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关键词： 程序性细胞死亡蛋白1   脱落乳牙干细胞   牙髓干细胞   细胞增殖   自我更新   多向分化  

摘要： 目的:间充质干细胞广泛存在于人体多种器官组织中,包括骨髓、脐带、脂肪组织、肌肉组织以及牙源性组织等。牙髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell from dental pulp,MSC-DP)分离提取于脱落乳牙或成熟恒牙的牙髓组织,是一种独特的胚胎神经嵴源性的成体干细胞群。MSC-DP具有比经典骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)更强的自我更新能力;体外诱导培养能够分化为成骨/成牙本质细胞、脂肪细胞、软骨细胞以及更强神经细胞分化潜能,在体内能够形成独特的牙髓牙本质样组织;同时MSC-DP具有优越的免疫调节性能,能够有效调节CD4+辅助性T细胞、调节性T细胞等多种免疫细胞功能,从而治疗自身免疫性疾病。MSC-DP因其来源丰富、获取容易以及独特优秀的生物学性能,成为干细胞治疗中极具应用前景的干细胞源,但其生物学性能的调控机制尚不清楚。程序性细胞死亡蛋白l(programmed cell death protein 1,PD-1)是一种免疫抑制性受体,表达于活化T细胞、B细胞、树突细胞、自然杀伤细胞等多种免疫细胞。PD-1受其配体激活后,通过抑制CD4+辅助性T细胞的早期活化调控T细胞应答,从而引起机体免疫耐受。此外,PD-1在肿瘤免疫中亦发挥关键作用,通过诱导CD8+T细胞凋亡,并抑制其生物学功能,从而促进肿瘤细胞免疫逃逸。以PD-1信号为靶点是现代免疫性疾病和抗肿瘤免疫治疗中极具应用前景的代表性治疗方法。然而,学者通常认为“细胞凋亡相关受体蛋白”PD-1并不表达于间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),其是否调控干细胞功能更未见相关研究。本课题旨在研究PD-1对干细胞生物学性能,特别是对人牙髓间充质干细胞性能的调控作用及其具体分子机制,为揭示MSC-DP生物学性能的调控机制和PD-1在干细胞领域的生物学功能奠定理论依据和实验基础。研究方法:1、体外分离培养人BMMSCs和胚胎神经嵴来源的人MSC-DP,后者包括脱落乳牙干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)、牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)。2、应用 Western blot、qPCR、免疫荧光染色、流式细胞术等检测BMMSCs和MSC-DP中PD-1的表达情况。3、通过siRNA沉默技术调控PD-1的表达水平、流式细胞分选技术筛选PD-1阳性/阴性细胞群,研究PD-1在BMMSCs和MSC-DP干细胞生物学性能中的调控作用。4、通过siRNA沉默技术、化学抑制剂等方式调控PD-1的表达水平、CRISPR/Cas9技术制备PD-1基因敲除的MSC-DP,探索PD-1调控MSC-DP干细胞生物学性能的具体分子机制。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学意义。研究结果:1、PD-1在MSC-DP的细胞膜上呈持续性表达,而BMMSCs不表达PD-1;PD-1与多种干细胞表面标记物共表达于MSC-DP和人牙髓组织,流式细胞术检测显示PD-1+/CD73+双阳性细胞比率为16.76%、PD-1+/CD90+双阳性细胞比率为17.55%、PD-1+/CD105+双阳性细胞比率为11.86%;且PD-1表达水平随MSC-DP传代扩增而降低。2、siPD-1沉默MSC-DP的PD-1表达,MSC-DP的增殖率、细胞群倍增次数以及S/G2/M期比例明显下降(P<0.05),而MSC-DP成骨/成牙本质向和成神经向分化能力明显提高(P<0.001);与PD-1-MSC-DP相比,PD-1+MSC-DP具有显著升高的细胞增殖率、细胞群体倍增次数以及S/G2/M期比例(P<0.001),同时具有显著降低的成骨/成牙本质向和成神经向分化能力(P<0.001)。siPD-1转染处理对BMMSCs生物学性能无明显调控作用。3、MSC-DP通过PD-1及下游SHP2/ERK/Notch信号通路调控其增殖率、细胞群体倍增次数,从而促进其自我更新;通过PD-1及下游SHP2/ERK/β-catenin信号通路调控其钙结节形成能力和成骨蛋白表达水平,从而抑制成骨/成牙本质向分化。结论:1、胚胎神经嵴来源的MSC-DP稳定表达细胞膜蛋白PD-1,PD-1可作为一种新的牙源性干细胞表面标记物。2、PD-1能够促进MSC-DP自我更新能力,抑制其多向分化潜能,是维持MSC-DP生物学性能的关键因素。3、PD-1通过SHP2/ERK/Notch信号通路调控MSC-DP增殖;通过SHP2/ERK/β-catenin信号通路调控MSC-DP成骨/成牙本质向分化。

