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关键词： HU-308   糖皮质激素   MC3T3-E1   增殖   分化  

摘要： 目的:糖皮质激素(glucocorticoids,GC)因其具有抗免疫、抗炎、抗毒素、抗休克等多种作用而广泛应用于临床,但也存在着诸多副作用,例如长期使用导致的骨质疏松会影响种植体周围骨结合。地塞米松是目前临床最常用的糖皮质激素,研究证明地塞米松在浓度10-6mmol/L、10-7mmol/L下,可以抑制成骨细胞增殖。HU-308是一种CB2大麻素受体激动剂,近年来有学者研究发现HU-308可影响骨的形成,增加骨量并维持骨质,从而促进种植体周围骨结合。但是其对成骨细胞生物学性能存在何种影响仍有较多争议。因此,本实验通过观察HU-308对高浓度糖皮质激素(即地塞米松)作用下成骨细胞生物学性能的影响,探讨HU-308增强长期服用糖皮质激素患者种植体骨结合的可能机制,为提高长期服用糖皮质激素患者种植成功率提供新方法。方法:将MC3T3-E1细胞在高浓度糖皮质激素(10-6mol/L)进行培养,按加入的HU-308浓度分为0(对照组)、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L(实验组)6组,分别培养1d、4d、7d检测细胞增殖及ALP活性、钙化结节、成骨相关基因Runx2及OPG mRNA的表达,培养24 h观察细胞骨架的形态变化结果:1、CCK-8比色结果显示,培育1d、4d、7d后,对照组与实验组各组OD值相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);培育1d与7d,实验组中各浓度之间相比,差异无统计学意义(P>0.05);培育4d实验组中随药物浓度的增高细胞增殖的促进作用越明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。2、碱性磷酸酶(ALP)活性检测结果显示,随着细胞培养时间的增加,MC3T3-E1细胞中ALP的活性均增加,差异有统计学意义(P<0.05);分别培育1d、4d、7d后,对照组及实验组中,在相同时间点,各组相比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。3、茜素红染色显示,对照组染色结节数目较少。实验组中(HU-308浓度为10-10mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L、10-7 mol/L、106 mol/L)与对照组相比,染色结节数目增加且体积增大。但实验组各浓度组之间染色结节观察并无明显差异。4、RT-qPCR检测成骨诱导7天后OPG和Runx2 mRNA表达情况:与对照组相比,在浓度为1 0-10mol/L、10-9mol/L的HU-308的作用下OPG和Runx2mRNA的表达均出现上调,且随浓度的减小上调作用增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。在高浓度HU-308的作用下OPG、Runx2 mRNA的表达出现抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。5、细胞骨架形态染色显示,对照组中MC3T3-E1细胞伸展以及铺展面积较小,未见清晰的肌动蛋白纤维,观察不到细胞内部清晰的网状结构。实验组随着HU-308浓度上升,细胞体积增大,细胞伸展范围增大,可逐渐清晰地看到细胞骨架呈网格状铺展,内部结构也更为清晰。其中HU-308浓度为10-7mol/L、10-6mol/L的两组中可清晰看见纤维走形以及细胞内部结构。结论:HU-308可促进高浓度糖皮质激素作用下MC3T3-E1细胞的增殖,而对分化无明显影响;低浓度的HU-308可促进Runx2、OPG mRNA表达;增加细胞的铺展面积,使细胞内部框架结构更为清晰,提示HU-308可有利于糖皮质激素所致骨质疏松患者种植体的骨结合。

