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关键词： 肝细胞肝癌   RAD54B   P53  

摘要： 研究背景肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的恶性肿瘤之一。全球范围内,其发病率和死亡率呈逐年上升趋势,但临床治愈率及长期生存率并未得到明显改善。究其原因,肝细胞癌起病隐匿,早期发现困难,80%的病人就诊时已属于疾病晚期,失去手术治愈的机会,而晚期肝癌的治疗虽然有靶向药物的引入,但对总生存时间的延长仍相对有限。因此,筛选出能够早期诊断和判断预后的分子标志物及挖掘肝癌发生和演进的潜在机制是目前解决临床治疗瓶颈的有效策略。近些年研究发现,DNA修复和重组蛋白RAD54B通过细胞周期调控和同源重组参与了肿瘤发生发展过程,RAD54B的表达和/或功能异常可见于多种实体肿瘤,可能成为肿瘤新的遗传学特征。然而,RAD54B在肝癌中表达和作用未见研究报道,本研究通过组织和细胞水平考察RAD54B在肝癌组织和细胞中的表达情况,并分析其对肝癌细胞生物学功能的影响及可能的分子机制。研究目的本研究应用TCGA数据库筛选出在肝癌组织和癌旁组织中差异表达的RAD54B,研究RAD54B在肝癌组织和肝癌细胞中的表达情况;分析RAD54B表达与肝癌临床病理特征和肝癌患者预后之间的关系;考察RAD54B对肝癌细胞生物学特性的影响;探讨RAD54B影响肝癌细胞生物学特性可能的分子机制。研究方法1.分析TCGA公共数据库中肝癌组织和配对癌旁组织中RAD54B基因表达水平。应用qRT-PCR方法在10对新鲜肝癌组织及对应癌旁组织中验证RAD54B基因表达差异,并通过qRT-PCR和Western Blot方法检测肝癌细胞和正常肝细胞中RAD54B基因和蛋白表达。使用IHC方法考察RAD54B在83例肝癌石蜡样本中的表达情况,并分析RAD54B表达状态与肝癌临床病理特征和肝癌患者预后之间的关系。2.构建RAD54B干扰慢病毒质粒,感染肝癌细胞系,通过嘌呤霉素筛选构建稳定干扰RAD54B肝癌细胞系。通过克隆平板形成、Celigo细胞生长计数和MTT实验方法考察干扰RAD54B对肝癌细胞体外增殖的影响。应用流式细胞仪分析检测干扰RAD54B对肝癌细胞凋亡和细胞周期分布的影响。3.利用IPA生物信息分析,筛选出与RAD54B生物学功能可能相互关联的关键分子,用qRT-PCR和Western Blot方法考察RAD54B对关键分子及其相关信号通路的调控关系,运用小干扰RNA技术和生物学实验方法探讨RAD54B是否通过预测的关键分子或通路影响肝癌细胞生物学特性。研究结果***数据库分析结果提示RAD54B在肝癌组织中表达上调,qRT-PCR和Western Blot在肝癌组织和肝癌细胞中证实RAD54B高表达于肝癌组织和肝癌细胞中。分析RAD54B表达状态与肝癌临床病理特征和预后之间关系,结果发现:RAD54B与肝癌临床分期和肿瘤分化程度呈正相关,与肝癌患者临床预后呈负相关。2.下调RAD54B表达可抑制肝癌细胞体外增殖能力,并诱导肝癌细胞凋亡和细胞G1/S期阻滞。3.生物信息学预测发现,P53可能和RAD54B在肝癌细胞中的生物学功能有关。进一步通过qRT-PCR和Western Blot证实敲减肝癌细胞RAD54B可上调P53及其下游信号通路相关分子的表达。在此基础上,瞬时沉默P53表达,RAD54B稳定干扰的肝癌细胞体外增殖能力和细胞周期进程得到部分恢复,细胞凋亡数目减少,表明RAD54B可能通过调控P53及其下游信号通路促进肝癌细胞生长。研究结论RAD54B在肝癌中高表达,与肝癌临床分期、分化程度及预后不良有关。高表达RAD54B促进了肝癌细胞恶性表型,包括促进细胞增殖和细胞周期进程,抑制细胞凋亡,这可能和RAD54B负性调控P53及其下游信号通路有关。