关键词： 胃癌   胃癌细胞株MGC-803   增殖   侵袭   迁移  

摘要： 目的:应用siRNA-Kiss-1（Kiss-1的小干扰RNA）下调Kiss-1的表达后,检测肿瘤转移抑制基因Kiss-1在胃癌细胞系MGC-803中的表达情况,验证转染成功后,观察胃癌细胞株MGC-803的细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化,分析Kiss-1对胃癌细胞株生物学功能的影响。方法:1利用CO2细胞培养箱培养低分化胃癌细胞株MGC-803,以进行本研究的细胞学功能学实验。2使用脂质体Lipofectamine 2000介导细胞转染,致胃癌细胞株MGC-803中目的基因Kiss-1的沉默。3实时荧光定量PCR方法检测转染实验组（siRNA-Kiss-1）、阴性对照组（siRNA-nc）及空白对照组（con）培养48h后MGC-803中Kiss-1 mRNA的表达情况。4使用CCK-8细胞增殖实验检测转染实验组（siRNA-Kiss-1）、空白对照组（con）及阴性对照组（siRNA-nc）中MGC-803的细胞增殖情况。5通过Transwell小室来检测转染实验组（siRNA-Kiss-1）、阴性对照组（siRNA-nc）及空白对照组（con）中MGC-803的细胞迁移、侵袭情况。6应用划痕实验检测转染实验组（siRNA-Kiss-1）、阴性对照组（siRNA-nc）及空白对照组（con）中MGC-803的细胞迁移能力。结果:1实时荧光定量PCR检测结果:Kiss-1在实验组（siRNA-Kiss-1）中低表达,与空白对照组（con）和阴性对照组（siRNA-nc）比较差异有统计学意义（P<0.05）2 CCK-8增殖实验:实验组（siRNA-Kiss-1）)中的MGC-803吸光度在48h、96h显著低于空白对照组（con）与阴性对照组（siRNA-nc）(P<0.05)3 Transwell实验:实验组（siRNA-Kiss-1）中MGC-803的细胞迁移、侵袭细胞数量比空白对照组（con）和阴性对照组（siRNA-nc）均显著增加（P<0.05）4划痕实验表明:实验组（siRNA-Kiss-1）中MGC-803的细胞划痕愈合能力相对于空白对照组（con）和阴性对照组（siRNA-nc）均显著增强（P<0.05）结论:1 CCK-8增殖实验表明,沉默Kiss-1的表达后对MGC-803有抑制作用,提示Kiss-1不能抑制胃癌细胞的增殖能力。2 Transwell实验表明,沉默Kiss-1的表达后,MGC-803细胞迁移和侵袭能力均增强,提示Kiss-1抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力。3划痕实验表明,沉默Kiss-1的表达后,MGC-803的迁移能力变强,提示Kiss-1抑制胃癌细胞的迁移能力。4本组细胞功能实验结果提示,Kiss-1有潜力成为抑制胃癌侵袭与转移的治疗新靶点。