关键词： 小RNAs   转化生长因子-β   颞下颌关节骨关节炎   软骨形成  

摘要： 颞下颌关节(Temporomandibular joint,TMJ)是颌面部唯一同时具备转动和滑动运动的左右联动关节,参与了咀嚼、吞咽、言语、表情和呼吸等精细且复杂的功能活动。骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是关节疾病中的典型代表,其发病率高,对人体危害大,严重影响了患者的生活质量。虽有不少学者对这类关节疾病进行了相关研究报道,但目前对骨关节炎,尤其是颞下颌关节骨关节炎(Temporomandibular joint osteoarthritis,TMJ-OA)复杂的病理机制尚缺乏完整认识。以往的研究表明,miR-140-5p在软骨细胞分化和软骨内稳态过程中发挥着重要的作用,miR-140-5p基因敲除鼠会出现增龄性骨关节炎的症状。然而,临床研究却发现骨关节炎患者的关节软骨中miR-140-5p表达显著增加。虽然越来越多的研究认为miR-140-5p与OA关系密切,但其功能作用至今仍存在争议。有关miR-140-5p在OA,尤其在TMJ-OA中的作用机制亟需被阐明。本研究第一部分通过建立炎症微环境体外实验模型,模拟了 TMJ-OA样病损改变。第二部分探索了 miR-140-5p的作用靶点,并在炎症微环境中的髁突软骨细胞进行验证。第三部分通过靶向沉默Smad3,进一步阐明miR-140-5p的信号调控网。研究结果探讨了炎症微环境下miR-140-5p调控软骨细胞增殖、分化相关的机制,为TMJ-OA的发生、发展及临床治疗提供重要的参考。第一部分炎症微环境对下颌髁突软骨细胞及胫骨生长板软骨细胞生物学特性的影响[目 的]建立下颌髁突软骨细胞及胫骨生长板软骨细胞炎症微环境体外实验模型,探索不同类型软骨细胞在炎症微环境中的生物学差异。[方 法]1.通过二步酶消化法提取原代下颌髁突软骨细胞及胫骨生长板软骨细胞,采用HE染色法及Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学染色进行细胞来源鉴定。2.通过CCK-8检测两种细胞的细胞增殖率并描绘生长曲线。3.利用IL-1β诱导刺激下颌髁突软骨细胞与胫骨生长板软骨细胞0 h至24 h,建立不同类型软骨细胞的炎症微环境体外实验模型。采用qRT-PCR或Western blotting检测miR-140-5p、MMP13、Col2a1的表达变化,验证体外实验模型的可靠性并探索最佳实验条件。4.观测炎症微环境对两种软骨细胞的炎症反应相关蛋白NF-κB1以及软骨形成分化相关蛋白 Smad3/4、p-Akt1、Runx2、p-CREB、Sox9、TGF-β3 蛋白表达水平的影响,并进行对比研究。[结 果]1.所提原代细胞经免疫细胞化学染色,结果显示Ⅱ型胶原蛋白表达阳性,表明所提取的原代细胞具有软骨细胞的特异性表征,原代软骨细胞的提取方法可靠。***-8检测结果提示,在培养第5天开始胫骨生长板软骨细胞的光密度值较下颌髁突软骨细胞的光密度值大,差异具有统计学意义。***-PCR检测结果表明,随着IL-1β诱导刺激时间延长,MMP13以及miR-140-5p的表达逐渐升高,且在诱导24小时差异最显著。相反,Col2a1的mRNA表达水平下降。*** blotting检测发现,两种软骨细胞在IL-1β诱导的炎症微环境下,Col2a1蛋白表达降低而NF-κB1蛋白表达升高,提示IL-1β可促进软骨细胞的炎症反应;而软骨细胞增殖、分化相关蛋白 Smad3/4、p-Akt1、Runx2、p-CREB、Sox9、TGF-β3的表达降低,提示软骨细胞的增殖、分化、表型维持等受到影响。值得注意的是,当对比研究两种软骨细胞在炎症微环境中软骨形成相关蛋白表达差异时发现,下颌髁突软骨细胞的TGF-β3蛋白减少程度较胫骨生长板软骨细胞更明显,而p-Akt1蛋白水平的表达降低程度则在胫骨生长板软骨细胞内表现更加显著。[结 论]1.二步酶消化法提取的原代软骨细胞来源可靠,重复性好。2.胫骨生长板软骨细胞的增殖能力较髁突软骨细胞强。***-1β诱导刺激24 h是较理想的炎症微环境实验条件。***-1β可促进炎症反应,影响软骨细胞的增殖、分化。5.尽管不同部位关节软骨细胞在炎症微环境中的表现略有差异,但总体上都表现出相似的OA病理改变,提示IL-1β诱导MCCs的体外模型同样可具有类似TMJ-OA样的病损改变。第二部分miR-140-5p在TGF-β通路中的作用靶点验证[目 的]预测miR-140-5p在TGF-β通路中潜在的靶基因结合位点,并进行验证。探索炎症微环境下,IL-1β介导miR-140-5p通过TGF-β信号通路对下颌髁突软骨细胞的增殖、分化、凋亡相关蛋白进行调控的机制。[方 法]1.对miR-140-5p与Smad3、Smad4 的 3'非翻译区(3'-untranslated region,3'UTR)潜在结

