方法筛选PC-1和PC-1.0中差异表达的上清蛋白。LAR,又叫蛋白酪氨酸磷酸酶受体型F(PTPRF),是该试验筛选出的一种蛋白,其在PC-1中表达量为PC-1.0的2倍。蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)是调节多种细胞进程的重要蛋白,包括调节细胞生长、分化、有丝分裂周期和癌症转化过程。前期我们利用磷酸化蛋白芯片检测高侵袭转移习性的PC-1.0和低侵袭转移习性的PC-1蛋白磷酸化水平的差异。令人感兴趣的是,IRS-1的Ser636位点在PC-1细胞中的磷酸化水平与PC-1.0相比的比值为0.43。这一结果提示我们IRS-1可能在胰腺癌的侵袭转移过程中起关键性作用。本研究利用特异性siRNA瞬势转染高侵袭性细胞系PC-1.0及与其生物学功能相似的人类胰腺癌细胞Aspc-1,观察经siRNA转染前后各细胞系在增殖,侵袭和转移方面的变化。以明确IRS-1在胰腺癌细胞中的分子生物学作用。并进一步探究IRS-1及上下游关键分子的相互作用关系,以明确其在胰腺癌侵袭转移过程中的具体作用。从而为胰腺癌早期诊断和临床治疗寻找新靶点。材料与方法实验材料:仓鼠胰腺癌细胞株PC-1和PC-1.0以及人类胰腺癌细胞Aspc-1和Capan-2获赠于日本熊本大学。主要研究方法:1、磷酸化蛋白芯片检测磷酸化蛋白谱:PC-1和PC-1.0细胞裂解产物用磷酸化探针抗体芯片(Full Moon Biosystems,Sunnyvale,CA,USA)进行检测。用抗体列阵工具分析提取出的包含多种蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的细胞裂解液,该操作过程按厂家提供的操作流程进行。芯片用GenePix 4000扫描仪进行检测所得图像用GenePix Pro6.0(Molecular Devices,Sunnyvale,CA,USA)进行图像处理。芯片结果经由western blot验证。2、蛋白表达情况检测:用western blot检测IRS-1、LAR、AKT、MEK1和MEK2的总蛋白及磷酸化蛋白表达情况。3、Real-time PCR:检测IRS-1、LAR经siRNA瞬势转染前后的基因表达情况。4、形态学观察:显微镜下观察IRS-1瞬势转染前后的细胞形态学变化。5、体外侵袭实验:用Transwell实验检测IRS-1瞬势转染前后的侵袭能力变化。6、体外迁移试验:用Wound healing实验检测IRS-1瞬势转染前后的迁移能力变化。7、细胞增殖实验:用CCK-8细胞增殖实验检测IRS-1瞬势转染前后的细胞增殖变化。8、统计学处理:每次实验独立重复3次,采用spss13.0统计软件包对数据进行统计分析,结果以平均值±标准误(SEM)表示,两组间数据分析以Student’s t检验或方差分析表示,以P<0.05认为具有统计学意义。结果:1、我们利用磷酸化蛋白芯片分析了1318个靶点,以表达差异2倍为入选标准。57种蛋白入选,其中32种蛋白在PC-1.0中的表达量明显高于PC-1;而25种蛋白在PC-1.0中表达明显下调。2、为了验证磷酸化蛋白芯片的结果,我们从芯片结果中随机抽取了6种蛋白利用Western Blot进行蛋白表达水平验证。实验结果显示6种蛋白表达量在PC-1.0细胞中均升高,与芯片结果一致并证实了芯片结果的可靠性。3、

