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关键词： 细胞生物学   普通微生物学   生命科学   生物科学   硕士研究生  

摘要： 生命科学学院成立于2003年,其前身是成立于1984年的生物系,1984年开始招收生物教育学专业学生,1998年开始招收细胞生物学硕士研究生。1999年生物系与原化学系合并组建化学与生命科学学院,2003年生命科学学院成立。学院是四川省生物学本科人才培养基地,为社会,特别是生物学基础教育领域培养了一大批优秀人才。学院现有教职工66名,具有博士学位教师34人,其中正高级职称教师12名,副高级职称教师25名,高

关键词： 葡萄籽原花青素   结肠癌   FoxM1   POU2F1  

摘要： 目的:探索葡萄籽原花青素(GSPs)对结肠癌细胞株SW480和SW620氧自由基(ROS)产生的影响,并在筛选出的受GSPs调控的基因中,探索调控ROS相关的基因,并进一步对调控ROS相关基因的生物学功能进行研究,阐述其调控机制,为结肠癌的诊疗提供有效的分子靶标与新的治疗手段。方法:首先,用GSPs处理结肠癌细胞,然后用DCFH-DA染色检测细胞内ROS产生情况,结合转录组测序结果筛选出受GSPs调控且调控ROS产生的靶基因,并通过荧光定量PCR及Western Blotting验证其表达。随后,我们利用靶基因特异性抑制剂抑制其表达,观察其细胞生物学功能的改变,验证靶基因对结肠癌细胞生物学特征的影响,如MTT测细胞增殖,流式检测细胞周期和凋亡,细胞划痕检测迁移能力及细胞克隆实验。进一步,我们利用软件预测靶基因上游调控转录因子,在验证其为GSPs调控基因后,通过siRNA干扰技术验证其对靶基因的调控作用。结果:在SW480和SW620两细胞中,GSPs处理结肠癌细胞后可使胞内ROS生成增加。在前期筛查的GSPs调控基因中,我们发现FoxM1的表达与ROS产生存在负相关。通过FoxM1特异性抑制剂下调该基因表达后,可导致ROS生成显著增加,此结果与GSPs处理后观察的现象一致。细胞生物学特征表现为:FoxM1表达抑制后可使细胞增殖下降,细胞周期发生S期阻滞,细胞凋亡增加,细胞迁移和克隆形成能力都受到抑制。利用软件预测FoxM1上游调控转录因子POU2F1,siRNA干扰其表达后,可引起FoxM1的转录水平下降,同时该基因也为GSPs下调基因。结论:(1)FoxM1为GSPs调控的靶基因,其表达受到GSPs的负调控,且与ROS产生存在负反馈,FoxM1的特异下调使结肠癌两细胞生物学特征明显受到影响;(2)机制研究显示GSPs通过抑制POU2F1的表达,进而抑制FoxM1的转录。

关键词： 肝癌   GTSF1   生物学特性  

摘要： 目的:探讨肝癌组织中配子体特异性因子1(GTSF1)的表达情况及GTSF1对肝癌细胞生长的影响.方法:选择2016年1月-2018年12月收治的4例肝癌患者组织标本及其癌旁组织标本,RT-PCR检测肝癌组织、癌旁组织中GTSF1 mRNA表达,用GTSF1-siRNA、NC-siRNA转染HepG2肝癌细胞,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.结果:癌旁组织中GTSF1 mRNA表达显著低于肝癌组织(P<0.05);GTSF1 siRNA组细胞增殖显著低于NC-siRNA组及对照组(P<0.05);细胞凋亡GTSF1 siRNA组显著高于NC-siRNA组及对照组(P<0.01).结论:肝癌组织中GTSF1表达升高,GTSF1能够促进肝癌细胞凋亡、抑制细胞增殖.