ISBN: (纸本)9787521413892

关键词： 颅骨锁骨发育不全   骨髓基质细胞   成骨   microRNA-31   骨质疏松  

摘要： 颅骨锁骨发育不全(cleidocranial dysplasia,CCD)是一种由runt相关的转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)突变引起的以骨骼发育不良为特征的先天性疾病,呈常染色体显性遗传。其典型的临床表现有前囟门闭合不全、锁骨发育不良、恒牙萌出障碍、多生牙等,并且,有研究显示CCD患者发生骨质疏松症的风险显著增加。骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是具有多向分化潜能的干细胞,对维持骨骼系统的代谢平衡至关重要。研究显示,RUNX2单倍剂量不足会导致CCD患者的骨髓基质细胞(BMSCs-CCD)的生物学性能发生改变,但其内在机制仍有待探究。有研究通过大鼠骨髓基质细胞证实RUNX2从转录水平抑制micro RNA-31(mi R-31)的表达,但尚未在人类的骨髓基质细胞中得到验证。本研究拟分析CCD患者骨髓基质细胞生物学特性的改变,在此基础上探讨mi R-31对CCD患者骨髓基质细胞成骨功能的影响及其可能机制。第一部分:颅骨锁骨发育不全患者骨髓基质细胞的体外分离培养及生物学特性目的:体外分离培养CCD患者(BMSCs-CCD)和正常同龄对照组的骨髓基质细胞(BMSCs),并对其生物学特性进行分析比较。方法:(1)利用颌骨松质骨组织块贴壁法体外分离培养CCD患者和正常同龄人的BMSCs,待细胞从组织块中爬出形成集落且各集落开始融合时进行传代培养;CCK-8法、流式细胞周期以及Brd U细胞增殖实验分析比较两种细胞增殖能力。(2)实时定量PCR分析测定两种BMSCs中RUNX2的表达;成骨诱导后分别通过碱性磷酸酶、茜素红染色及Western blot方法分析两种细胞成骨分化能力的差异。(3)采用结晶紫染色检测克隆形成能力;检测多潜能转录因子比较两种细胞的干性水平;检测衰老调控关键因子的表达并通过β-gal衰老染色实验分析衰老表型差异;通过细胞免疫荧光验证BMI1在两种BMSCs中的表达差异。结果:(1)与正常对照BMSCs相比,BMSCs-CCD增殖缓慢,细胞在S期、G2期的百分率与Brd U阳性细胞率均较低。(2)分别对比3例CCD患者与正常同龄人BMSCs中RUNX2的表达差异,结果显示BMSCs-CCD中RUNX2的m RNA水平与蛋白水平均明显降低。对两种细胞进行成骨诱导,BMSCs-CCD中RUNX2、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)、骨钙素(Osteocalcin,OCN)等成骨相关蛋白表达下降,碱性磷酸酶活性降低,且形成的矿化结节较少。(3)BMSCs-CCD组所形成的克隆集落少于BMSCs组,BMSCs-CCD组中多潜能转录因子OCT4、NANOG和SOX2的表达均低于BMSCs组。同时BMSCs-CCD组衰老细胞比率高于BMSCs组,且高表达衰老相关标记分子p16、p21,低表达衰老调控因子BMI1。BMSCs-CCD中BMI1阳性率显著低于BMSCs。结论:与正常对照BMSCs相比,BMSCs-CCD的增殖、成骨分化能力、克隆形成能力以及干性较弱,且细胞易于衰老。BMSCs-CCD生物学特性的改变可能会导致其成骨能力降低,继而影响CCD患者骨骼系统的平衡与稳定,并与CCD患者骨质疏松症的发生相关。调节细胞自我更新与衰老的关键因子BMI1的表达下降可能与BMSCs-CCD的衰老特性改变有关。第二部分:micro RNA-31调控CCD患者BMSCs成骨分化及衰老特性的机制研究目的:分析micro RNA-31(mi R-31)对CCD患者BMSCs成骨分化能力及衰老特性的影响,探讨RUNX2单倍剂量不足影响mi R-31表达的机制。方法:(1)实时定量PCR检测mi R-31在BMSCs-CCD和BMSCs中的表达差异。(2)在BMSCs中应用小干扰RNA敲减RUNX2(si-RUNX2),检测mi R-31表达变化;通过生物信息学网站分析预测RUNX2与mi R-31启动子区的可能结合位点,构建双荧光素酶报告基因质粒,在293T细胞中同时转染si-RUNX2与突变体或野生型质粒,检测分析荧光素酶活性差异。(3)在BMSCs-CCD中转染mi R-31干扰的慢病毒载体,通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色及Western blot分析比较转染前后成骨分化能力的改变。(4)β-gal衰老染色实验检测转染前后细胞的衰老情况,并通过Western blot分析比较衰老调控关键因子的表达变化。结果:(1)相比于正常对照BMSCs,mi R-31在BMSCs-CCD中高表达。(2)敲减RUNX2后BMSCs中mi R-31的表达升高。应用si-RUNX2转染293T细胞可增强野生型mi R-31表达质粒的荧光素酶活