关键词： 猪   鼠胚胎干细胞   异种细胞融合   融合效率   异种融合细胞特性  

摘要： 细胞融合实验始于1969年,细胞融合是研究细胞多能性、命运决定及基因调控的重要手段。然而目前文献报道的细胞融合方法效率一般在1%左右,且异种细胞融合效率更低。通过细胞融合改变细胞的生物学特性,为进化生物学、发育生物学和遗传学等研究提供新的模型和工具。猪在生理结构、形态学和免疫学上与人有着许多相似的特性,因此猪在人类疾病临床研究中常被作为动物疾病模型,但是猪的胚胎干细胞系仍然还没有被建立成功,通过探索鼠猪异种融合细胞的特性为猪胚胎干细胞建系的研究工作添砖加瓦。针对这些问题,本研究进行以下三部分的探索:(1)探索提高细胞融合效率的方法;(2)探索鼠猪异种融合细胞的生物学特性;(3)探索鼠猪异种融合细胞所依赖的生长因子。为提高细胞融合效率,有效的为相关研究提供更丰富的研究材料,本研究采用单细胞融合方法,将小鼠胚胎干细胞(mESC)与猪的成纤维细胞(PEF)以及猪多能性干细胞进行融合,用0.25%的胰酶将细胞消化成单细胞,利用细胞凝集素构建一对一的细胞对,在含有50%聚乙二醇中培养1min,随后将细胞继续培养7天,成功融合的细胞既表达红色荧光也表达绿色荧光,结果发现单细胞融合法的克隆效率(0%)显著高于传统融合的效率。然后,将融合细胞在小鼠胚胎干细胞的培养条件下培养,融合细胞可传至30代左右,并可以进行正常的冻存和复苏。融合细胞既表达猪的种属特异基因Stat3,也表达小鼠的种属特异基因Wdr59和Akt1。融合细胞呈AP阳性,多能性基因Sox2相对于猪成纤维细胞高表达。经过AKT、BMP、TGF、FGF、LIF、WNT等信号通路的相关因子检测,我们发现融合细胞与小鼠胚胎干细胞更相似,Bmp4,Tgfβ2,Fgfr1等基因处于高表达水平。另外,核型鉴定结果表明,融合细胞中猪染色体严重丢失。通过上述研究,得到结论为:(1)通过优化融合方法我们成功的建立单细胞融合体系,适用于同种细胞融合和异种细胞融合,融合效率高,操作方便;(2)我们成功获得两株同种融合细胞系和四株异种融合细胞系,融合细胞呈AP阳性;表达多能性基因;可体外形成拟胚体,具有向三胚层分化能力;(3)融合细胞系高表达Bmp4,Tgfβ2,Fgfr1等信号通路关键因子。(4)小鼠染色体在异种融合细胞系中较稳定存在,而猪染色体丢失较严重。

关键词： 甲状腺乳头状癌   BMP-4   生物学特性   上皮间质转化   信号通路  

摘要： 研究背景甲状腺癌作为常见的内分泌器官来源的恶性肿瘤,发病率呈逐渐上升趋势,其中最常见的类型是甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma,PTC)。经过有效合理的治疗,PTC一般有着良好的预后,但是有部分乳头状癌具有较高的侵袭性,出现肿瘤进展、转移和术后复发等,导致患者的生存率及生存质量下降。研究显示甲状腺癌患者中有20～40%的病人发生肿瘤复发,3～15%甲状腺癌患者存在远距离转移,如果在疾病诊断时即存在远距离转移,则此类患者预后更差,5年生存率仅为50%。因此,研究PTC细胞的生长、浸润和转移过程,寻找PTC中差异性表达、预测肿瘤侵犯、转移的生物学标记和干预治疗的分子,对于进一步提高患者的治愈率与生存率具有重要的意义。癌上皮细胞在某些因素作用下可以发生形态改变、丢失极性,细胞间黏附性下降、经过细胞骨架重塑并获得表达间质细胞成分,从而展现出迁移的表型,这个过程被称为上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT),其分子标志物包括上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、角蛋白,间质细胞标志物如波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)等。