关键词： OSR1   结肠癌   增殖   迁移   侵袭  

摘要： 目的探讨过表达OSR1基因(odd-skipped related transciption factor1)对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭、克隆形成能力和诱导细胞周期阻滞能力的影响及其机制研究。方法将病毒重组载体pEZ-Lv105-OSR1及病毒空载体pEZ-Lv105转染HCT-8、LoVo结肠癌细胞,应用Western blot检测OSR1的蛋白表达水平.检测上调OSR1的表达后结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移、克隆形成、诱导细胞周期阻滞等能力的变化。Western blot检测N-cadherin、E-cadherin、Vimentin、p-NF-KB、NF-KB蛋白、p-IκBα蛋白表达。结果pEZ-Lv105-OSR1转染组OSR1 mRNA、蛋白表达量明显高于pEZ-Lv105对照组。与pEZ-Lv105对照组相比,pEZ-Lv105-OSR1转染组HCT-8、LoVo结肠癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显减弱且诱导细胞周期阻滞。Western blot实验显示过表达OSR1可促进HCT-8、LoVo结肠癌细胞E-cadherin总蛋白表达,而抑制N-cadherin、Vimentin、磷酸化NF-KB p65、p-IκBα蛋白表达。未磷酸化NF-KB p65蛋白水平没有变化。结论过表达OSR1基因通过NF-KB通路抑制结肠癌细胞的增殖,迁移、侵袭、克隆形成能力和诱导细胞周期阻滞。

关键词： 天冬酰胺酶1   增殖   宫颈癌   凋亡   RNAi  

摘要： 背景和目的宫颈癌的病理发展被认为是一个复杂的发病过程,涉及一系列抑癌基因和致癌基因的失调。近20年来,我国宫颈癌发病率逐年升高,发病年龄也趋于年轻化,现已成为继乳腺癌后我国女性第2大常见恶性肿瘤。宫颈癌中最常见的病理类型是鳞癌,大约占所有病例的75%。尽管手术和放、化疗可以增加宫颈癌的治疗效果,但由于术后复发和耐药性等原因,目前宫颈癌死亡率依然很高。而宫颈癌疫苗主要用于一级预防,且不能覆盖所有人乳头瘤病毒型别。因此,寻找一种新的宫颈癌治疗手段势在必行。近些年来,随着“精准医疗”的提出,人们在宫颈癌的研究方面正致力于寻找新的肿瘤标志物用于早期诊断和靶向治疗。基因治疗一般是针对导致病症的源头即异常基因为目标的一类生物医学诊治措施。它是通过向靶细胞中导入正常的基因或者抑制靶细胞中异常基因的表达,从而达到治疗疾病的效果。目前我国已经上市的4种基因治疗药物中有2种是治疗肿瘤的,包括:重组人p53腺病毒注射液和H101基因工程腺病毒注射液。它们的用法主要是瘤体内注射辅助放疗。新近研究发现,天冬酰胺酶1(ASRGL1)是一个新的候选肿瘤标志物,其在乳腺癌、结肠癌、胰腺癌和卵巢癌中高表达,在子宫内膜癌中低表达或缺失。