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关键词： 骨形态发生蛋白-4   诱导性多能干细胞   牙向分化   增殖  

摘要： 目的构建过表达骨形态发生蛋白-4(BMP4)基因的慢病毒载体,探讨其过表达后对小鼠诱导性多能干细胞(i PS)生物学活性的影响。方法采用慢病毒转染建立稳定过表达BMP4的i PS细胞株(BMP4过表达组),未作任何转染的细胞为空白组,转染慢病毒阴性对照组的细胞为空载体组。CCK8检测各组细胞增殖活性,碱性磷酸酶(ALP)活性检测细胞分化程度,荧光定量聚合酶链反应检测BMP4、成釉细胞蛋白(AMBN)、细胞角蛋白(CK)14、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨唾液酸蛋白(BSP)及骨细胞特异转录因子Runx2的mRNA表达。结果与空白组及空载体组相比,BMP4过表达组的细胞增殖活性及ALP活性升高(P<0.05),Runx2、AMBN、CK14、DSPP、BSPmRNA的表达增加(P<0.05)。结论 BMP4基因能够促进i PS的牙向分化。

关键词： 细胞生物学   基因组学   分子异质性   前列腺癌  

摘要： 前列腺癌在病理学、临床生物学及分子谱水平上表现出高度异质性。一些男性患有惰性前列腺癌,可以安全观察,而其他患者却罹患具有致命侵袭性的前列腺癌。在过去十年中,研究人员已开始揭示导致这些不同临床表型的基因组异质性,发现了不同的分子亚型,具有将前列腺癌从不了解且高度可变的异质性疾病转变为分子亚型集合的潜能。并且这些亚型的独特性已被用于预测临床结果,设计用于前列腺癌诊断的新型生物标志物,并开发新的治疗剂。本文就部分前列腺癌的分子亚型进行阐述,为将来研究前列腺癌的治疗方法提供线索。

关键词： 细胞生物学   本科教学   教学方法  

摘要： 细胞生物学是生物类专业的一门基础课程。该文针对如何提高细胞生物学教学效果这一问题,本文总结了教学过程中的几点尝试,包括通过优化细胞生物学理论课教学内容,新的教学方法探索,从而增强授课的生动性与趣味性,提高教与学的效果。

关键词： STC2基因   乳腺癌   增殖   凋亡   Notch1信号通路  

摘要： 目的:探讨斯钙素-2(STC2)基因在乳腺癌中的表达及抑制其表达对癌细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:RT-PCR及Western blot分别检测乳腺癌组织中STC2基因的mRNA及蛋白表达,并分析其与病理特征的关系;将STC2-siRNA转染人乳腺癌MCF-7细胞,另设空白对照组(Control)和阴性对照组(NC-siRNA),转染48 h后,Western blot检测各组细胞中STC2、ki67、细胞周期素(cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、Notch1、Hes1蛋白表达;CCK8检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:STC2基因在乳腺癌中的mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P<0.05);STC2基因表达与乳腺癌患者年龄、组织学分级及是否发生转移无关(P>0.05),与病理分期、肿瘤大小相关(P<0.05);NC-siRNA组STC2的蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P>0.05),STC2-siRNA组STC2的蛋白表达显著低于Control组(P<0.05);STC2-siRNA组细胞存活率、S期和G2/M细胞及ki67、cyclin D1、Notch1、Hes1蛋白表达显著低于Control组,细胞凋亡率、G0/G1期细胞及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于Control组(P<0.05)。结论:STC2基因在乳腺癌中高表达,其表达与病理分期和肿瘤大小相关,抑制其表达可降低癌细胞的增殖,阻滞细胞于G1期,并诱导细胞凋亡,其机制与下调ki67、cyclin D1和上调Cleaved caspase3表达及下调Notch1信号通路有关。