通过EMT,肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力,在肿瘤转移中发挥作用,这是对于肿瘤转移解释的重要理论,是近年的研究热点。研究显示,EMT在甲状腺癌细胞侵袭迁移中起重要作用。骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic proteins,BMPs)是一个细胞外信号分子家族,是转化生长因子-β(Transforming growth factor-beta,TGF-β)超家族的成员之一。BMPs拥有多种作用,能够调节细胞的增殖、分化、凋亡和迁移、决定细胞命运,并且研究表明BMPs在各种恶性肿瘤中存在异常表达现象,在肿瘤生长及侵袭迁移中发挥重要作用。BMPs发挥作用主要是通过Smad依赖性及非Smad依赖性两条信号通路,其中Smad依赖性通路(即骨形成蛋白信号通路)是一个经典的信号通路,Smad蛋白是该通路中细胞内信号传导的枢纽,其中受体调节Smads(R-Smads)包括Smadl、2、3、5、8,BMPs信号转导通路中是Smadl、5、8参与。此外BMPs还可激活其他信号通路来发挥作用,如细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinases,ERK)、p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 Mitogen-activated protein kinases,p38 MAPK)通路。作为BMPs家族的一员,BMP-4在调节各种类型细胞的生物学行为方面有着广泛的作用,例如对于胚胎发生、个体形成、非对称器官的生长以及造血系统的发育等都有着影响。研究表明,BMP-4蛋白在多种类型肿瘤里表达异常,且与肿瘤的生长、侵袭迁移及预后有关,并且多项研究表明BMP-4与肿瘤细胞的上皮间质转化有关。迄今为止,关于BMP-4在PTC中作用的研究尚未见报道。既然研究发现PTC的侵袭及转移与上皮间质转化有关,而BMP-4在诱导上皮间质转化中发挥重要作用,并且BMP-4对肿瘤细胞的生长也有影响,那么BMP-4在PTC中表达如何?对PTC细胞的生物学特性是否有影响?是否可促进PTC细胞发生上皮间质转化?BMP-4在PTC中发挥作用相关的信号通路是什么?针对上述问题,本研究进行了探讨。第一部分BMP-4在甲状腺乳头状癌组织中的表达及与侵袭转移的关系目的研究Bone morphogenetic protein 4(BMP-4)在甲状腺乳头状癌组织中的表达及与肿瘤侵袭转移的关系。方法1.收集青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院甲状腺外科收治的82例PTC患者的癌组织及其中41例患者的癌旁组织,所选病例均经病理诊断为PTC,并收集患者的临床病理资料。2.采用免疫组织化学方法检测PTC组织及癌旁组织中BMP-4的表达。3.分析BMP-4表达与PTC患者临床病理特征之间的关系(性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤是否多灶、有无包膜浸润、有无淋巴结转移及TNM分期)。结果***组织中存在BMP-4的表达,BMP-4蛋白位于细胞浆内,呈弥漫性分布,表达强弱不等,由弱阳性到强阳性。癌旁组织中BMP-4表达为阴性。BMP-4在PTC与癌旁组织中的表达有显著差异。***组织中BMP-4的表达与患者的性别、多灶性、淋巴结转移无相关性(P均>0.05)。BMP-4在年龄≥45岁组患者中的高表达率高于年龄<45岁组(P<0.01),在肿瘤>1cm患者中的高表达率高于肿瘤≤1cm患者(P<0.01),在有包膜浸润患者中的高表达率高于无包膜浸润患者(P<0.01),在TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者中的高表达率高于Ⅰ+Ⅱ期患者(