关键词： PRL-3   Stathmin   过表达   AML   生物学活性   分子机制  

摘要： 目的1构建PRL-3过表达慢病毒重组质粒表达载体并鉴定,研究过表达PRL-3引起Stathmin的表达变化对K562及U937白血病细胞生物学活性的影响。2初步探讨过表达PRL-3引起Stathmin的表达变化影响白血病细胞生物学特性改变的可能分子机制。方法1构建PRL-3过表达慢病毒重组质粒载体系统pGC-FU-PRL-3-GFP,采用测序、Western blot等方法鉴定重组载体。2以AML细胞K562、U937为实验细胞株,感染pGC-FU-PRL-3-GFP的细胞为过表达组(over-expression,OE组),感染pGC-FU-GFP的细胞为空载体对照组(negative control,NC组),未感染病毒的细胞为空白对照组(control group,CON组)。使用嘌呤霉素筛选稳转株,通过qPCR及Western blot鉴定PRL-3 mRNA及蛋白改变水平;检测PRL-3过表达后Stathmin表达变化。3间接免疫荧光标记PRL-3和Stathmin后,荧光显微镜分析二者在实验细胞株中定位情况。4采用MTS法、细胞克隆形成实验、DNA倍体分析法、AnnexinV-PE/7-AAD双染法以及Transwell转移侵袭实验检测PRL-3过表达后K562和U937细胞的增殖、周期、凋亡以及转移侵袭等生物学活性的变化。5运用Western blot检测过表达PRL-3引起Stathmin表达变化后,Stathmin四个磷酸化位点Ser16、25、38、63的蛋白表达变化;检测STAT信号通路蛋白STAT3、STAT5及其磷酸化蛋白表达变化;检测基质金属蛋白酶MMP2、MMP9的表达变化;分析探讨过表达PRL-3引起Stathmin的表达变化影响AML细胞生物学活性的可能分子机制。结果1成功构建PRL-3过表达慢病毒载体并鉴定。2 PRL-3过表达慢病毒感染AML细胞U937和K562 48h后,观察到GFP的表达。嘌呤霉素筛选出稳转株,qPCR及Western blot检测显示:各OE组细胞PRL-3在mRNA和蛋白水平表达上调,PRL-3过表达成功。3过表达PRL-3后,各OE组细胞较NC组细胞Stathmin mRNA和蛋白表达均明显上调(U937 P<0.01,K562 P<0.05)。4间接免疫荧光检测显示:PRL-3与Stathmin蛋白于细胞内定位相近。5.与U937-NC组相比,U937-OE组细胞增殖速度加快(P<0.05)、细胞克隆形成率增高(P<0.01);处于S期的细胞比例明显增多(P<0.05)、总凋亡率减少(P<0.01);迁移率和侵袭穿膜细胞明显增多(P<0.05)。而在K562细胞中,OE组与NC组细胞的上述生物学活性指标均无明显变化(P>0.05)。5与U937-NC组细胞相比,U937-OE组细胞中Stathmin Ser16、25、38、63四个位点的磷酸化蛋白表达水平呈现不同程度的下调(P<0.01),STAT3、STAT5磷酸化水平及MMP2、MMP9蛋白表达水平均上调(P<0.01)。而在K562-OE组细胞中,仅Stathmin Ser25磷酸化蛋白表达水平下调(P<0.05),Ser16、38、63三个位点的磷酸化蛋白表达水平无明显变化(P>0.05);STAT3、STAT5磷酸化水平无明显差异(P>0.05);MMP2、MMP9蛋白表达水平上调(P<0.05)。结论1成功构建了PRL-3过表达慢病毒载体。2在U937细胞中,过表达PRL-3可引起Stathmin的表达增加,S期细胞增多,细胞增殖增加、凋亡减少,迁移和侵袭力增强等生物学活性改变。Stathmin的四个磷酸化蛋白去磷酸化增强,STAT信号通路激活,MMP2、MMP9蛋白的表达增加。3在K562细胞中,过表达PRL-3也可引起Stathmin的表达增多,Stathmin Ser25去磷酸化增强,MMP2、MMP9蛋白激活,STAT3、STAT5磷酸化水平无变化,细胞生物学活性无明显改变。4 Stathmin可能是介导PRL-3对AML细胞生物学活性影响的一个靶点。