关键词： OCT4A基因   K562细胞   白血病   细胞凋亡  

摘要： 目的:探讨OCT4A基因体外对K562细胞生物学行为的影响及与凋亡相关的分子机制。方法:克隆人OCT4A基因,构建靶向上调及下调OCT4A基因与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组慢病毒表达载体p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA,三质粒包装系统包装病毒,并测定滴度。实验分为空白对照、p LVX空质粒、p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA和非特异sh RNA共5组。Western-blot检测各组OCT4A蛋白表达。CCK-8法绘制各组细胞增殖曲线。采用Annexin V/7-AAD标记流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞分化抗原CD11b和CD15表达;实时定量PCR检测caspase3、BIM、BCL-x L和BAX m RNA表达变化。结果:成功克隆人OCT4A基因,并成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA。Western blot证实2种病毒感染后可分别有效上调及下调OCT4A蛋白的表达。CCK-8法检测显示,p LVX-OCT4A-Zs Green1组K562细胞体外增殖活性明显升高,而p LVX-OCT4A sh RNA组K562细胞增殖活性显著降低(P<0.05)。感染后p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA 2组K562细胞凋亡率分别为(3.48±0.52)%和(7.25±0.57)%(P<0.05),而OCT4A过表达及抑制后细胞表面分化抗原CD15、CD11b的表达无明显变化。OCT4A上调后Caspase-3、BIM、BAX较对照组均下调,但差异无统计学意义(P>0.05),而BCL-x L基因表达则明显升高(P<0.01)。结论:成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1及PLB-OCT4A sh RNA,它们可分别有效地上调及下调OCT4A蛋白表达。OCT4A基因可促进K562细胞的增殖、抑制凋亡,其抑制凋亡机制可能与BCL-x L基因上调有关。

关键词： 细胞生物学实验   开放式教学   能力培养  

摘要： 细胞生物学是现代生命科学的基础和前沿性学科,在生命科学教育中占有核心地位。人才综合素质靠加强综合训练来培养,而创新实践能力则主要靠加强实验教学和实践训练。在本研究中,笔者尝试对本校本科生细胞生物学实验课程教学方法进行革新,打破以往单一的实验教学模式,采用开放式实验教学模式,在全面优化实验教学内容的基础上,进一步完善了适应于开放式教学的实验室条件,建立了新的实验考核制度。通过近三年的实践,学生的学习热情显著提高,创新意识和实践能力均显著增强,同时也提升了学生就业、考研等方面的综合竞争能力。本研究成效明显,可为深入探索行之有效的生命科学实践教学模式提供参考。

关键词： 微弧氧化表面改性   粗糙度   细胞骨架   生物材料   3D打印钛合金支架   增殖和成骨分化   合金   生物学   干细胞   组织工程  

摘要： 背景:微弧氧化处理可提高钛合金植入体的生物学性能。目前研究多集中于钛合金片材,有关微弧氧化改性处理后3D多孔钛合金支架对细胞生长及分化的影响鲜有报道。目的:研究微弧氧化表面改性对3D打印多孔钛合金支架表面细胞生物学性能的影响。方法:将大鼠骨髓间充质干细胞分别接种于微弧氧化处理Ti6Al4V合金三维支架(实验组)与未经微弧氧化处理Ti6Al4V合金三维支架(对照组)上,培养4,7 d,进行扫描电镜观察、细胞骨架染色分析及细胞活力分析;培养4,7,11 d,检测细胞上清液中碱性磷酸酶和骨钙素水平;培养1,4,7,11 d,MTT法检测细胞增殖。结果与结论:(1)培养4,7 d时,live/dead染色显示骨髓间充质干细胞在两组材料上生长良好;细胞骨架染色分析显示,实验组细胞骨架呈立体多角形,对照组支架表面的细胞以扁平梭形状沿支架宏观结构铺展;扫描电镜显示,实验组细胞排列较为紧密,细胞伸展状态良好,细胞间的板状伪足与丝状伪足交叉连接,以锚状结构牢固地黏附于材料表面;对照组细胞伪足间的连接较少,细胞外基质较少,平铺在材料表面生长;(2)随着培养时间的延长,两组细胞上清液中碱性磷酸酶与骨钙素水平逐渐升高;实验组培养7,11 d的碱性磷酸酶水平高于对照组(P<0.05),培养11 d的骨钙素水平高于对照组(P<0.05);(3)MTT检测显示,随着培养时间的延长,两组细胞数量逐渐增加;实验组培养7,11 d的细胞数量明显多于对照组(P<0.05);(4)结果表明,微弧氧化处理后的钛合金支架更有利于细胞的黏附、增殖与分化。