关键词： 医学文本   肝干细胞   平行文本   翻译方法   翻译实践报告  

摘要： 翻译国外优秀医学研究成果对于我国医学事业发展具有重要的意义。本文作者选取一篇医学论文作为翻译对象,以翻译过程中所遇到的问题为典型案例,对其相应的翻译方法进行了探讨,形成此份翻译实践报告。鉴于《干细胞生物学》第20章(《肝干细胞》)尚无中文译本,吉林省拓华生物技术公司研发部委托本文作者将其译成汉语。本篇属于科技英语中的医学文本,主要内容涉及肝脏构造、功能,以及肝细胞再生过程中发挥重要作用的细胞因子相关实验。本文作者译前准备了医学词典等工具书,搜集、细读了相关平行文本,在充分把握医学文本特点的基础上着手翻译。译文审校分为三步:自校,参考平行文本进行审校,专业人士审校。翻译过程中遇到的问题主要是:医学词汇的译法,被动语态的处理,长难句的译法,以及图表文字描述的译法。其中,医学词汇分为专业术语和准专业术语两类,关于专业术语的翻译,参考平行文本确定词义,并使用准专业术语的医学词义进行对应;对于被动语态的翻译,采取了保留被动语态和“变被动为主动”、添加施动者的翻译方法;有关翻译长难句的翻译,采用了拆分句子成分、颠倒语序、顺应原文句子结构、增译必要信息等翻译方法;翻译图表文字描述时,本文作者采取文字与图表相结合的翻译方法。基于本次翻译实践,本文作者发现,医学文本的翻译需要在以下几个方面下功夫:对比英汉语言词汇与句法上的差异,增强对两种语言的理性认识;勤于动笔实践,增强对语言转换的感性认识;弥补专业知识,增强从专业知识的语义域选择恰当语义的能力。

关键词： 复制缺陷型痘苗病毒   NTV   痘苗病毒载体   复制缺陷机制  

摘要： 痘苗病毒(Vaccinia virus,VACV)早期作为天花疫苗在人类消灭天花的战役中起到关键的作用,人类成功消灭天花后,痘苗病毒被引入实验室中作为基因表达载体被广泛用于多种感染性疾病以及癌症的预防和治疗。由于人类免疫缺陷病毒(HIV)感染以及癌症治疗和器官移植等医疗过程中需要进行免疫抑制,使痘苗病毒的安全性受到挑战。为了提高痘苗病毒载体的安全性,研究人员对痘苗病毒野毒株进行改造,获得了在多数人源细胞中无法有效复制的毒株,即复制缺陷型痘苗病毒。目前国际上常用的复制缺陷型痘苗病毒株有:修饰的痘苗病毒安卡拉株(Modified Vaccinia Ankara,MVA)、减毒的痘苗病毒哥本哈根株NYVAC和我国的痘苗病毒天坛株(Vaccinia Virus Tiantan,VTT)的衍生株-复制缺陷型痘苗病毒天坛株(Non-replication Tiantan Vaccinia Virus,NTV)。其中 MVA 和 NYVAC的生物生物学特性和复制缺陷机制已经研究的十分清楚,而NTV的复制缺陷机制了解甚少。本研究从NTV细胞的生物学特性入手,研究病毒的复制能力、细胞嗜性及其毒力,并对病毒功能蛋白表达水平和对应mRNA转录水平、病毒感染细胞中eIF2α磷酸化水平和PARP裂解物等进行检测,对NTV复制缺陷可能存在的机制作了初步的探究,为未来NTV作为疫苗载体的安全使用以及载体的进一步改造提供数据支持。主要研究内容和结果如下:1、制备痘苗病毒复制密切相关蛋白的多抗血清:用原核表达系统高效表达了痘苗病毒早期蛋白E3和晚期蛋白A17、F17,经His-Bind亲和层析柱或切胶纯化获得了纯化的目的蛋白,蛋白纯度均达到90%;免疫小鼠获得了相应的鼠多抗血清,为检测痘苗病毒的蛋白表达水平提供了特异性抗体。2、NTV 的细胞生物学特性:在 CEF、BHK-21、Vero、143TK-、HeLa、2BS、和Hep-2细胞系中检测病毒的在细胞中的复制能力和细胞间的扩散能力,结果发现NTV的母毒株VTT在上述细胞中均能够形成明显的噬斑并且可以产生高低度的子代病毒,而NTV仅可在CEF、BHK-21两种细胞系中形成噬斑,病毒的复制能力与VTT相当。但是在人源细胞143TK-、HeLa、2BS、Hep-2以及Vero上无法形成噬斑,不能有效复制和扩散。因此,NTV在大部分人源细胞和其他动物细胞中的复制能力减弱或者复制受阻,无法有效复制。3、NTV复制缺陷机制的初步探究主要通过对病毒蛋白的表达水平、转录水平及病毒感染的细胞中eIF2α磷酸化水平和PARP裂解产物的检测来分析。NTV早期蛋白E3和晚期蛋白A17/A27/F17在允许细胞BHK-21表达水平与VTT无统计学差异,可正常表达。在非允许细胞HeLa中,NTV的E3和A27蛋白与VTT比能正常表达,而晚期蛋白A17和F17的表达明显受阻;为了分析蛋白受阻的原因,对NTV在非允许细胞中的转录水平和eIF2α磷酸化水平进行了检测,结果表明NTV和VTT感染HeLa细胞同一时间点的A27/A17/F17蛋白的转录水平无统计学差异,并且NTV感染的细胞eIF2α磷酸化水平升高,我们判断蛋白表达受阻发生在蛋白的翻译阶段。NTV感染的HeLa细胞中凋亡标志因子PARP裂解产物的检测结果表明NTV感染的细胞中有大量的PARP裂解产物,而VTT感染的细胞中仅有微弱的PARP裂解产物,说明NTV感染的HeLa细胞引发了细胞凋亡,而细胞发生凋亡会直接限制病毒的复制增殖。总之,本文研究通过对NTV在不同种属和组织来源的细胞上的复制能力、细胞嗜性,诱发的细胞病变进行测定,发现NTV在大多数哺乳动物细胞中无法有效复制;用制备的痘苗病毒早期蛋白E3和晚期蛋白A17、F17、A27鼠多抗检测了 NTV在HeLa细胞中相应早、晚期蛋白的表达水平;结果显示NTV在非允许细胞HeLa中晚期蛋白A17和F17表达受到抑制,并且抑制发生在蛋白翻译阶段。同时研究发现NTV感染的细胞可检测到PARP的裂解产物,说明NTV感染后期诱发了细胞凋亡。因此,由以上结果我们分析初步得出结论:NTV的复制缺陷机制可能与晚期蛋白A17和F17翻译水平受阻和细胞凋亡有关。

