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关键词： 角色扮演   学困生   留学生   学习积极性   细胞生物学  

摘要： 学困生往往课堂参与度低,学习热情低。对于学困生的转化是当前教育教学工作中的一大难题。笔者在多年的《细胞生物学》教学过程中,在利用角色扮演调动学困生的学习积极性方面,进行了一些探索和实践,取得了一定的效果。该方法同样适用于留学生教学。

关键词： 卵巢肿瘤   miR-622   丝裂原活化蛋白激酶(MAPK1)  

摘要： 背景与目的卵巢癌（ovarian cancer）是妇科常见的三大肿瘤之一,由于卵巢癌患者初始症状不太明显及缺乏有效的早期诊断方法,绝大多数患者确诊时已属于晚期。尽管随着临床医师手术技能的提高、新设备、新药物应用于卵巢肿瘤的治疗中,但是晚期卵巢癌的5年生存率仍然为25%左右。因此,研究更好的卵巢肿瘤早期诊断及治疗方式是当务之急之事。miRNA在细胞增殖、凋亡、分化及发病机制中有重要的调控作用,miRNA在肿瘤的发生、发展过程扮演者“癌基因”和“抑癌基因”的双重生物学功能。miR-622能促进肝癌、胃癌、肺癌等肿瘤细胞的增殖,但是其对卵巢癌细胞生物学特性的影响及机制尚不清楚,本研究通过生信网站预测miR-622作用的靶基因,探讨miR-622对卵巢癌细胞生物学行为的影响。材料与方法采用qRT-PCR（反转录聚合酶链式反应）检测卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR4、OVCAR8、TOV21G及正常卵巢上皮细胞IOSE80中miR-622的表达情况并选择目标细胞系作为下一步实验;对选取的卵巢癌细胞系分别转染miR622-mi与mi-nc;miR622-in与in-nc并分组,并通过qRT-PCR来验证转染效果。通过Targetcar、miRDB及miRTarBase等生信在线网站预测miR-622可能作用的靶基因,并通过Western Blot来验证靶基因在各组中的表达。CCK8检测miR-622对卵巢癌细胞增殖的影响,细胞流式实验检测miR-622对卵巢癌细胞凋亡的影响,transwell及划痕实验检测miR-622对卵巢癌细胞侵袭及迁移的影响。结果***-622在卵巢癌细胞系中表达量均上调,由高到低依次为OVCAR4>SKOV3>OVCAR8>TOV-21G,与正常卵巢细胞IOSE80相比miR-622在卵巢癌中表达差异具有统计学意义（P<0.05）。2.收集lipo3000转染的OVCAR8细胞上调组（miR622-mi）与对照组（mi-nc）,下调组（miR622-in）与对照组（in-nc）,分别对两组细胞进行转染后RT-PCR,结果提示:上调组（miR622-mi组）miR-622的表达量明显升高,下调组（miR622-in组）miR-622表达量明显降低,与各自的对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.通过生信分析MAPK1与miR-622存在结合区,Western Blot结果显示:上调组（miR622-mi）组MAPK1及ERK表达量高于对照组。***8实验结果显示:上调组（miR622-mi）与对照组（mi-nc）相比,其OD值在6h和24h时差异均无统计学意义;48h后差异均具有统计学意义（P<0.05）;下调组（miR622-in）与对照组（in-nc）相比相比,其OD值在6h差异均无统计学意义;24h后差异均具有统计学意义（P<0.05）。5.细胞流式实验检测细胞凋亡情况结果显示:上调组（miR622-mi）与对照组（mi-nc）相比,细胞凋亡率差异无统计学意义;下调组（miR622-in）与对照组（in-nc）相比,细胞凋亡率明显高于对照组。6.细胞划痕实验结果显示:上调组（miR622-mi）与对照组（mi-nc）相比在划痕后24h、48h相比,miR622-mi组细胞迁移能力明显高于对照组:下调组（miR622-in）与对照组（in-nc）相比,24h和48h细胞迁移能力无明显差异。***实验结果显示:上调组（miR622-mi）与对照组（mi-nc）相比及下调组（miR622-in）与对照组（in-nc）相比,细胞侵袭能力无明显差异。结论***-622在卵巢癌细胞系中表达上调。***-622可能通过MAPK1/ERK信号通路促进卵巢癌细胞的增殖、迁移,抑制卵巢癌细胞的凋亡。***-622对OVCAR8细胞的侵袭能力无影响。