关键词： 胃腺癌   UCP2   预后   增殖   侵袭  

摘要： 目的分析UCP2(uncoupling protein-2)在胃腺癌组织中的表达,探讨UCP2表达与胃腺癌临床病理特征及患者预后的关系,研究UCP2对胃癌细胞生物学功能的影响。方法免疫组织化学法检测142例胃腺癌及25例癌旁正常胃黏膜组织中UCP2的表达情况,Pearsonχ2检验分析其与临床病理特征的关系,Kaplan-Meier法及Cox风险回归模型分析UCP2的表达与胃腺癌患者预后生存的关系。将UCP2 si RNA转染SGC7901胃腺癌细胞系后,Western blot法检测UCP2蛋白的表达,Ed U实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移能力。结果在胃腺癌组织中UCP2蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常胃黏膜组织(P=0.006),UCP2蛋白的表达与肿瘤浸润深度(P=0.024)、TNM分期(P=0.002)、淋巴结转移(P=0.001)显著相关;UCP2阳性患者5年生存率明显低于阴性患者(P=0.001)。在胃腺癌SGC7901细胞系中,UCP2高表达,沉默UCP2的表达能显著抑制肿瘤细胞的增殖,同时降低其迁移能力。结论 UCP2阳性表达是胃腺癌患者预后不良的重要因素,UCP2能显著促进胃腺癌细胞的增殖和迁移。

关键词： 谷氨酰胺酶1   人胃肠道神经内分泌肿瘤   哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路   增殖   侵袭  

摘要： 目的观察干扰谷氨酰胺酶1（GLS1）表达对人胃肠道神经内分泌肿瘤细胞生物学特性的影响。 方法Western blot检测GLS1在人胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达；将正常对照（NS）-小干扰RNA（siRNA）、GLS1-siRNA1、GLS1-siRNA2、GLS1-siRNA3转染人胃肠道神经内分泌肿瘤细胞株BON-1，未转染任何siRNA的作为对照组，Western blot检测转染后各组细胞中GLS1蛋白表达；细胞计数试剂盒（CCK-8）检测转染12、24、48 h后细胞增殖；细胞转染24 h后，Transwell小室检测细胞侵袭数；Western blot检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化mTOR（p-mTOR）、人核糖体蛋白S6激酶（rps6k）、磷酸化rps6k（p-rps6k）蛋白表达；细胞中加入10 nmol/L mTOR信号通路抑制剂雷帕霉素，检测其对细胞增殖侵袭的影响。 结果GLS1在人胃肠道神经内分泌肿瘤组织中的表达显著高于瘤旁组织（P＝0.000）；GLS1-siRNA1、GLS1-siRNA2、GLS1-siRNA3组细胞中GLS1蛋白表达水平均显著低于对照组，选择GLS1-siRNA2作为后续研究；GLS1-siRNA组在12、24、48 h的细胞存活率为（85.31±4.42）%、（76.12±2.93）%、（69.22±3.62）%，均显著低于对照组[（97.02±2.21）%、（96.61±1.52）%、（97.11±2.32）%；t12 h＝4.104，P12 h＝0.015；t24 h＝10.752，P24 h＝0.000；t48 h＝11.235，P48 h＝0.000]；GLS1-siRNA组细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、p-mTOR、p-rps6k蛋白表达水平均显著低于对照组；加入抑制剂后的细胞增殖及侵袭结果与干扰GLS1表达的结果趋势一致。 结论GLS1在人胃肠道神经内分泌肿瘤中呈高表达，抑制GLS1的表达能显著抑制BON-1细胞增殖和侵袭，其机制与mTOR信号通路的调控有关。

关键词： 增生性瘢痕   表皮干细胞   生物学特性   整形外科   缺损   修复  

摘要： 目的:探讨成熟期增生性瘢痕与正常皮肤来源表皮干细胞的生物学特性。方法:选择本院成熟期增生性瘢痕患者病理组织,正常皮肤为本院行游离皮片移植术患者的全厚皮片,分别进行分离培养,获取种子细胞,利用免疫细胞化学技术检测角蛋白19、整合素β_1在两组中的表达情况,应用CCK-8检测两组表皮干细胞生长曲线,酶标仪检测两组表皮干细胞450～630nm的吸光度值。结果:角蛋白19及整合素β1在两组中均呈阳性表达,差异无统计学意义(P>0.05);且两组表皮干细胞具有相似的生长曲线,其不同时间的450～630nm吸光度值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:成熟期增生性瘢痕组织中也存在表皮干细胞,且与正常皮肤来源表皮干细胞具有相近的生物学特性,为整形外科中成熟期增生性瘢痕组织表皮的再利用提供理论基础。