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关键词： 血小板裂解液   牙髓   干细胞   分化   增龄性变化  

摘要： 背景:牙源干细胞在再生医学与组织工程等领域的研究不断深入,为牙相关组织修复及全身疾病治疗带来了希望。但目前对不同年龄区间牙源干细胞生物学特性上的差异缺少系统的分析。目的:探讨脐血源血小板裂解液培养人乳牙、恒牙牙髓干细胞的生物学特性,为人血小板裂解液代替胎牛血清提供可靠依据。方法:取出乳牙、少年恒牙及成年恒牙牙髓组织,在含体积分数为10%胎牛血清或5%,10%,15%人血小板裂解液的DMEM/F-12培养基中培养,采用细胞计数法检测4组细胞增殖情况,选取最佳人血小板裂解液浓度进行后续实验。在最佳人血小板裂解液浓度条件下,体外培养乳牙、少年恒牙及成年恒牙牙髓干细胞,显微镜下观察细胞生长状态,流式细胞术检测细胞表面特异性抗原,细胞计数法和CCK-8法检测细胞增殖能力,三系分化实验观察细胞体外分化能力。结果与结论:①10%人血小板裂解液组的细胞增殖速率最高;②各组牙髓组织块周围均有梭形成纤维状细胞生长并扩增,乳牙与少年恒牙细胞形态无明显差异;与同代次乳牙和少年恒牙细胞相比,成年恒牙细胞体积偏大;③流式细胞术检测结果显示乳牙、少年恒牙及成年恒牙牙髓干细胞均符合间充质来源干细胞的表型特征;④成年恒牙牙髓干细胞增殖能力明显低于乳牙及少年恒牙牙髓干细胞(P<0.01);⑤成年恒牙牙髓干细胞中成骨相关基因碱性磷酸酶、骨形态发生蛋白2 mRNA表达,成脂相关基因脂蛋白脂肪酶、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2 mRNA表达,成软骨相关基因Ⅱ型胶原α1、软骨寡聚基质蛋白mRNA表达均显著低于乳牙及少年恒牙牙髓干细胞(P<0.01);⑥结果表明,人乳牙与少年恒牙牙髓干细胞相较于成年恒牙牙髓干细胞具有更强的增殖能力与多向分化潜能,更适用于临床研究和疾病治疗。

关键词： 长链非编码RNA   肝癌高表达基因   微小RNA-597   Ras相关蛋白23   肝癌   生物学特性  

摘要： 该文旨在探讨长链非编码RNA(LncRNA)-肝癌高表达基因(HULC)靶向微小RNA-597(mi R-597)/Ras相关蛋白23(Rab23)分子轴影响肝细胞癌(HCC)细胞生物学特性的机制。以湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院就诊的罹患HCC的76例患者为研究对象,qRT-PCR检测HCC患者组织中Lnc RNA-HULC、mi R-597及Rab23表达水平;并分析上述基因的表达水平与HCC的临床相关性;生物信息学方法和双荧光素酶报告实验分析Lnc RNA-HULC、mi R-597、Rab23信号轴的相互作用机制。以HCC细胞Hep G2为研究对象,将其分为si-NC组、si-HULC组、si-HULC+anti-NC组、siHULC+anti-mi R-597组,分别采用CCK8、Transwell实验、流式细胞仪检测各组Hep G2细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡情况;采用Western blot检测Hep G2细胞中Ki67、Caspase-3、Caspase-9、Rab23蛋白的表达情况。结果发现,HCC组织中Lnc RNA-HULC、Rab23的表达水平高于癌旁组织,miR-597的表达水平低于癌旁组织(P<0.05),且其表达情况与患者的TNM分期、分化程度等临床病理特征相关(P<0.05)。Lnc RNA-HULC靶向负调控mi R-597,miR-597靶向负调控Rab23。si-HULC组Lnc RNAHULC、Rab23 mRNA、增殖率、迁移数、侵袭数、Ki67蛋白、Rab23蛋白的表达水平低于si-NC组,mi R-597、凋亡率、Caspase-3蛋白、Caspase-9蛋白的表达水平高于si-NC组(P<0.05);与si-HULC组、si-HULC+anti-NC组比较,si-HULC+anti-miR-597组中mi R-597、凋亡率、Caspase-3蛋白、Caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.05),Rab23 mRNA、增殖率、迁移数、侵袭数、Ki67蛋白、Rab23蛋白表达水平升高(P<0.05)。沉默Lnc RNA-HULC可能抑制肝癌细胞生物学特性,其机制可能是通过靶向mi R-597/Rab23分子轴实现的。