关键词： 胶质瘤   microRNA-17   胶质瘤   miR-17   增殖   侵袭   体内生长   microRNA-17   CCND1   胶质瘤  

摘要： 胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤之一,胶质瘤很少可治愈,高级别患者预后较差,尤其是老年患者。恶性胶质瘤患者1年死亡率为50%,2年死亡率为25%。其中,多形性胶质母细胞瘤的预后较差,平均生存时间在诊断后1年以内。目前,胶质瘤的研究热点是寻找新的有效治疗靶点及有价值的生物诊断标记物,以提高胶质瘤的诊断及治疗效果。微小RNA(microRNAs,miRNA)是一类长度约19-22核苷酸的RNA,通过与靶基因mRNA的3'-UTR非编码区互补匹配来调控基因转录后表达。这种相互作用导致翻译阻遏,多数情况下降低mRNA的表达水平。研究表明,多种miRNA在人肿瘤中表达下调或上调,包括胶质瘤,为肿瘤发生提供了新的分子基础。miR-17在肿瘤发生中起重要作用,然而其在胶质瘤中的作用尚未明确。本研究的主要目的是阐明miR-17在胶质瘤发生发展中的作用,为深入理解胶质瘤发病的潜在分子机制和开发新的有效分子治疗靶点提供实验基础。本研究分为三个部分,主要研究方法和结果如下:第一部分 MicroRNA-17在人脑胶质瘤中的表达研究目的:研究miR-17在脑胶质瘤组织及正常脑组织中的表达情况,及其与肿瘤恶性程度之间的关系。方法:采用RT-PCR法检测脑胶质瘤及正常脑组织中miR-17的表达量。结果:检测脑胶质瘤组织中miR-17的表达量明显高于正常脑组织的表达量;miR-17在高级别胶质瘤中的表达量显著高于其在低级别胶质瘤中的表达量,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-17的表达随着胶质瘤级别的升高而升高,可能是胶质瘤发生发展过程中的潜在致癌基因。第二部分 MicroRNA-17对胶质瘤细胞系生物学特性的影响目的:研究miR-17对胶质瘤细胞增殖、侵袭、凋亡和体内生长的影响。方法:采用RT-PCR法检测miR-17在胶质瘤细胞系和正常星形胶质细胞的表达水平。利用细胞转染、MTT、Transwell、流式细胞术和体内成瘤的方法检测miR-17过表达/沉默对脑胶质瘤细胞的增殖、侵袭、凋亡和体内成瘤能力的影响。结果:miR-17在胶质瘤细胞系中的表达显著高于其在正常星形胶质细胞中的表达量。将miR-17 mimic/inhibitor转染U251后,miR-17表达量分别明显升高或下降。miR-17过表达后,U251细胞的增殖、侵袭和体内生长能力均明显升高,而凋亡细胞则明显减少;而miR-17沉默则明显抑制U251细胞的增殖、侵袭和体内生长能力,促进细胞凋亡。结论:过表达miR-17可促进胶质瘤细胞的增殖、侵袭和体内生长。第三部分 MicroRNA-17通过靶向CCND1调控胶质瘤细胞的增殖和侵袭目的:筛选miR-17在胶质瘤细胞中的靶向调控基因,探索miR-17在胶质瘤中起促癌作用可能的分子机制。方法:利用Western blot、荧光素酶活性分析、MTT、Transwell、流式细胞术等方法,检测miR-17对靶基因CCND1的调控作用,及沉默CCND1表达后胶质瘤细胞的增殖、侵袭能力和凋亡的影响。结果:通过3个生物信息学软件,我们预测CCND1的基因3'UTR区域存在一个潜在的miR-17结合位点。过表达miR-17导致U251细胞中CCND1的蛋白水平增加。促进miR-17增强了携带野生型3'-UTR的荧光素酶活性。CCND1的内源性缺失抑制了miR-17模拟物的促进细胞增殖和侵袭作用。结论:CCND1是miR-17的靶基因,miR-17的上调在胶质瘤的发生发展过程中起着重要的作用。