关键词： Immunology   Biomedical engineering   Physiology   Epidemiology   Public health   Oncology   Health sciences  

摘要： Studies of human lymphopoiesis are important towards gaining a thorough understanding of normal immune cells and can provide insights into the pathophysiology of immune disorders and deficiencies. Innate lymphoid cells (ILCs) are a newly discovered family of immune cells with emerging roles in the defense against cancer, viral and bacterial infections, allergies, and autoimmune diseases. These immune cells are unique in that they share features of both innate and adaptive immunity. While ILCs lack the ability to respond in an antigen-specific manner, they closely resemble adaptive lymphocytes in terms of transcriptional signatures and effector function. There are four types of ILCs: cytotoxic natural killer (NK) cells and as many as three subsets of non-cytotoxic, cytokine-producing “helper” ILCs termed ILC1s, ILC2s, and ILC3s (the existence of ILC1s in states of normal human physiology remains controversial). Currently, little is known about the development and regulation of helper ILCs. Previously, our laboratory discovered a comprehensive pathway of human NK cell development in secondary lymphoid tissues (SLTs) such as tonsils and lymph nodes exclusive of other ILCs, and have begun to explore human ILC development in general. In particular, we and others have described and characterized multipotent CD34+CD117- progenitor cells as well as CD34+CD117+ common ILC progenitors in human tonsils. Based on these data, we hypothesized that in humans all ILCs share a common developmental pathway in tonsils and that at some point, each ILC subset terminally differentiates along its own developmental trajectory. Here we elucidated key steps of NK cell, ILC2, and ILC3 development within human tonsils using ex vivo molecular, transcriptional, and functional profiling and lineage differentiation assays. We demonstrated that while tonsillar NK cells, ILC2s, and ILC3s originate from a common ILC precursor cell identified as CD34-CD117+, final steps of ILC2 development deviate ind

关键词： 《中国细胞生物学学报》   细胞生物学  

摘要： 《中国细胞生物学学报》(原《细胞生物学杂志》)创刊于1979年9月,目前由中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所和中国细胞生物学学会共同主办,是国内外公开发行的专业性学术期刊。在过去四十年里,作为我国细胞生物学最权威的中文期刊,《中国细胞生物学学报》秉承推动我国细胞生物学发展的宗旨,通过研究论文、综述论文和教学研究等栏目,发表了大量论文,为中国细胞生物学的发展作出了重要贡

关键词： 微课   细胞生物学   翻转课堂  

摘要： 本文围绕着高校微课与翻转课堂教学的特点,总结基于微课的细胞生物学翻转课堂教学的特点和优势,根据我校细胞生物学教学的现实需求,提出基于微课的细胞生物学翻转课堂教学模式,着力促进细胞生物学教学改革。