关键词： 人工智能   细胞生物学   教学方法   基于技术的教学  

摘要： 随着科技的不断发展,第三次工业革命方兴未艾,世界正处于由互联网时代迈向人工智能时代的关键节点上.目前,人工智能已经逐渐渗透到各个科技领域.特别是在细胞生物学领域,人工智能的应用已经显示出巨大的潜力,在疾病诊疗、药物开发和合成等方面发挥了重要作用.文章旨在探讨在如今的人工智能时代,如何将人工智能在细胞生物学上的应用转化到细胞生物学本科课堂中,促进教学创新、智能辅导和跨学科学习,培养适应时代和国家重大需求的一流的细胞生物学人才.

关键词： BOPPPS教学模式   细胞生物学实验教学   细胞骨架  

摘要： 细胞生物学是培养实践创新能力重要环节之一,而实验教学更是起着重要的作用.细胞生物学实验在中医药院校多个专业中开设,但学生因积极主动性差,学时安排紧张,学生创新实践能力得不到充分提高.因此,探索一种有效可行的细胞生物学实验教学模式十分必要.文章就中医药院校细胞生物学实验课程的现阶段存在的问题进行阐述,并引入BOPPPS教学模式,以经典实验"细胞骨架"为例,探索该模式在细胞生物学实验教学中的具体应用模式,激发学生的主观能动性,提高学生学习热情,促进创新思维能力和创新实践能力的提高,为中医药院校细胞生物学实验课程教学提供一定的参考.

关键词： 胆囊癌   微小RNA(miR)-26a   成纤维细胞生长因子受体4   SGC-996细胞   Wnt/β-catenin通路  

摘要： 目的探讨微小RNA(miR)-26a靶向调控成纤维细胞生长因子受体(FGFR)4对胆囊癌细胞生物学活性的影响及相关机制。方法培养人胆囊癌细胞系(SGC-996细胞)、人肝内胆管上皮细胞(HIBEpic细胞),反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两种细胞miR-26a及FGFR4 mRNA表达水平,Western印迹检测两种细胞FGFR4蛋白表达水平;使用Targetscan7.2软件预测FGFR4的目标mRNA,并通过双荧光素酶检测二者的结合情况。将SGC-996细胞分为空白对照组(常规培养基培养)、miR-26a过表达组(转染miR-26a mimic)、miR-26a抑制剂组(转染miR-26a inhibitor),检测细胞增殖能力、迁移能力及侵袭细胞数;Western印迹检测Wnt/β-连环蛋白(catenin)通路相关蛋白表达。结果胆囊癌细胞中miR-26a表达水平明显低于正常胆囊细胞(P<0.05);FGFR4 mRNA和蛋白表达水平明显高于正常胆囊细胞(P<0.05)。Targetscan7.2软件预测和双荧光素酶报告基因试验可知miR-26a与FGFR4启动子区存在结合位点,且miR-26a表达能够影响FGFR4活性。miR-26a过表达组胆囊癌细胞miR-26a表达水平明显高于空白对照组,miR-26a抑制剂组明显低于空白对照组(P<0.01),miR-26a过表达组FGFR4 mRNA和蛋白表达水平明显低于空白对照组,miR-26a抑制剂组明显高于空白对照组(P<0.01);miR-26a抑制剂组胆囊癌细胞增殖率、细胞迁移率、侵袭细胞数明显低于空白对照组(P<0.01)。miR-26a过表达组胆囊癌细胞信号通路Wnt5a抗体(Wnt5a)、β-catenin、细胞周期素(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)2蛋白表达水平明显低于空白对照组(P<0.01);miR-26a抑制剂组均明显高于空白对照组(P<0.01)。结论miR-26a靶向调控FGFR4可能通过抑制Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达在胆囊癌中发挥抑癌作用。