关键词： 细胞生物学   高尔基体   Rab蛋白   中间膜囊   囊泡运输  

摘要： 高尔基体是细胞内囊泡运输的中心。Rab蛋白则是真核细胞内转运方向及调控的关键蛋白家族，约有15个Rab蛋白质定位在高尔基体，使得顺面/中间/反面膜囊具有独特而复杂的膜区域。当囊泡到达高尔基体附近时，位于高尔基体膜上的Golgin蛋白可以作为囊泡上Rab蛋白的效应器，可能介导了识别、锚定及膜融合过程。有报道称，活性形式的Rab2-GTP与高尔基结构蛋白Golgin45相互作用共同定位于中间膜囊。但是Golgin45相关的研究甚少，中间膜囊如何参与转运也鲜有报道。　　在本研究中，首先提供证据证明了Golgin45特异性结合Rab2GTP，而且Golgin45通过多种相互作用形成一个蛋白复合物，包括:高尔基体堆叠重组蛋白GRASP55，高尔基体蛋白ACBD3和TBCID22(Rab33的GTP酶激活蛋白)。根据这个复合物影响Rab蛋白的潜力，假设该蛋白复合物可能会富集活性形式的Rab2-GTP，同时将Rab33b失活，在中间膜囊上形成一个独特的微区域。　　其创新性在于报道了GTP活性形式的Rab2结合Golgin45的特异性，新发现Golgin45和ACBD3的相互作用，以及这些相互作用的结合位点。这为后续的研究提供了方法。　　总之，本研究引出一个问题，高尔基体中间膜囊是否通过蛋白复合物来支持Rab活性的调节，促进高尔基体膜在不同的时间对应不同Rab蛋白的功能。

关键词： 奶牛   乳腺炎   乳腺上皮细胞   长链非编码RNA H19   脂多糖  

摘要： 奶牛乳腺炎是由于机体代谢和生理状态改变、乳房损伤以及接触传染性或环境性病原微生物等引起的乳腺炎症反应,是奶牛最常见的疾病之一。乳腺上皮细胞作为乳腺组织最重要的功能单位,其在炎性状态下的炎性应答及功能维持,决定了奶牛乳腺炎的发生与发展过程。长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)H19作为最新的发现的非编码RNA,广泛的参与动物机体的生理和病理活动。已有报道发现H19对各种细胞类型的细胞增殖均有影响,并且我们在前期的研究中发现H19在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的乳腺上皮细胞炎性模型中表达量增加。然而,H19在牛乳腺上皮细胞的炎症反应和潜在功能中的作用尚不清楚。在本实验中研究了过表达H19对奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)炎性应答以及功能维持中的作用。结果显示H19的稳定高表达能够显着地促进MAC-T细胞的增殖和β-酪蛋白分泌。此外,稳定过表达H19的MAC-T细胞中紧密连接相关蛋白的表达水平明显增高,并且抑制金黄色葡萄球菌粘附作用。此外,我们进一步证实H19可以增强LPS诱导的NF-κB通路活化,从而促进TNF-α、IL-6、CCL2、CCL5等炎性相关因子的表达。这些结果表明了H19在抑制乳房组织的细菌感染和正常功能恢复中起着重要作用。最后,我们使用荧光素酶基因报告实验来探究H19基因上游4.679-kb序列中LPS的特异性启动序列,结果在所检测序列区域内没有发现有效应的启动子序列,需要进一步的研究来确定LPS调节MAC-T细胞中H19表达的机制。