关键词： LMTK3   A549   增殖   迁移   周期  

摘要： 目的探讨LMTK3在人肺腺癌细胞株A549中下调表达后对细胞增殖、迁移、周期及凋亡的生物学特性的影响。方法将含有LMTK3的慢病毒短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)的干扰载体与慢病毒包装辅助质粒共转染人胚293T细胞后,收集上清感染肺癌细胞A549,经嘌呤毒素筛选稳定干扰LMTK3表达的靶细胞。RT-PCR检验转染前后LMTK3m RNA在A549细胞中的表达水平,分别采用CCK8法检测细胞的增殖能力,划痕实验及transwell小室实验检测的细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡和周期。结果我们通过sh RNA技术成功构建LMTK3稳定下调表达的肺癌细胞株sh LMTK3及对照组Scramble。RT-PCR结果显示,与Scramble组比较,sh LMTK3组LMTK3 m RNA水平显著下降(t=10.05,P<0.001);CCK8检测结果显示,在培养24、48、72h后,sh LMTK3组细胞相对增殖水平(0.305±0.018,0.461±0.044,0.74±0.029)显著低于Scramble组(0.354±0.011,0.551±0.027,0.881±0.028),差异有统计学意义(t=5.24,P<0.001;t=3.91,P<0.01;t=7.70,P<0.001);划痕试验结果表明,划痕后24h,sh LMTK3组细胞相对迁移倍数(0.51±0.096)显著低于Scramble组(1±0.029),差异有统计学意义(t=4.81,P<0.01);Transwell迁移实验结果表明,sh LMTK3组迁移到膜下的细胞数目(161±9.29)明显低于Scramble组(308.66±17.60),差异有统计学意义(t=7.42,P<0.01);细胞周期检测结果显示,抑制LMTK3的表达可将细胞可阻滞在G1期,细胞的增殖受抑制,差异有统计学意义(t=4.35,P<0.05);细胞凋亡试验显示,抑制LMTK3的表达对A549细胞的凋亡率无影响(t=2.61,P>0.05)。结论成功构建LMTK3稳定下调表达的肺细胞株A549,并证实LMTK3下调表达后可显著抑制A549细胞的增殖及迁移能力,发生G1期阻滞,提示肺癌细胞异常表达LMTK3参与调节其肿瘤生物学行为。