但在宫颈癌中,ASRGL1基因的表达和作用情况却没有相关报道。因此,我们运用免疫组化检测ASRGL1蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达情况,运用RT-PCR检测ASRGL1 mRNA在宫颈癌细胞系中的表达情况。接着采用慢病毒介导的ASRGL1-shRNA感染宫颈癌SiHa细胞,使基因沉默,分析基因下调前后SiHa细胞生物学活性变化,鉴定ASRGL1基因的功能,以此评估其是否是宫颈癌的致癌基因,为宫颈癌的基因治疗提供理论基础。实验方法1.采用免疫组化方法检测32例宫颈鳞癌及32例正常宫颈组织中ASRGL1蛋白表达情况,并分析ASRGL1基因与宫颈癌的相关性。2.采用RT-PCR技术检测HeLa和SiHa两株细胞系中ASRGL1 mRNA表达情况,选择其中表达量高的一株进入后续试验。3.构建和鉴定ASRGL1干扰慢病毒表达载体。4.利用ASRGL1干扰慢病毒表达载体构建ASRGL1基因下调的SiHa细胞,通过流式细胞技术检测细胞周期、凋亡,Celigo高通量细胞分析仪记录细胞增殖,检测感染前后SiHa细胞生物学活性。5.利用Western blot检测慢病毒感染SiHa细胞前后ASRGL1蛋白、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白A(cyclin A)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)以及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达情况。6.采用统计软件SPSS21.0对实验数据进行统计分析,数值采用均数±标准差呈现,其中宫颈鳞癌组与正常宫颈组的免疫组化分析比较采用卡方检验,慢病毒感染组与对照组差异用t检验进行比较。以P<0.05认为有统计学差异。结果1.免疫组化检测宫颈鳞癌组织中ASRGL1蛋白表达高于正常宫颈组织(P< 0.01)。***1 mRNA在两株细胞中均表达,但人宫颈鳞癌细胞系SiHa中的表达量高于宫颈腺癌HeLa细胞系。3.阳性克隆的PCR鉴定结果显示ASRGL1 shRNA慢病毒质粒连接构建正确。荧光显微镜观察细胞感染效率达80%以上,Western blot及RT-PCR均显示有明显敲减效应,证实成功构建ASRGL1基因慢病毒表达载体。4.利用构建成功的ASRGL1-shRNA慢病毒载体感染SiHa细胞,发现细胞的生物学活性受到抑制。5.慢病毒介导ASRGL1基因下调后,使得CDK2、Cyclin A、Bcl-2表达下降,Bax表达升高。结论***1在宫颈鳞癌组织中的表达高于正常宫颈组织。2.慢病毒介导的ASRGL1-shRNA可以靶向敲减宫颈鳞癌SiHa细胞系中内源ASRGL1表达。3.慢病毒敲减ASRGL1基因后能明显促进SiHa细胞凋亡,抑制其增殖,阻滞细胞于S期,进一步证明ASRGL1是宫颈癌的一个候选癌基因。