关键词： 医学细胞生物学   科研素养  

摘要： 细胞生物学是一门生命科学的前沿学科,同时也是医学专业的一门基础课程。在该课程的教学过程中,面对知识更新速度快、知识点多、课时量少、学生基础参差不齐等因素而导致教学效果不理想的问题。我们采用了优化教学内容、利用多媒体教学、启发式教学、案例教学方法、调整考核结构等方式提高学生的学习兴趣及动力,以期优化教学效果,适应应用型课程改革的要求。细胞生物学是一门生命科学的前沿学科,同时也是医学专业的一门基础课程。其也是以后学习组织胚胎学、医学免

关键词： 前列腺素E2   乙酸羟基乙酸共聚物   羟基磷灰石   缓释   药物载体   成骨样细胞   生物学性能   基因表达  

摘要： 目的:前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）是具有高生物活性的脂类化合物,是一种复杂的多功能的骨代谢调节因子。其参与血管形成、骨修复和软骨代谢。PGE2现已被公认为组织工程骨和软骨组织再生解决方案中重要的靶分子。作为口腔领域牙周改建的信号分子,PGE2加快正畸牙齿移动已在大量的研究中得到证实。在骨组织里PGE2主要由成骨细胞合成,可直接与成骨细胞和破骨细胞作用,亦可与骨髓细胞间接作用,通过增加破骨细胞和成骨前体细胞的募集介导骨改建。PGE2对骨改建的作用是双相的,在低浓度或是有糖皮质激素存在的情况下,PGE2可促进成骨细胞的分化从而促进骨形成;而在高浓度或是有胰岛素样生长因子-1存在的情况下,PGE2可抑制胶原的合成从而抑制骨形成。在正畸治疗过程中PGE2起关键的调控作用,通过调节骨形成和吸收直接或间接改建牙槽骨。但由于PGE2是一种局部激素,局部合成,局部灭活,半衰期极短（一般是1-2分钟）,限制了它的应用。因此,在正畸领域的研究中,构建PGE2控释系统缓释PGE2就显得尤为重要。乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）是聚乳酸与羟基乙酸按照不同配比制备成的生物降解型高分子聚合缓释材料,是少数取得美国FDA批准的载体材料之一,已用于临床。其毒性低、安全性高、稳定性好,生物相容性良好,常作为多肽、蛋白质及抗肿瘤类药物的载体。其通过其自身降解,可在几周或几个月内以较稳定的速率释放药物,维持有效血药浓度,减少药物半衰期的给药次数,适用于半衰期短而又需要长期使用的药物。现已广泛用于组织工程支架和药物载体。有研究发现纳米羟基磷灰石（nano-hydroxyapatite particle,nano-HAP）有促进成骨细胞增殖、粘附和矿化相关蛋白表达的作用。骨基质中矿物盐约占35%,主要为钙和磷酸组成的羟基磷灰石（Hydroxyaptite,HA）。骨基质的形成是成骨细胞分化和矿化的结果,对于骨的形成至关重要。当成骨细胞进入分化阶段,分泌大量细胞外基质,包I括型胶原,非胶原蛋白和蛋白聚糖,在成骨细胞及各种离子、蛋白、脂类、酶调节下,钙离子和磷酸根离子达到一定浓度后在基质小泡中矿化形成羟基磷灰石,进而沉积于I型胶原纤维上继续矿化生成更多的羟基磷灰石。人工合成的羟基磷灰石无论在组成还是结构上都与人体硬组织极为相似,因其良好的生物相容性、骨诱导性已被广泛用做生物医用材料和药物载体。HA降解释放的Ca2+、PO43-离子,可以促进骨基质矿化加速新骨形成。有研究证实,HA和PLGA复合后可明显提高基础材料的强度,减慢降解速度,其碱性产物可中和部分聚乳酸产生的酸性产物,表面粗糙度和孔隙率的增加能促进成骨细胞的附着及药物的吸附。研究开发优良载体系统以克服药物及不同载体材料的弱点对医用领域至关重要。本研究构建负载PGE2的PLGA微球（PGE2-PLGA-MSs）药物载体拟解决PGE2半衰期短的问题,通过药物包封率、缓释曲线的实验研究以确定载体的理化性质和缓释性能;通药物及载体对MC3T3-E1细胞生物学性能及成骨基因表达的影响拟明确低浓度PGE2促进成骨的浓度区间及载体的缓释效应,以及对成骨细胞增殖分化的影响规律;通过对成骨细胞同时施加PGE2与羟基磷灰石二种成骨诱导因素观察二者对成骨细胞生长分化作用是否正向促进;通过HAP-PLGA-PGE2杂化系统构建寻找优良的药物载体系统及探索其制备方法和条件。我们期望通过上述系列研究,能为缓释药物载体的开发利用提供研究方向和量化指标。研究方法:采用膜乳化法制备粒径均匀的PGE2-PLGA-MSs,酶联免疫分析法测定微球的载药量和体外药物释放。以无添加物培养基、空白微球、羟基磷灰石（HAP）作为对照组,PGE2、PGE2+HAP和PGE2-PLGA-MSs（0.0125、0.05、0.2、0.8、3.2、12.8μmol/L）为实验组,与成骨样细胞株MC3T3-E1孵育,分别于不同时间用MTT法检测成骨样细胞株MC3T3-E1增殖活性、碱性磷酸酶试剂盒检测样本的A值、显微镜计数每个视野下的矿化结节数量、流式细胞仪检测细胞增殖周期和凋亡,RT-PCR检测成骨相关基因及转录因子表达水平。结果:1、PLGA负载PGE2,实验制备的PGE2-PLGA-MSs粒径约5μm,且粒径分布窄;PLGA（IV=0.28）为载体材料的微球载药量为2.5%,48 h药物累积释放量约80%。2、PGE2、PGE2+HAP、缓释PGE2对MC3T3-E1细胞增殖具有双向调节作用,0.0125μmol/L浓度促进细胞增殖,0.2、0.8、3.2、12.8μmol/L浓度抑制细胞增殖且具有剂量依赖性,缓释PGE2和PGE2+HAP在24h时抑制作用低于等浓度的PGE2,而在48h、72h三组无显著差异;0.05μmol/L浓度对