关键词： 先天缺牙   Ectodysplasin-A1   牙源性上皮细胞   牙髓干细胞  

摘要： 目的:本研究通过对牙源性细胞转染突变EDA1,探讨突变EDA1对牙源性上皮细胞（LS8细胞）及牙髓干细胞（DPSCs）增殖和细胞周期的影响,为进一步阐明突变EDA1导致先天缺牙的致病机制提供理论依据。方法:LS8细胞及DPSCs常规传代培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中,0.25%胰酶+EDTA消化细胞传代。转染野生型及突变型EDA1质粒及空载体质粒,将实验分组为:野生型EDA1组（Wt）、单纯型突变EDA1各组（A259H、R334H和S374R）、综合征型突变EDA1组（XLHED）和空载体pCR3对照组（pCR3）。MTT法检测LS8细胞及DPSCs各组细胞的增殖活性。流式细胞术检测LS8细胞及DPSCs各组的细胞周期分布。应用SPSS 21.0软件进行统计分析,单因素方差分析检验各组之间的差异,P值设定为0.05。结果:***实验中,Wt组LS8细胞增殖活性升高;第72小时,与pCR3组比较,差异具有显著性（P<0.05）;第96小时,与XLHED组及pCR3组比较,差异具有显著性（分别为P<0.05;P<0.01）。单纯型突变EDA1各组（A259E组、R334H组和S374R组）分别与Wt组、XLHED组和pCR3组比较均未见显著性差异（P>0.05）。2.细胞周期实验中,与Wt组及单纯型突变EDA1各组（A259E组、R334H组和S374R组）比较,XLHED组LS8细胞在G0/G1期分布比例显著增加（P<0.05）,在S期细胞分布比例显著降低（P<0.01）。***细胞增殖及细胞周期实验中,各组间比较均未见显著性差异（P>0.05）。结论:1.野生型EDA1较综合征型突变EDA1促进LS8细胞的增殖;2.与野生型及单纯型突变EDA1比较,综合征型突变EDA1将LS8细胞阻滞于G0/G1期,并降低S期细胞分布比例;***1对DPSCs增殖及细胞周期均未见明显作用。

关键词： 胚胎干细胞   拟胚体   成釉细胞无血清条件培养液  

摘要： 目的探讨胚胎干细胞经过拟胚体的形成与直接诱导分化是否影响胚胎干细胞的特性。方法观察不同培养方法经过相同的诱导条件后胚胎干细胞形态学的变化,进行基因表达及免疫表型的检测。结果从形态学来看,经过拟胚体的培养后诱导分化和直接诱导分化后都有鹅卵石样的细胞生成,PCR结果显示:两组细胞在同一诱导条件下均能表达牙上皮相关基因,且经过拟胚体培养后的诱导组表达更强。细胞表型的变化与PCR结果相一致。结论经过拟胚体的培养方法诱导效率高于直接培养后的诱导分化。

关键词： 乳凝集素蛋白   细胞增殖   细胞迁移  

摘要： 乳凝集素(Lactadherin)又被称为乳脂肪球表皮生长因子8(MFGE-8)，是乳汁脂肪小球表面具有亲脂性的一类多功能糖蛋白，其包含了一个或多个重复的N端表皮生长因子EGF结构域，以及与凝血因子V和Ⅷ具有序列同源性的C样结构域，在凋亡细胞的吞噬，血管的生成与重塑，细胞的增殖、粘附和迁移等多种生物学过程中均具有重要作用。海鞘属于脊索动物门，是与脊椎动物亲缘关系最近的分支，已经成为研究动物进化和发育的一种重要生物材料。截至目前，在海鞘的胚胎发育和幼虫变态过程中报道了一系列免疫反应现象，而海鞘转录组等数据显示，与免疫有关的乳凝集素很有可能参与了这些生物学过程。因此，基于乳凝集素在哺乳动物中已有的功能，本实验对新发现的柄海鞘乳凝集素蛋白进行了研究，旨在探索其在海鞘胚胎发育和器官发生中的潜在功能。　　本研究首次从海洋无脊椎动物柄海鞘（Styelaclava）转录组中鉴定出一种乳凝集素同源基因，并命名为柄海鞘乳凝集素（Sc-lactadherin）。通过原位杂交实验确定Sc-lactadherin在柄海鞘中的定位;利用原核表达载体pGEX-6P-1获得了N末端带有融合谷胱甘肽巯基转移酶标签(GST-tag)的柄海鞘乳凝集素蛋白（GST-Sc-Lactadherin）;通过过表达Sc-lactadherin在内皮细胞-人脐静脉内皮细胞（HUVECs）及肿瘤细胞-人宫颈癌细胞（HeLa）中检测其在细胞中的定位;通过血细胞凝集实验验证重组蛋白GST-Sc-Lactadherin的生物活性;通过噻唑蓝（MTT）实验以及细胞划痕实验检测重组蛋白GST-Sc-Lactadherin对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）及人宫颈癌细胞（HeLa）增殖和迁移的影响;获得的结果如下：　　1.原位杂交实验结果显示，柄海鞘乳凝集素Sc-lactadherin作为一种细胞外基质（ECM）成分，其在柄海鞘表皮细胞处分布，并大量表达;2.测序结果显示pGEX-6P-1-Sc-Lactadherin蛋白表达载体构建成功，SDS-PAGE电泳结果显示成功表达并获到纯化的重组蛋白GST-Sc-Lactadherin;3.重组蛋白Sc-Lactadherin的血细胞凝集实验显示，柄海鞘乳凝集素具有凝集兔血细胞的能力，且该凝集素在高温或高pH处理后会丧失血细胞凝集功能，结果表明纯化的重组蛋白GST-Sc-Lactadherin具有一定的生物活性;4.细胞过表达Sc-Lactadherin-EFGP以及鬼笔环肽（phalloidin）染色结果显示，Sc-Lactadherin-EFGP在HUVECs细胞及HeLa细胞中均定位于细胞质中;5.细胞噻唑蓝（MTT）实验显示，重组蛋白Sc-Lactadherin（150、500ng/μL）促进了HUVECs及HeLa细胞的增殖;在添加500ng/μL重组蛋白24小时后，HUVECs细胞相对增殖率为161%，HeLa细胞相对增殖率为135%，显着高于添加培养基和添加GST-tag蛋白的对照组（plt;0.01）;6.细胞划痕实验显示，添加低浓度重组蛋白Sc-Lactadherin促进了HUVECs细胞的迁移作用，与对照组相比差异显著（plt;0.05），而低浓度重组蛋白Sc-Lactadherin对HeLa细胞的迁移影响不显著（pgt;0.05）;综上所述，本研究确定柄海鞘乳凝集素作为一种细胞外基质糖蛋白，能够在柄海鞘的表皮细胞处分布并大量表达;且经过原核表达得到的重组蛋白Sc-Lactadherin具有凝集兔血红细胞的生物活性;并在一定的实验浓度范围内，能够促进内皮细胞的生长和迁移，此外，对于肿瘤细胞的增殖也有一定的作用。研究结果表明，新发现的柄海鞘乳凝集素能够参与众多的细胞生物学过程，同时，这些结果也为进一步探索其在海鞘的胚胎发育和幼虫变态等发生过程中的潜在功能提供了基础。