关键词： 生长抑制因子3   乳腺癌   慢病毒  

摘要： [目的]生长抑制因子1～5(Inhibitor of Growth1～5),即ING基因家族1～5。是多种肿瘤的抑制基因。通过多种机制参与了肿瘤细胞的生长、增殖、DNA修复、侵袭、迁移和凋亡等不同阶段的生物学过程。ING3作为家族基因里结构最特殊的一员,尚未报道在乳腺癌中的相关研究。本实验拟通过重组慢病毒侵染乳腺癌细胞株MCF-7和HCC1937,通过RT-PCR和Western Blot验证其转染效率,通过划痕、侵袭、迁移实验。探讨生长抑制因子3的表达对乳腺癌细胞生物学特性的影响。是否如ING3在多种肿瘤中一样起到抑制作用,为临床治疗乳腺癌提供新的基因靶点和思路。[方法]1、分别以10%的FBS混合DMEF-12和RPMI,培养乳腺癌细胞株MCF-7和 HCC1937。2、以ING3为作用靶点合成LV5-ING3和LV5-NC并进行慢病毒滴度检测。3、以LV5-ING3侵染乳腺癌细胞株MCF-7、HCC1937,同时以LV5-NC侵染对应细胞株作为阴性对照。4、72h时即完成荧光蛋白表达,并在荧光显微镜下观察慢病毒和乱序病毒的侵染效率。5、RT-PCR 验证 LV5-ING3 侵染后的 MCF-7 和 HCC1937 的 ING3 表达。6、通过Western Blot检测侵染ING3后的MCF-7和HCC1937中ING3蛋白的表达。7、通过细胞划痕实验来对比过表达ING3的乳腺癌细胞MCF-7、HCC1937与阴性对照细胞迁移能力的影响。8、通过侵袭和迁移实验来对比过表达ING3的乳腺癌细胞MCF-7、HCC1937与阴性对照细胞的迁移及侵袭能力的影响。[结果]1、RT-PCR监测显示LV5-ING3能提高乳腺癌细胞株MCF-7和HCC1937中ING3的表达水平(p<0.05)2、Western Blotting结果显示经LV5-ING3侵染乳腺癌细胞株MCF-7和HCC1937后,ING3蛋白表达增加(p<0.05)3、细胞划痕实验结果表明:经LV5-ING3侵染的MCF-7和HCC1937的细胞迁移速度明显减慢(P<0.05)。4、细胞侵袭和迁移实验表明:经LV5-ING3侵染的MCF-7和HCC1937的侵袭和迁移能力明显下降(p<0.05)。[结论]1、过表达ING3可明显抑制乳腺癌细胞株MCF-7、HCC1937的迁移和侵袭的能力。

关键词： 神经干细胞   条件培养液   雪旺细胞   增殖   迁移  

摘要： 研究背景多年以来神经损伤后的修复一直是医学难题,迄今为止,神经的自体移植仍然是神经断端治疗的“金标准”,但是此种方式存在供体不足的缺点。为此,人们寻找各种替代材料,如壳聚糖、蚕丝蛋白、纤维导管等,这些材料对于神经功能的修复,虽然取得一定的进展,但是仍然不能令人满意。神经损伤后包裹轴突的髓鞘细胞-雪旺细胞起着主要的修复作用,对轴突的再生修复起着支持和引导的作用,并能分泌多种细胞因子营养支持轴突的再生并能吞噬细胞炎症过程中产生的细胞碎片。我们前期研究发现间充质干细胞能修复SD大鼠坐骨神经的压榨伤,具有使神经功能得到改善的作用。胚胎干细胞是全能干细胞,具有向各个方向分化的潜能,经适当的微环境诱导可以向特定的细胞群分化,具有广阔的临床应用前景和价值,同时人胚胎干细胞及其诱导产物,在进一步的临床应用中避免了异种移植带来的免疫排斥反应,人胚胎干细胞源神经干细胞在神经损伤的修复中可能提供各种营养因子和信号帮助修复,是潜在的神经修复组织功程材料。研究目的探讨人胚胎干细胞源神经干细胞的诱导分化及神经干细胞条件培养液(human embryonic stem cell-derived neural stem cells conditioned medium,h ESCN-CM)对大鼠坐骨神经雪旺细胞的生物学作用,为周围神经损伤修复提供新的思路。研究方法(1)人胚胎干细胞源神经干细胞诱导分化及神经球培养;(2)流式细胞术、免疫荧光鉴定神经干细胞;(3)SD大鼠原代雪旺细胞的分离纯化;(4)h ESCN-CM制备;(5)CCK-8实验检测雪旺细胞的增殖;(6)划痕实验和Transwell实验检测雪旺细胞的迁移;(7)RT-q PCR检测雪旺细胞的基因表达。研究结果(1)人胚胎干细胞经诱导分化后,呈现典型的玫瑰花环结构,人胚胎干细胞源神经干细胞膜表面不表达Nestin、βⅢTubulin,细胞质内表达Nestin、βⅢTubulin,双阳性细胞高达98.14%。(2)大鼠雪旺细胞经纯化后高表达S100、MBP阳性率分别为99.0%和94.6%。(3)50%h ESCN-CM能促进雪旺细胞的增殖,100%h ESCN-CM为抑制增殖。50%h ESCN-CM和100%h ESCN-CM均能促进RSC96的增殖。(4)h ESCN-CM能促进雪旺细胞的迁移。(5)在50%h ESCN-CM作用下4 h,NT3、VEGF、b FGF、NGF的表达增高,IGF-1变化不明显。研究结论(1)体外成功诱导人胚胎干细胞分化为神经干细胞。(2)h ESCN-CM在适当浓度可以促进雪旺细胞的增殖和迁移。(3)h ESCN-CM在适当浓度能促进雪旺细胞NT3、VEGF、b FGF、NGF基因表达。