关键词： 肝卵圆细胞   炎症微环境   转化生长因子β1   分化抑制因子1  

摘要： 目的:1.利用SD大鼠构建肝卵圆细胞增殖为主的炎症性和非炎症性肝损伤修复模型,观察肝卵圆细胞在炎症增殖环境和非炎症增殖环境中细胞学特性的差异,初步分析肝脏微环境对肝卵圆细胞转归的影响。2.利用SD大鼠制备肝细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型、肝卵圆细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型、炎症性肝损伤修复模型,检测损伤修复初期、损伤修复中期和损伤修复晚期肝组织中TGFβ1、ALK1、Smad5、Id1的蛋白表达,各模型肝卵圆细胞数量,分析比较不同肝脏损伤修复模型中TGFβ1、ALK1、Smad5、Id1的变化规律及与肝卵圆细胞增殖的关系。方法:1.15只SD大鼠随机分为空白对照组、肝卵圆细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型组、肝卵圆细胞增殖为主的炎症性肝损伤修复模型组,运用2-乙酰氨基芴（2-AAF）联合2/3肝切除建立非炎症环境肝卵圆细胞增殖模型,运用2-AAF联合四氯化碳（CCl4）建立炎症环境肝卵圆细胞增殖模型。HE染色观察肝脏组织学变化;免疫组化法观察肝卵圆细胞EpCAM、CD133、OV6的表达,测量平均光密度值;透射电镜观察肝卵圆细胞亚细胞结构变化。2.60只SD大鼠随机分为空白对照组、肝细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型、肝卵圆细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型、炎症性肝损伤修复模型组,运用1/3肝切除建立肝细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型,运用2-AAF联合1/3肝切除建立肝卵圆细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型,运用皮下注射CCl4建立炎症性肝损伤修复模型。HE染色观察肝脏组织结构变化;免疫组化法观察TGFβ1、ALK1、Smad5、Id1组织定位情况,免疫组化法鉴定OV6+肝卵圆细胞;Western Blot检测TGFβ1、ALK1、Smad5、Id1表达量。结果:1.成功构建肝卵圆细胞增殖为主的炎症和非炎症性肝损伤修复模型。HE染色:正常组大鼠肝脏结构规整;非炎症性肝损伤修复模型大鼠肝脏无炎性细胞浸润;炎症性肝损伤修复模型大鼠肝脏呈肝纤维化形成期改变,大量炎性细胞浸润。免疫组织化学染色:非炎症和炎症性肝损伤修复模型中均可见EpCAM、CD133、OV6表达阳性的肝卵圆细胞,炎症性肝损伤修复模型EpCAM、CD133、OV6表达量较非炎症性肝损伤修复模型高（P<0.05）。透射电镜观察:非炎症和炎症性肝损伤修复模型中均可见Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型肝卵圆细胞亚型;炎症性肝损伤修复殖模型异形肝干细胞数较非炎症环境增殖模型多（P<0.05）,炎症性肝损伤修复模型见“胆管反应”。***染色见双核分裂相肝细胞,提示成功建立肝细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型。肝卵圆细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型、炎症性肝损伤修复模型中均可见OV6+肝卵圆细胞,提示成功建立肝卵圆细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型、炎症性肝损伤修复模型。免疫组化检测显示:三种模型中均有TGFβ1、ALK1、Smad5、Id1表达。Western Blot检测显示:肝细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型TGFβ1表达量逐渐升高,肝卵圆细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型TGFβ1表达量先升高后降低,ALK1表达量变化与相应模型中TGFβ1变化趋势大致一致。肝细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型Smad5表达量先下降后升高;而肝卵圆细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型Smad5表达量逐渐降低。肝细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型、肝卵圆细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型Id1表达量均逐渐升高。炎症性肝损伤修复模型TGFβ1、ALK1、Smad5、Id1均随着肝脏损伤加重逐渐升高,而在停止注射CCl4溶液后的恢复阶段TGFβ1、ALK1、Smad5表达均下降,而Id1仍持续升高。肝细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型1周、肝卵圆细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型1周、炎症性肝损伤修复模型6周时OV6+肝卵圆细胞数量达峰值。结论:1.2-AAF联合2/3肝切除成功建立肝卵圆细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型,CCl4联合2-乙酰氨基芴成功建立肝卵圆细胞增殖为主的炎症性肝损伤修复模型;通过1/3肝切除成功建立肝细胞增殖为主的非炎症性肝损伤修复模型,通过皮下注射CCl4成功建立炎症性肝损伤修复模型。2.炎症环境中肝卵圆细胞较非炎症环境中的肝卵圆细胞具有更强的肿瘤干性,肝卵圆细胞亚细胞结构异常可能在炎症早期就已存在。3.在炎症性和非炎症性肝损伤修复模型、肝卵圆细胞增殖为主和肝细胞增殖为主的肝损伤修复模型中TGFβ1/ALK1/Smad5/Id1信号通路元件表达的动态变化趋势存在差异。