关键词： 肝癌细胞   FBP1基因   转移   侵袭  

摘要： 目的据有关文献报导,FBP1在肺癌、乳腺癌、肾癌、胃癌几种癌症类型中发现对肿瘤发生和发展起关键作用。结合课题组之前的研究结果,在三株不同转移潜能的肝癌细胞株中所筛选出的差异表达蛋白,与糖酵解/糖异生的相关性排名前列,FBP1作为糖异生反应的限速酶之一,我们猜测其对人肝癌细胞的侵袭迁移有影响。因此,本课题通过慢病毒载体介导siRNA敲低肝癌MHCC97-H细胞中FBP1基因,试图探讨该基因对MHCC97-H肝癌细胞生物学特性的影响,探明FBP1基因是否为影响肝癌细胞生物学效应的靶向基因,从而为抑制肝癌转移侵袭的分子靶点提供新的实验依据。方法1.验证MHCC97-H、HCCLM3、MHCC97-L细胞株间FBP1基因的差异表达;2.慢病毒感染肝癌细胞株MHCC97-H,筛选稳定敲低FBP1i的细胞株并验证;3.对FBP1i细胞株进行体内、外肿瘤生物学行为进行验证。结果***法检测在HCCLM3细胞株中FBP1表达高于MHCC97-H及MHCC97-L细胞株;稳定敲低细胞株FBP1i的FBP1基因的蛋白条带较对照Scrambled细胞明显减少;2.在细胞生长,周期,凋亡,迁移等方面,FBP1i与对照组MHCC97-H及Scrambled细胞株之间无明显的差异(p>0.05);FBP1i的乳酸产生量明显高于对照组(p<0.05),线粒体有氧呼吸较对照组减弱;3.裸鼠肝原位接种实验均未见转移。结论FBP1基因对肝癌MHCC97-H细胞的侵袭、迁移无明显影响。

关键词： 胃癌   eIF4A1   AKT   细胞生物学   裸鼠  

摘要： 目的:探讨沉默eIF4A1基因对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的生物学行为和胃癌裸鼠移植瘤模型的影响及其可能作用机制。方法:在37℃、5%CO2细胞培养箱中,用含有10%胎牛血清的RPMI1640培养基常规培养人胃癌SGC-7901细胞。取对数生长期胃癌SGC-7901细胞每孔3.5×10～5个接种于6孔板。当细胞融合度达到40%-60%时,按转染说明书步骤,分别将eIF4A1基因沉默重组慢病毒颗粒LV-EIF4A1-RNAi（44682-1）、LV-EIF4A1-RNAi（44683-1）、LV-EIF4A1-RNAi（44684-1）和对照慢病毒颗粒CON077分别感染人胃癌SGC-7901细胞,分别标记为沉默组（eIF4A1-RNAi）(2、3、4)和阴性对照组（CON077）,另外设立一组未做任何处理的SGC-7901胃癌细胞作为空白对照组（control）。转染后,用嘌呤霉素筛转染细胞并选出稳定转染株。用实时荧光定量PCR检测各组人胃癌SGC-7901细胞eIF4A1基因的相对表达量,筛选出eIF4A1表达量最低为实验所用的沉默组（eIF4A1-RNAi）,并检测该沉默组（eIF4A1-RNAi）与阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）的AKT基因的相对表达量。用CCK-8法检测初始样本量为4×10～3个的各组人胃癌SGC-7901细胞的增殖能力;用流式细胞仪检测各组人胃癌SGC-7901细胞5×10～6个细胞的凋亡情况和1×10～6个细胞的周期分布;用Transwell实验分别检测各组人胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测各组细胞eIF4A1和AKT的蛋白表达水平。取4周龄裸鼠24只,随机分成3组。取对数生长期的各组人胃癌SGC-7901细胞,调整细胞浓度为1.5×10～6个/ml,分别于每只裸鼠的左上肢腋窝下接种200ul。常规饲养,每天观察并记录裸鼠精神、营养等状态,成瘤后隔三天测量记录瘤体体积。21天后用颈椎脱臼法处死各组裸鼠,取出各组裸鼠的皮下瘤、肝脏、肺脏组织并浸泡于10%福尔马林中,24小时后做成蜡块组织。把各组裸鼠的皮下瘤、肝脏、肺脏蜡块组织切片,HE染色后,观察其组织的病理改变。把取各组裸鼠的皮下瘤蜡块组织切片,用免疫组织化学检测方法,检测各组裸鼠组织切片的eIF4A1蛋白表达。结果:实时荧光定量PCR检测显示LV-EIF4A1-RNAi（44683-1）组eIF4A1基因的相对表达量最低为0.31±0.04,低于空白对照组（control）的表达量的0.5倍,符合实验要求,选择该组为eIF4A1沉默组（eIF4A1-RNAi）;CCK-8实验检测发现沉默组（eIF4A1-RNAi）细胞增殖活力明显低于阴性对照组（CON077）组和空白对照组（control）;流式细胞仪检测发现沉默组（eIF4A1-RNAi）细胞凋亡率明显比阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）高,并且沉默组（eIF4A1-RNAi）与阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）比较,细胞更多处于S期,G1/G2期细胞则相对减少;Transwell实验发现较阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）,沉默组（eIF4A1-RNAi）细胞的迁移、侵袭能力下降;Western blotting检测发现,较阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）,沉默组（eIF4A1-RNAi）的eIF4A1和AKT基因的蛋白表达明显降低;构建裸鼠皮下瘤模型,发现较阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）,沉默组（eIF4A1-RNAi）裸鼠皮下瘤增长速度明显减慢;免疫组化实验显示,较阴性对照组（CON077）和空白对照组（control）,沉默组（eIF4A1-RNAi）eIF4A1和AKT的表达量明显降低。CON077组与control组比较,上述指标差异均无统计学意义（P>0.05）。结论:沉默eIF4A1基因能提高人胃癌SGC-7901细胞凋亡率,抑制增殖、迁移和侵袭能力、使细胞周期阻滞于S期,沉默eIF4A1基因能够抑制人胃癌裸鼠皮下瘤模型肿瘤的生长速度,其机制可能与eIF4A1抑制AKT的表达量相关。