关键词： 非编码   陈玲玲   生物化学   细胞生物学   DDX21   pre-rRNA   聚合酶  

摘要： 文章简介人体细胞中含有约400个拷贝的核糖体DNA(r DNA)序列,分布于五条染色体上,这些含有r DNA序列的区域被称为核仁组织区(nucleolar organizing regions,NORs)。核仁围绕NOR形成,是RNA聚合酶I转录核糖体RNA(r RNA)以及r RNA加工的重要场所。

关键词： 信息化   细胞生物学与医学遗传学   蓝墨云班课  

摘要： 本文将学生的网络交友平台应用于《细胞生物学与医学遗传学》的教学中,在采用多媒体授课的同时,也将手机软件——蓝墨云班课运用到教学中,实现了信息化教学。

关键词： 富血小板血浆   去白细胞富血小板血浆   分解代谢   髓核间充质干细胞  

摘要： 目的:比较去白细胞富血小板血浆(P-PRP)与含白细胞富血小板血浆(L-PRP)对兔椎间盘髓核来源间充质干细胞(NPMSCs)增殖、分化、细胞外基质和NF-κB信号通路激活的影响。方法:实验选取24只雌性,6-8个月龄,体重3-4kg新西兰大白兔。每只大白兔分别抽取30ml动脉血,随机分为对照组、P-PRP组和L-PRP组。随后提取兔椎间盘髓核来源间充质干细胞并鉴定。选取P2 NPMSCs在transwell细胞小室中与对应的不同浓度(0%、5%、10%和20%Vol/Vol)的PRPs(P-PRP或L-PRP)共培养三天后,CCK-8检查各组细胞增殖率。再选取各组P2细胞,分别加入各组对应的培养基(普通培养基、10%P-PRP、10%L-PRP)共培养。14天后,使用实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)测定各组细胞MSCs干性基因(Oct4,Nanog)、髓核细胞相关基因(Collagen II,Aggrecan)、炎症因子(TNF-α,IL-1β)以及基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-13)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA法)测定TNF-α、IL-1β、MMP-1和MMP-13浓度;Western Blot检测NF-κB/p65、Collagen II以及Aggrecan蛋白表达;免疫荧光实验检测各组细胞Collagen II以及Aggrecan蛋白表达。结果:NPMSCs与PRPs共培养后,其增殖率表现出对PRPs剂量依赖性,其中在PRPs浓度10%时细胞增殖率最大(P<0.05)。共培养两周后,实验组(P-PRP组或L-PRP组)细胞形态由纺锤形样细胞逐渐转变成瘦长梭形髓核样细胞,同时,实验组干细胞标志基因(Oct-4,Nanog)的表达是对照组的30%,而髓核细胞胞相关基因(CollagenII,Aggrecan)的表达,是对照组3至4倍(P<0.05)。L-PRP中白细胞和炎症因子浓度(TNF-α,IL-1β)明显高于P-PRP组(P<0.05)。与P-PRP组相比,L-PRP组细胞中炎症因子(TNF-α,IL-1β)、基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-13)以及NF-κB p65表达明显增多(P<0.05)。P-PRP组细胞外基质相关蛋白(Collagen II,Aggrecan)表达明显高于L-PRP组(P<0.05)。结论:P-PRP和L-PRP均可以促进NPMSCs增殖并诱导其成髓核样细胞分化,剔除PRP中白细胞可以减少炎症反应,避免细胞NF-κB信号通路的激活以及抑制细胞分解代谢反应。