关键词： 医学院校   教材   细胞生物学   人体细胞学  

ISBN: (纸本)9787030595874

摘要： 既包含医学细胞生物学的基本理论，也反映近年来细胞生物学研究领域的最新研究进展，能满足学生毕业后执业医师资格考试及硕士研究生入学考试的需求.内容及案例分析具条理性和启发性；视窗的内容简明易懂。每章介绍基本理论前提出相关案例，然后介绍基本理论知识，然后根据理论知识进行案例分析。适应当前高等医药院校教育教学现状。

关键词： 食管癌   FMNL2   预后  

摘要： 背景:食管癌是我国常见消化系统恶性肿瘤之一,根据病理类型可以分为食管鳞癌和食管腺癌,在我国食管鳞癌占到90%以上。虽然针对食管癌的治疗技术不断提高,但是早期食管癌发现困难,术后易复发转移的特点仍然是影响肿瘤病人预后的关键因素。因此寻找食管癌疾病进程相关的分子标记物,探究食管癌肿瘤进程相关的分子作用机制,寻找可能的分子靶向药是当前食管癌研究的热点问题。同源形成素样蛋白2(Formin-like 2,FMNL2)属于Formin家族成员一员,与肌动蛋白的生物学功能相关。目前许多研究发现FMNL2在多种恶性肿瘤组织与细胞中异常表达,能够作为促癌因子参与恶性肿瘤的疾病进程。目的:探究FMNL2在食管鳞癌中的表达水平,结合其患者的临床病理特征和预后,分析其表达水平与食管鳞癌患者预后的关系,结合体外细胞学实验研究FMNL2在细胞水平的生物学功能。方法:使用免疫组化技术检测50例食管癌患者样本中FMNL2的表达;Kapaln-Meier生存分析探究FMNL2的表达水平与食管鳞癌患者临床预后的相关性,Cox回归模型验证FMNL2的表达水平在临床预后中的价值;使用实时荧光定量PCR和蛋白印记技术检测食管鳞癌细胞中FMNL2的表达水平;使用小干扰RNA(small slience RNA,si RNA)沉默FMNL2的表达,构建FMNL2转染沉默模型;使用CCK8增殖实验沉默FMNL2对细胞增殖的影响;使用Transwell小室实验探究沉默FMNL2对食管鳞癌细胞侵袭与迁移能力的影响。结果:FMNL2在食管鳞癌组织中表达水平明显高于其所对应的癌旁组织;卡方检验结果表明FMNL2的表达水平与肿瘤的TNM分期相关;Kaplan-Meier生存分析结果提示与高表达FMNL2组相比,低FMNL2组的生存时间(Overall Survival,OS)和无病生存时间(Disease-free Survival,DFS)都明显增加;COX回归单因素和多因素分析结果显示FMNL2表达水平是患者OS的独立的危险因素(p<0.05);PCR和蛋白印记实验发现FMNL2的表达水平在食管癌细胞株中明显高于正常食管上皮细胞Het1A;敲低FMNL2的表达能够有效抑制食管鳞癌细胞株的细胞增殖活性,迁移和侵袭的能力(p<0.05)。结论:FMNL2在食管鳞癌组织和细胞中异常高表达,其表达水平与临床TNM分期相关,FMNL2表达水平越高提示患者预后越差。体外细胞学实验表明FMNL2能够促进食管鳞癌细胞的增殖,侵袭与迁移能力,将来有希望成为食管鳞癌的新的生物标志物和分子靶标。