关键词： 乙型肝炎病毒   HBX蛋白   生物学活性   影响  

摘要： 乙型肝炎病毒HBV是威胁中国人民健康最主要的疾病之一,约60-70%的人群都携带有HBV感染。HBV可致急、慢性乙型肝炎,造成肝纤维化、肝硬化,最终发展成为肝细胞癌。HBV病毒的x基因是其基因组中最小却最重要的开放读码框。其编码合成的HBX蛋白不会分泌到细胞外,而是留在细胞中发挥着反式激活的功能,调节细胞信号通路,进而对细胞的形态学和生物学状态产生不良影响,最终导致肝脏的一系列病理性改变。对此,本篇综述旨在从最基本的细胞层面,对HBX致感染细胞生物学活性改变的相关研究内容作一个全面的综述,以期为后续的肝脏疾病进展机制研究奠定一个根本的全面的理论基础。

关键词： 大学教材   高中生物课程资源   开发与利用  

摘要： 《普通高中生物课程标准(2003年版)》认为,教师在教学的过程中,充分利用教学环境中现有或潜在的课程资源,并积极有效的开发新的课程资源,是优化教学、提高教学效果的方法,是推进我国新课程改革的重要手段。目前,我国学者对高中生物课程资源开发与利用的研究较少,多数学者的研究内容集中在理论层面,有关开发与利用高中生物课程资源的实践研究更是屈指可数。笔者通过梳理文献,分析我国高中生物课程资源开发与利用的现状。从高中生物教学的实际需求出发,确定开发利用的高中生物课程资源是大学教材《细胞生物学》。随后,笔者将人教版高中生物必修一《分子与细胞》中有关“细胞”的知识与图片,和《细胞生物学》中的内容进行整合。结合教学实际情况,分析整合内容是否有助于学生理解高中教材内容、是否有助于优化高中教学效果、是否有助于学生能力的培养。然后,通过问卷调查法和教师访谈法,了解高中生物教师开发利用大学教材的意识和态度,考察高中生物教师开发利用大学教材的过程中遇到的问题和面临的困难。最后,笔者从高中生物教师开发利用大学教材意识的培养、开发利用大学教材的基本原则和建立可利用的课程资源库三个方面提出策略,希望能够给开发大学教材的高中生物教师提供一些参考帮助。