关键词： 骨质疏松   RAW264.7细胞   破骨细胞   卵巢切除术   细胞实验   骨吸收   微观力学性能   聚集体  

摘要： 目的骨质疏松症严重威胁着人们的生命健康,亟需清晰认识其病理机制。在破骨细胞主导的骨质过度流失中,骨微观结构的影响不可忽视,尤其是矿化胶原纤维,然而,骨质疏松骨纳米结构与破骨细胞间相互作用规律的研究仍较少。方法通过卵巢切除术构建骨质疏松骨大鼠模型,8周后取出股骨做宏观力学性能评价,原子力显微镜(AFM)表征抛光骨片试样的微观结构、力学性质。RAW264.7细胞共培养于不同生理状态的股骨片表面,含50 ng/m L RANKL的基本培养基诱导;第9天,取出骨片试样,AFM观察破骨细胞的行为及骨吸收情况、骨吸收陷窝表面。结果宏观力学测试结果表明骨质疏松大鼠股骨的力学性能发生退变,AFM结果显示,相较于健康骨,骨质疏松骨在纳米尺度的矿物聚集体颗粒尺寸较小,弹性模量较大,表明微观结构趋向于脆性发展。细胞实验显示,在骨质疏松骨中,破骨细胞与骨吸收陷窝数量、面积均较大,骨吸收陷窝区域的胶原暴露更明显,弹性模量较小,表明破骨细胞在骨质疏松骨中的骨吸收程度更强。结论骨质疏松骨微观结构及力学性能的退变会增强破骨细胞的骨吸收功能。本研究为深入揭示骨质疏松症的恶性循环发展机理提供了新的思路,未来工作将从动态力学刺激的角度探究骨质疏松症发生发展机制。

关键词： 长链非编码RNA   SFTA1P   肺鳞癌   细胞增殖   细胞迁移   细胞侵袭  

摘要： 目的探究长链非编码RNA表面活性剂相关1假基因(surfactant associated 1 pseudogene,SFTA1P)在肺鳞状细胞癌(简称肺鳞癌)中的表达水平及其对肺鳞癌细胞生物学功能的影响。方法提取癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库数据,分析SFTA1P在肺鳞癌组织及正常肺组织中的表达差异;qRT-PCR检测SFTA1P在人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)和肺鳞癌细胞系(H520和SK-MES-1)中的表达;通过转染SFTA1P过表达质粒及SFTA1P小干扰RNA分别构建SFTA1P过表达及干扰细胞模型;通过CCK-8及Transwell实验检测SFTA1P对肺鳞癌细胞生物学功能的影响;通过差异分析、相关性分析和功能富集分析探讨SFTA1P影响肺鳞癌细胞生物学功能的潜在机制。结果TCGA数据库肺鳞癌样本分析结果显示,SFTA1P在肺鳞癌组织中表达较正常肺组织低(P<0.05);SFTA1P在肺鳞癌细胞中表达也较人正常肺上皮细胞低(P<0.05);在肺鳞癌细胞系中,相比于H520细胞株,SFTA1P在SK-MES-1细胞株中相对低表达(P<0.05);细胞功能实验结果发现,过表达SFTA1P可抑制肺鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.05),敲低SFTA1P可增强肺鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.05);差异分析、相关性分析和功能富集分析结果表明,SFTA1P在肺鳞癌中可能抑制MYC、G2m检查点和E2f等信号通路。结论SFTA1P在肺鳞癌中具有抑癌功能,其可能通过抑制MYC、G2m检查点和E2f等信号通路影响肺鳞癌细胞的生物学功能。