关键词： 人乳头瘤病毒   宫颈癌   干扰素诱导蛋白16   抑癌基因p53  

摘要： 研究背景:宫颈癌是世界范围内常见的女性恶性肿瘤,每年有超过50万的新增病例,其中超过26万的患者死于宫颈癌。宫颈癌的发生和发展是一个复杂的生物学过程,涉及多种因素和步骤。目前已经证明,高危型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV),如 HPV16、18、33、52 和 58 型等,是其主要的致病因素。其中,HPV16、18是最常见最致癌的高危型HPV,导致超过75%的子宫颈癌病例。高危型HPV E6和E7基因的不受控表达,在功能上相当于p53和pRb基因突变,会导致细胞永生化、遗传不稳定、遗传突变的积累以及由此产生的恶性转化。E6和E7癌蛋白在被感染的宫颈上皮细胞中的表达所导致的细胞生物学功能的改变以及涉及到的具体的分子机制一直是科研人员研究的热点。干扰素诱导蛋白 16(Interferon-inducible protein16,IFI16)是 HIN-200(The Interferon(IFN)-inducible p200-protern)家族成员之一。IFI16 蛋白具有家族成员共有的结构基序,N末端的PYRIN结构域(PYRIN domain,PYD)以及C末端包含两个相对保守的约200个氨基酸的HIN结构域。PYD常见于细胞死亡相关蛋白,如热蛋白(PYRIN),凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase),也被称为PAAD/DAPIN结构域,已发现在IFI16的N末端存在PYD,表明IFI16可能在细胞凋亡调控过程中发挥关键作用。IFI16蛋白中的PYD是同型蛋白质-蛋白质相互作用的结构域,其允许IFI16与其他蛋白的相互作用,包括BRCAI、pRb、p53、E2F以及NF-K B等。HIN结构域含有两个联系的寡核苷酸/寡糖结合折叠(Oligonucleotide/oligosaccharide-binding folds,OB-folds),其允许IFI16结合单链或双链DNA。此外,在HIN结构域还含有pRb结合区域和p53结合区域。与其他家族成员相比,IFI16具有更加广泛的功能:1)IFI16可以作为双链DNA感受器,引起针对某些病原体或破碎细胞的免疫反应;2)参与损伤组织或肿瘤形成过程中的血管形成;3)作为促炎蛋白,在自身免疫系统疾病中发挥作用;4)参与细胞增殖、细胞凋亡、细胞衰老和细胞周期的调控。与此同时,IFI16与癌症发生相关的证据也正在积累。目前,已经发现了 IFI16在肝细胞癌、头颈部肿瘤、乳腺癌和口腔鳞状细胞癌等9种人类实体瘤中的作用;然而很少有研究报道IFI16与宫颈癌以及HPV感染的相关性。有研究表明,IFI16在乳腺癌中表达下调,其表达还与头颈部鳞状细胞癌(Head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)的等级呈显著负相关,并与HNSCC的生长、凋亡、血管生成和炎症密切相关。另外有研究表明,前列腺上皮细胞中IFI16基因的组蛋白去乙酰酶依赖性转录沉默有利于前列腺癌的发展。与IFI16在乳腺癌、HNSCC和前列腺癌中的抑癌作用相反,有研究人员在睾丸癌和化学抗性上皮卵巢癌组织中发现了 IFI16蛋白的表达明显上调,但目前并没有相关的功能和机制研究。此外,IFI16与p53之间的相互作用也持续得到研究人员的关注。有研究表明,IFI16可以在DNA损伤、电离辐射或者氧化应激等状态下激活p53的表达,影响p53下游靶蛋白的表达以及p53介导的细胞凋亡和周期调控,从而影响肿瘤的发生和发展。目前已经明确,高危型HPV E6蛋白主要通过影响p53的表达,调控p53介导的细胞周期和细胞凋亡,从而诱导宫颈癌的发生。有研究表明,在与E6配合的复合物中,细胞泛素连接酶E6-associated protei n(E6AP)靶向p53,对其进行泛素化和降解,从而导致HPV诱导的宫颈癌。E6以一种未知的机制作为E6AP强有力的激活剂发挥功能。尽管有研究表示E6AP的LxxLL基序可以与E6结合,引起构象变化,使E6能够与p53结合,但人们对肪蛋白与p53之间具体的作用机制仍然不甚清楚。第一部分:IFI16在宫颈癌组织中的表达水平及意义研究目的:研究IFI16在宫颈癌组织和其他肿瘤中的表达水平及其与临床病理特征的相关性分析。研究方法:1.使用GEPIA在线工具分析基于TCGA和GTEx数据库中9,736个肿瘤和8,587个正常样本的RNA测序表达数据,分析IFI16在泛肿瘤中的表达水平以及和预后的关系。检索PUBMED数据库中IFI16在各肿瘤中的研究现状。2.免疫组化检测:使用宫颈癌组织芯片进行免疫组织化学检测,检测宫颈癌和癌旁组织中IF