关键词： UCA1   子宫内膜异位症   凋亡   LC3   VMP1   在位内膜细胞  

摘要： 目的:本研究旨在通过体外实验验证UCA1在子宫内膜异位症发病机制中的作用。采用慢病毒介导的RNAi技术对含si-UCA1的慢病毒颗粒进行包装。转染子宫内膜异位症在位内膜细胞(ESCs),稳定沉默UCA1基因的表达,深入探讨UCA1基因对该细胞增殖、凋亡及自噬的作用。研究方法:1、原代培养子宫内膜内异症在位内膜间质细胞(ESCs)。2、利用si-UCA1序列的慢病毒转染ESCs细胞。分组:UCA1基因沉默组(si-UCA1),转染阴性对照组(ESCs-C),未转染组(ESCs)。3、利用实时荧光定量PCR技术检测沉默UCA1基因后mRNA在ESCs中的表达。4、利用CCK8细胞增殖实验检测UCA1表达改变前后细胞增殖能力的变化。5、利用流式细胞仪实验检测UCA1表达改变前后细胞凋亡能力的改变。6、利用Lyso tracker实验检测UCA1表达改变前后细胞溶酶体荧光强度的变化。7、利用Westernblot检测UCA 1表达改变前后ESCs中LC3和VMP1的表达变化。结果:1、si-UCA1对UCA1 mRNA表达的影响:si-UCA1组UCA1 mRNA相对表达水平显著低于ESCs组(P<0.01)。ESCs-C组UCA1 mRNA相对表达水平与ESCs组无明显差异(P>0.05)。2、si-UCA1降低ESCs细胞增殖能力:si-UCA1转染ESCs细胞后明显降低细胞的增殖能力。si-UCA1在24h,48h,72h各个时间点的相对增殖能力明显低于ESCs组相应各个时间点的增殖能力(P<0.05)。ESCs-C组在24h,48h,72h各个时间点的相对增殖能力与ESCs组相应各个时间点增殖能力基本一致(P>0.05)。3、si-UCA1促进ESCs细胞凋亡能力:si-UCA1组细胞凋亡率明显高于ESCs组(P<0.01),ESCs-C组细胞凋亡率与ESCs组比较差异无统计学意义(P>0.05)。4、si-UCA1促进ESCs细胞溶酶体活性:si-UCA1组细胞溶酶体荧光强度明显高于ESCs组(P<0.01),ESCs-C组细胞溶酶体荧光强度与ESCs组比较差异无统计学意义(P>0.05)。5、si-UCA1对LC3和VMP1蛋白表达的影响:si-UCA1组LC3和VMP1蛋白相对表达水平显著高于ESCs组(P<0.01)。ESCs-C组LC3和VMP1蛋白相对表达水平与ESCs组无明显差异(P>0.05)。结论:体外实验沉默UCA1基因,能有效降低内异症在位内膜间质细胞(ESCs)增殖并提高细胞凋亡、自噬能力。UCA1基因可能通过改变子宫内膜细胞生物学特性,参与子宫内膜异位症的发生发展,提示UCA1可以作为子宫内膜异位症治疗的一个潜在基因靶点。