关键词： 鸡骨髓   间充质干细胞   生物学特征   肌肉损伤   保护作用  

摘要： 研究背景：　　虽然治疗肌肉损伤的治疗已经取得了实质性的进展，但仍然是一个极具破坏性的疾病，在全球范围内肌肉损伤发生率居高不下，而且不同于其他疾病，骨骼肌是人体中最丰富的组织。骨骼肌损伤是最常见的运动相关损伤，在初级保健和运动医学中面临挑战，因此迫切需要新的有效治疗肌肉损伤的新方法。间充质干细胞(MSCs) 因为具有很独特的特点，比如来源丰富、制备简单、多能性，低免疫源性和低致瘤性等特点使其成为组织工程研究和其他的一些疾病治疗重要的靶点细胞，令人兴奋的是MSCs 在治疗肌肉损伤已经取得了初步的成果。　　近来对间充质干细胞的研究主要集中于人类、小鼠和其他哺乳动物。目前在小鼠，人身上分离提取出了骨髓间充质干细胞已经获得了成功。但与此同时鸡胚胎在发育生物学研究中被广泛应用，在MSCs领域却极少受到关注。而鸡胚胎它们比上面提到的胎生哺乳动物的来源更经济、更广泛，这对于促进干细胞研究的普及至关重要。　　研究目的：　　在鸡胚骨髓内分离提取去一种骨髓来源的间充质干细胞（BMSCs）并进行生物学特征鉴定，在小鼠体内通过注射BMSCs，看BMSCs移植是否对LPS诱导的肌肉损伤是否有治疗效果并进一步探索BMSCs在肌肉损伤发生时对炎症反应的调节作用和对氧化应激损伤的保护作用。　　研究方法与结果：　　组织学形态观察表明不同代次的鸡骨髓间充质干细胞均呈现为呈长梭状的形态学特点。细胞增值能力用采用生长曲线和单克隆能力形成的方法检测。骨髓间充质干细胞生长曲线呈现“S”形，随着细胞代次的提高，间充质干细胞的细胞倍增时间明显延长。骨髓间充质干细胞有很强的克隆形成能力，但随着代次的增加，克隆形成能力逐步减少。核型分析表明鸡骨髓间充质干细胞的染色体为正常二倍体。2倍体率96%以上，证明骨髓间充质干细胞符合鸡物种特有的特征并具有基因的稳定性。骨髓间充质干细胞的表面标志物的免疫组化和流式细胞仪检测表明。骨髓间充质干细胞阳性表达CD29，CD73，CD90，CD105与OCT-4，阴性表达CD34与CD45。多向分化潜能的验证实验表明鸡骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能，具有向成骨细胞，成脂肪细胞，成软骨细胞和成神经细胞诱导分化潜能。　　动物实验表明LPS处理后，大量老鼠出现死亡，48h生存率为30%，MSCs处理显著减少了了老鼠的死亡率，48h死亡率为70%。骨髓HE染色切片观察。相比于同时间段的损伤组，治疗组损伤明显减轻。分别检测了IL-6，IL-8，TNF-α， IL-1β几种炎症因子在6h，12h，24h的变化，检测脂多糖是否能引起小鼠的上述因子的升高，以及MSCs处理后炎症因子是有显著的下降趋势。LPS处理后，抗氧化指标SOD显著下降，MSCs处理后又显著升高，证明LPS处理后小鼠骨髓发生了氧化应激损伤，MSC处理对LPS引起的氧化应激损伤有保护作用。LPS处理后，氧化应激指标MDA显著下降，MSCs处理后又显著降低，证明LPS对小鼠骨髓造成了氧化应激损伤，BMSCs干预后减轻了氧化应激损伤。　　实验结论：　　（1）不同代次的BMSCs均呈现为呈长梭状的形态学特点，可传至23代次。　　（2）BMSCs具有很强的增值能力。　　（4）鸡BMSCs的染色体2倍体率96%以上，证明BMSCs有基因的稳定性。　　（5）免疫组化结果结果和流式细胞仪均显示显示鸡BMSCs均阳性表达间充质干细胞相关基因CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、OCT4、SOX2,不表达CD34和CD45，符合间充质干细胞的特征。　　（6）BMSCs具有多向分化潜能。可分化为成骨，成脂，成软骨和成神经细胞。　　（7）LPS处理后小鼠48h生存率仅为30%，BMSCs注射显著提高了小鼠生存率，达到了70%，因此MSCs具有显著提升老鼠生存率的作用。　　（8）组织学观察表明，BMSCs处理减轻了LPS引起损伤老鼠的形态学损伤程度，炎症细胞浸润减少，肌肉组织的正常结构得到了恢复。　　（9）BMSCs对肌肉损伤发生时起到了强大的免疫调节作用，抑制了LPS引起的炎症因子IL-6，IL-8，TNF-α，IL-1β的显著升高，因此BMSCs在肌肉损伤中起到了强大的免疫调节作用和抑抗炎的作用。　　（10）BMSC处理对LPS引起的氧化应激损伤有保护作用，维持了氧化与抗氧化之间的平衡，通过降低氧化应激损伤来保护肌肉组织的作用。