关键词： 开放性实验   纯化   活性  

摘要： 开放性实验作为大学实验教学的一种新模式,在培养医学类本科生方面具有明显的优势,首先可以培养学生严谨的科研思维方式,其次可以锻炼学生的动手能力、实践能力。根据医学细胞分子生物学的经验总结,从实验教学内容、实验教学方法、考核方式这几个方面进行开放性实验的探索设计,并提出具体的改革方案,旨在让学生在本科阶段能切实掌握一定的科研研究方法,培养严谨的科研思维。

关键词： 细胞生物学   高等学校   教材  

ISBN: (纸本)9787030611970

摘要： 本书分为11章，分别为细胞生物学研究方法，细胞膜与细胞表面，小分子物质的跨膜运输，细胞核，细胞质及内膜系统，半自主性细胞器，细胞骨架，细胞增殖，细胞的分化、衰老和死亡，细胞通讯与信号转导等。

关键词： 激素性股骨头坏死   细胞生物学学说   信号通路   相关研究   综述  

摘要： 临床医师基于临床疾病,低剂量长期化或高剂量短期化使用激素可引起股骨头坏死已达成共识,但激素性股骨头坏死的发病机制在学术界尚无确切定论。针对其发病机制进行探讨研究,可为临床工作提供参考,有利于提高临床疗效。本文章拟对激素性股骨头坏死发病机制的细胞生物学学说及细胞信号通路等研究进展现状作一综述。