关键词： 视网膜母细胞瘤   长链非编码RNA   核富集转录体1   细胞增殖   细胞生物学特性  

摘要： 目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)核富集转录体1(nuclera-enriched autosomaltranscript,NEAT1)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)患儿血清中表达,以及下调Rb细胞Y79中NEAT1对细胞生物学功能的影响。方法以2015年3月~2021年3月鄂东医疗集团黄石市中心医院诊疗的83例Rb患儿为研究对象,同期,在儿童保健中心选取健康儿童50例(对照组),实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测血清中NEAT1表达,分析Rb患儿和对照组血清NEAT1表达差异,以及不同临床指标Rb患者血清中NEAT1表达差异。培养Y79细胞并分为si-NEAT1组(转染NEAT1的干扰序列)、si-NC组(转染对照序列)和Ctl组(仅加入转染试剂),分别使用qRT-PCR,MTT,流式细胞术和Transwell检测NEAT1表达、细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况。结果Rb患儿血清中NEAT1表达量(1.43±0.28)高于对照组(1.01±0.21),差异具有统计学意义(t=9.116,P<0.001);国际视网膜母细胞瘤分期(Intraocular International Retinoblastoma classificaton,IIRC)CDE期、低分化、视神经浸润和淋巴结转移的Rb患儿血清中NEAT1表达量明显高于AB期、中高分化、未发生视神经浸润和淋巴结转移的Rb患儿,差异具有统计学意义(t=2.190~3.693,均P<0.05);血清中NEAT1表达诊断Rb曲线下面积为0.882(95%CI:0.826~0.937),当NEAT1表达量取1.20时,灵敏度和特异度分别为80.00%和79.52%;相比于si-NC组(1.03±0.09)和Ctl组(1.02±0.15),si-NEAT1组细胞中NEAT1表达(0.35±0.06)明显降低,差异具有统计学意义(t=14.829,9.994,均P<0.001);si-NEAT1组24,48,72和96 h时吸光度(A值)明显低于si-NC组和Ctl组(tsi-NC=2.796~4.362,tCtl=2.641~5.555,均P<0.05),而细胞凋亡率相比于si-NC组和Ctl组明显升高,差异具有统计学意义(t=4.999,3.915,均P<0.05);与si-NC组和Ctl组比较,si-NEAT1组迁移细胞数(116.50±9.35 vs 132.00±7.32,134.00±7.95)和侵袭细胞数(96.33±8.94 vs 117.67±12.39,119.17±10.05)均降低,差异具有统计学意义(tsi-NC=3.196,3.421,tCtl=3.492,4.159,均P<0.05)。结论Rb患儿血清中NEAT1表达量升高,对Rb患儿具有一定的诊断价值,沉默Y79细胞中NEAT1表达可减少Rb细胞增殖、加速细胞凋亡,同时抑制细胞迁移和侵袭。

关键词： 细胞生物学   亚显微结构   标本库  

摘要： 细胞生物学以细胞为研究对象,了解细胞的亚显微结构对于学习细胞生物学至关重要。目前细胞生物学实验课程标本质量差、标本量严重不足且无细胞亚显微结构标本,因此,为丰富教学资源、提高细胞生物学实验教学水平,细胞生物学亚显微结构标本库必须建设。实践表明,标本库的建设和应用在一定程度上能促进学生学习的主动性和自学能力的培养,同时,标本库的建设也丰富了实验教学内容、增加实验趣味性,实验教学效果得到显著提升。

关键词： 膜片钳技术   中医药文化   仪器管理   玻璃微电极   公共平台   生物物理化学   神经科学   细胞生物学  

摘要： 中医药是中华文明的瑰宝,是世界人民的宝贵财富,传承和发扬中医药文化是每位中医药人的光荣使命。近年来中医药基础研究越来越得到重视,膜片钳技术作为新兴工具出现了。1976年,德国马普生物物理化学研究所Erwin Neher和Bert Sakmann合作发明了膜片钳技术,推动了神经科学、生理学、细胞生物学等学科的发展。膜片钳技术是利用玻璃微电极与细胞膜表面形成紧密接触,经过放大器等系统记录电压或者电流信号的实验方法[1],其本质是研究细胞膜上离子通道的工具。