关键词： 食管癌   阿帕替尼   凋亡   血管内皮生长因子  

摘要： 目的:探讨甲磺酸阿帕替尼对人食管癌细胞株KYSE-150、ECA-109细胞的增殖、迁移、凋亡、周期的影响及其机制。方法:采用MTT法检测食管癌细胞KYSE-150、ECA-109细胞的增殖活性;Transwell小室法检测食管癌细胞迁移能力;克隆形成法检测食管癌细胞克隆形成率;流式细胞术分析细胞凋亡率和细胞周期。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测食管癌细胞中VEGF mRNA及VEGFR2 mRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测食管癌细胞上清液中的VEGF浓度;Western Blot法检测食管癌细胞中的MEK、ERK、p-MEK、p-ERK表达以及JAK2、STAT3、p-STAT3、CHK2、CDC2的表达。结果:阿帕替尼对食管癌细胞的增殖抑制具有时间(P<0.05)及浓度依赖性(P<0.05);20、40μmol/L的阿帕替尼干预后,KYSE-150细胞迁移数分别为428.67±4.16、286.67±1.53,显著低于对照组874.67±22.75(P<0.05);ECA-109细胞迁移数分别为1123.67±70.00、477.33±26.84,显著低于对照组1749.67±65.77(P<0.05)。20、40μmol/L的阿帕替尼作用后,KYSE-150细胞克隆形成率分别为(58.19±24.73)%、(29.10±22.40)%(P<0.05);ECA-109细胞克隆形成率分别为(61.12±17.21)%、(43.09±11.13)%(P<0.05)。20μmol/L阿帕替尼作用后KYSE-150、ECA-109细胞凋亡率为(15.65±1.54)%、(49.26±1.62)%,均显著高于对照组(3.49±0.74)%、(6.31±1.43)%(P<0.05),G2/M期细胞比例增加(P<0.05)。浓度为20μmol/L的阿帕替尼培养后,KYSE-150细胞的VEGF、VEGFR2 mRNA的相对表达量分别为(42.57±10.43)%、(36.09±10.82)%;ECA-109细胞的相对表达量分别为(75.68±9.37)%、(17.24±9.52)%,各组P值均<0.05;浓度为40μmol/L的阿帕替尼培养后,KYSE-150细胞的VEGF、VEGFR2 mRNA的相对表达量分别为(25.69±1.24)%、(13.99±6.54)%;ECA-109细胞的相对表达量分别为(20.11±3.45)%、(7.77±3.89)%,各组P值均<0.05。浓度为20、40μmol/L的阿帕替尼培养后,KYSE-150细胞中的VEGF的浓度分别为(766.48±114.27)pg/ml、(497.40±102.18)pg/ml,与对照组(967.41±57.75)pg/ml相比差异显著,各组P值均<0.05;ECA-109细胞中的VEGF的浓度分别为(675.21±46.69)pg/ml、(598.95±47.60)pg/ml,与对照组(980.68±92.74)pg/ml相比差异显著,各组P值均<0.05。阿帕替尼作用后KYSE-150细胞的A STAT3/A GAPDH、A p-STAT3/A GAPDH、A CHK2/A GAPDH、A CDC2/A GAPDH灰度值分别为0.62±0.09、0.36±0.13、0.47±0.12、0.48±0.08,与对照组(0.96±0.15、0.85±0.16、0.91±0.20、0.78±0.15)相比均有显著差异,P值均<0.05。结论:阿帕替尼可通过调控JAK2/STAT3通路,下调CHK2、CDC2而改变食管癌KYSE-150、ECA-109细胞周期分布、诱导其凋亡,进而抑制其增殖、迁移、克隆形成。

关键词： 非编码RNA   GAS5   肝细胞癌   细胞周期调控蛋白  

摘要： 目的检测生长特异性调节转录因子5(GAS5)在肝癌组织表达,探究GAS5质粒(pc DNA-GAS5)转染对Hep3B细胞及GAS5小干扰RNA(si RNA-GAS5)转染对Hep G2肝癌细胞的侵袭增值的影响,并进一步分析其可能的调控机理。方法选取手术肝癌切除的癌组织及其癌旁组织20例,q RT-PCR检测肝癌及其癌旁组织长链非编码RNA GAS5(GAS5)表达以及Western blot检测周期依赖性蛋白激酶6(CDK6)表达。利用脂质体转染pc DNA-GAS5和si RNA-GAS5干扰Hep3B和Hep G2细胞株中GAS5表达水平,划痕实验、Transwell和CCK-8检测转染Hep3B和后Hep G2细胞的迁移、侵袭及增殖能力,流式细胞仪检测干扰后Hep G2细胞凋亡周期变化。Western blot、q RT-PCR验证细胞周期调控蛋白周期素D1(Cyclin D1)、CDK6、E2F-1表达。结果肝癌组织中GAS5表达水平低于对应癌旁组织,CDK6表达高于癌旁组织。转染pc DNA-GAS5的Hep3B细胞迁移侵袭增值能力明显减弱;转染si RNA-GAS5的Hep G2细胞迁移侵袭增值能力明显增强;转染si RNA-GAS5的Hep G2细胞Cyclin D1、CDK6、E2F-1蛋白表达下降,干扰后的Hep G2细胞周期发生G1/S期改变。结论GAS5在肝癌组织的表达出现下调;GAS5可明显抑制肝癌细胞迁移、侵袭及增殖能力;GAS5调控肝癌细胞周期变化可能是通过Cyclin D1/CDK6/E2F-1通路。

关键词： 慕课   细胞生物学   教学改革改革策略  

摘要： 慕课是当下备受关注的一种在线学习模式.目前,高校各类专业课程普遍在尝试将慕课引入教学中.本文中,在简述慕课教学模式基础上,对细胞生物学实验教学存在的问题进行分析,最后提出了基于慕课的细胞生物学课程教学改革策略.