关键词： 增生性瘢痕   A型肉毒毒素   粘着斑激酶   成纤维细胞  

摘要： 目的:观察粘着斑激酶在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达情况,并观察A型肉毒毒素作用后,成纤维细胞中粘着斑激酶及相关蛋白表达的差异性。探索A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及迁移的作用,并进一步探究A型肉毒毒素抑制增生性瘢痕的作用机制,为临床应用A型肉毒毒素抑制增生性瘢痕提供理论依据。方法:实验研究的组织标本来源于2016年10月至2018年2月北部战区总医院整形外科就诊的患者。实验研究纳入标准:经术前临床诊断及术后病理检查确诊为增生性瘢痕,患者无全身系统性疾病,术前未接受过任何抑制增生性瘢痕治疗,于我科接受手术切除治疗。实验组标本:手术切除后的增生性瘢痕组织,随机选取6例作为实验组。对照组标本:对照组标本均来自手术区域,为局部皮瓣转移后多余的正常皮肤组织及正常瘢痕组织。对成纤维细胞进行体外分离、培养,用0.05 U、0.1 U浓度的A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞进行作用,对照组未应用A型肉毒毒素。通过MTT实验观察A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用情况。利用Annexin V/PI染色,观察不同浓度A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用情况。通过Transwell实验,观察A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞迁移的作用情况。通过Western blot实验,观察粘着斑激酶在正常皮肤、普通瘢痕及增生性瘢痕三种组织中的表达情况;分别应用不同浓度的A型肉毒毒素作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞后,通过Western blot实验检测成纤维细胞中黏着斑激酶及相关蛋白的表达情况。记录实验数据和结果,并进行统计学分析。结果:MTT实验结果显示,与对照组相比,不同浓度A型肉毒毒素作用于增生性瘢痕成纤维细胞后,细胞的增殖受到抑制,0.1 U浓度比0.05 U浓度的抑制作用强。流式细胞仪显示,Annexin V/PI染色后,0.05 U及0.1 U浓度A型肉毒毒素作用后,增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡率分别为3.8%、6.9%,对照组为1.2%。Transwell实验结果显示,A型肉毒毒素作用于增生性瘢痕成纤维细胞后,细胞的迁移受到抑制,并且0.1 U浓度比0.05 U浓度的抑制作用强。Western blot实验结果显示,三种标本成纤维细胞中,黏着斑激酶磷酸化形式FAK在增生性瘢痕成纤维细胞中具有差异性表达。不同浓度的A型肉毒毒素作用后,增生性瘢痕成纤维细胞中黏着斑激酶总的表达水平没有影响,FAK较对照组表达水平降低。增殖相关蛋白CDK4及凋亡相关蛋白Bcl-2表达水平均降低,并且0.1 U浓度组比0.05 U浓度作用明显。结论:1、A型肉毒毒素能够抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。2、A型肉毒毒素能够促进增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡。3、A型肉毒毒素能够抑制增生性瘢痕成纤维细胞的侵袭及迁移。4、增生性瘢痕中黏着斑激酶磷酸化形式FAK表达增高。5、A型肉毒毒素能够抑制增生性瘢痕成纤维细胞中FAK及相关蛋白的表达。

关键词： miRNA-10a   肝星状细胞   肝纤维化   Wnt/β-catenin通路  

摘要： 目的:肝纤维化是慢性肝脏疾病发展为肝硬化甚至肝癌的必经过程和病理基础。肝星状细胞的增殖、活化已被证实是肝纤维发生、发展的核心事件。miRNA-10a是一种具有调控作用的小分子RNA,可以通过某些途径来影响肝纤维化进程。本文拟从细胞水平出发,探讨miRNA-10a对人肝星状细胞系LX-2活化的作用,研究miRNA-10a对LX-2细胞增殖、凋亡的影响,并探究潜在的分子机制。本课题旨在探究miRNA-10a对LX-2细胞生物学功能的作用及分子机制,为肝纤维化的防治提供新的思路。方法:培养人肝星状细胞系LX-2,设置空白对照组与TGF-β1刺激组培养24h后,提取细胞总RNA,RT-qPCR检测miRNA-10a的表达情况。培养LX-2,随后分别转染miRNA-10a的模拟物(mimics)或抑制物(inhibitor),提取细胞总RNA,采用RT-qPCR检测miRNA-10a的水平;收集细胞总蛋白和总RNA,采用RT-qPCR或Westernblot分别检测CollagenIα-SMA、的mRNA或蛋白水平;采用CCK-8法检测转染后继续培养不同时间的细胞增殖情况;采用流式细胞术检测转染后继续培养48h的细胞凋亡水平;采用Westernblot检测细胞内GSK-3β、p-GSK-3β和β-catenin蛋白相对表达量。结果:经TGF-β1诱导培养后,人肝星状细胞系LX-2中miRNA-10a水平显著增加;RT-qPCR和Westernblot实验结果表明,miRNA-10a能诱导CollagenI、α-SMAmRNA或蛋白水平显著上调,而抑制miRNA-10a可显著逆转TGF-β1诱导的CollagenIα-SMAmR、NA或蛋白的上调。CCK-8实验结果显示,miRNA-10a能促进LX-2的增殖,而下调miRNA-10a水平能显著抑制TGF-β1诱导的LX-2增殖。流式细胞术结果表明,miRNA-10a可抑制LX-2的凋亡,而下调miRNA-10a水平能显著增加TGF-β1诱导的LX-2凋亡。机制研究表明,miRNA-10a能上调p-GSK-3β和β-catenin的蛋白表达水平,而下调miRNA-10a水平能显著逆转TGF-β1诱导后p-GSK-3β和β-catenin蛋白表达上调。结论:miRNA-10a能诱导人肝星状细胞系LX-2增殖,能抑制其凋亡,且可能通过激活Wnt/β-catenin信号转导调节肝纤维化进程。下调miRNA-10a水平能有效的抑制肝纤维化进展,为肝纤维化的防治提供了新思路与理论基础。