关键词： 急性髓系白血病   细胞生物学   谷氨酰胺代谢通路   金属硫蛋白   二甲双胍  

摘要： 目的：探讨干扰谷氨酰胺代谢通路对急性髓系白血病（AML）细胞株SKM-1细胞的生物学特性的影响，并分析其可能的作用机制。　　方法：将AML细胞系SKM-1细胞作为研究对象，分别用不含谷氨酰胺的培养基进行“饥饿”培养处理，或用谷氨酰胺酶1（GLS1）抑制剂BPTES干扰SKM-1细胞代谢通路，进而联合阿糖胞苷共同处理SKM-1细胞。借助于CCK8试剂检测细胞增殖、PI-AnnexinV标记细胞后应用流式细胞术检测细胞凋亡。谷氨酰胺饥饿处理SKM-1细胞后用基因芯片检测处理前后相关基因变化情况，并用实时荧光定量PCR验证基因芯片结果。选择基因芯片存在明显差异表达的金属蛋白酶(MT)家族中的MT2A为研究对象，下调其表达，观察SKM-1细胞的增殖、凋亡情况。用不同浓度的二甲双胍作用于SKM-1细胞，干扰代谢通路，CCK8试剂检测细胞增殖，确定二甲双胍作用于SKM-1细胞的最适浓度和时间。二甲双胍进一步联合阿糖胞苷或者联合“谷氨酰胺饥饿”处理方法作用于SKM-1细胞，检测细胞增殖、凋亡情况以判断二者的协同作用。用流式细胞术检测相关处理后细胞内活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)变化情况。Western Blot检测相关处理后凋亡通路Caspase3、聚ADP核糖聚合酶(Poly ADP-ribose polymerase，PARP)的蛋白表达水平。　　结果：谷氨酰胺饥饿培养以及谷氨酰胺酶抑制剂BPTES能够抑制SKM-1细胞增殖，促进细胞凋亡，联合阿糖胞苷后SKM-1凋亡率更高。谷氨酰胺饥饿后部分金属硫蛋白(metallothionein，MT)家族基因表达上调。下调MT家族之一的MT2A基因后，SKM-1细胞的增殖不受影响，但凋亡率增加。二甲双胍促进SKM-1细胞凋亡，二甲双胍联合阿糖胞苷作用于SKM-1细胞比单独处理组的凋亡率更高。谷氨酰胺饥饿联合二甲双胍促进细胞凋亡，增加细胞ROS的表达。凋亡通路Caspase3，PARP的表达水平均增加，且联合处理组增加更显著。　　结论：1、谷氨酰胺代谢通路参与了AML生物学活性的调控，干预代谢通路可增强白血病细胞对化疗药物的敏感性。2、谷氨酰胺饥饿与二甲双胍联合具有协同抗白血病作用，其机制与影响细胞内氧化呼吸作用增加ROS的产生有关。3、金属硫蛋白可能参与调控白血病细胞的谷氨酰胺代谢通路。