关键词： 鼻咽癌   SDF2L1   过表达   细胞增殖   迁移与侵袭  

摘要： 目的:鼻咽癌是国内高发的恶性肿瘤之一,尤其是在两广地区较为常见,严重影响了我国人民的健康生活水平。此外,由于鼻咽癌的发病部位特殊,较为隐匿,给鼻咽癌的早期诊断与治疗造成困难。近些年,大量研究表明抑癌基因的失活与鼻咽癌的发生、发展密切相关。本课题组前期的研究首次发现SDF2L1基因在鼻咽癌组织中的表达低于鼻咽癌组织。SDF2L1沉默表达基因后促进鼻咽癌细胞的迁移与侵袭。SDF2L1低表达导致鼻咽癌CNE1细胞株上皮-间质转化(EMT)有关的E-钙粘蛋白及基质金属蛋白酶-9表达改变,提示SDF2L1基因可能参与了鼻咽癌的发生、发展,且可能与鼻咽癌细胞的侵润、远处转移有关。然而并没有同时进行SDF2L1沉默表达和过表达后对不同的鼻咽癌细胞株生物学功能的影响研究,对于SDF2L1低表达的产生机制、所调控下游的靶基因、参与的信号通路、对鼻咽癌患者的临床预后影响尚不清楚,有待课题组进一步深入研究。本实验的目的是研究SDF2L1基因过表达与沉默表达对鼻咽癌细胞生物学行为的影响。方法:1.应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测人正常鼻咽部上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞株HONE1、HK1、CNE2和5-8F细胞中SDF2L1 mRNA的表达水平。2.构建分别含SDF2L1基因过表达片段、SDF2L1基因干扰片段及其相应的空载片段的慢病毒载体并转染鼻咽癌细胞株HONE1和5-8F,用嘌呤霉素筛选稳定耐药株。其中将转染SDF2L1基因过表达及干扰片段的细胞作为实验组,转染空载片段的细胞作为空载对照组,未经转染的HONE1和5-8F细胞株作为空白对照组。转染72h后,在倒置荧光相差显微镜下进行观察、拍照并计算转染效率。通过qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)分别测定各组细胞中SDF2L1的mRNA和蛋白的相对表达量。3.分别用划痕实验和Transwell迁移实验以及Transwell侵袭实验研究SDF2L1过表达及沉默表达对各组细胞迁移及侵袭能力的影响。4.通过平板克隆形成实验、细胞增殖实验(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测各组细胞的生长、增殖能力。结果:***-PCR实验结果显示:SDF2L1 mRNA在HONE1和5-8F细胞中的相对表达量均低于NP69细胞(P值分别为0.0062,0.0351),差异均具有统计学意义;SDF2L1 mRNA在CNE2细胞中的相对表达量与NP69比较,差异无统计学意义(P>0.05);SDF2L1 mRNA在HK1细胞中的相对表达量高于NP69,差异有统计学意义(P<0.05)。***-PCR和WB验证SDF2L1沉默和过表达结果显示:用携带SDF2L1基因过表达片段的慢病毒载体进行稳定转染得到SDF2L1过表达的HONE1和5-8F实验组的SDF2L1 mRNA及蛋白的相对表达量均明显高于其空载对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。用携带SDF2L1基因干扰片段的慢病毒载体进行稳定转染得到的SDF2L1沉默表达实验组的SDF2L1 mRNA及蛋白的相对表达量均明显低于其空载对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。3.划痕实验结果显示,SDF2L1过表达的鼻咽癌细胞与其空载对照组和空白对照组相比,其划痕愈合率均明显减小,差异均具有统计学意义(P<0.05);SDF2L1沉默表达的鼻咽癌细胞与其空载对照组和空白对照组相比,其划痕愈合率明显增大,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Transwell迁移和Transwell侵袭实验结果显示,SDF2L1过表达的鼻咽癌细胞与其空载对照组和空白对照组相比,其穿过膜细胞数明显下降,其侵袭迁移能力明显受到抑制,差异均有统计学意义(P<0.05);SDF2L1沉默表达的鼻咽癌细胞与其空载对照组和空白对照组相比,其穿过膜细胞数明显增多,其迁移与侵袭能力明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。4.细胞克隆形成实验显示,SDF2L1过表达的鼻咽癌细胞生长速度较慢,形成的克隆较小,且其克隆形成率明显低于空载对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);SDF2L1沉默表达的鼻咽癌细胞与其空载对照组和空白对照组比较,其克隆形成率明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。CCK-8实验结果显示:各组细胞0h测定的OD值差异无统计学意义(P>0.05),从第24h开始,SDF2L1过表达的各组细胞各时间点OD值均明显低于其空载对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);SDF2L1沉默表达组各时间点OD值均明显高于其空载对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P<

关键词： 微视频   医学细胞生物学   实验教学  

摘要： 实验教学是"医学细胞生物学"课程中的重要环节.本文阐述微视频在医学细胞生物学实验教学中的应用实践,并在此基础上探讨其在实验教学中的重要意义.

关键词： 胃癌   PLIN2   活性氧   铁死亡   异常脂代谢  

摘要： 背景:任何癌症的发生和发展都与细胞的增殖和凋亡有关,只有抑制肿瘤细胞的增殖和促进其凋亡,才能有利于肿瘤的治疗。从流行病学角度来说,胃癌是全世界发病率很高的肿瘤之一,大多数胃癌患者发现已经是晚期,而且临床治疗效果不佳。因此,早期发现和诊断就显得尤为重要了。肥胖是导致多种肿瘤发生的重要因素之一,这一观点已被公众所接受。一些研究表明,胃癌与异常脂质代谢相关,但具体机制研究较少。PLIN2,全称perilipin2,是一种脂肪分化相关蛋白,存在于多种组织和细胞中,主要与磷脂一起参与细胞中脂滴的贮存。有研究表明PLIN2在人胃癌的组织中的表达水平明显高于癌旁组织,PLIN2的表达水平也与胃癌的分期和分型相关,但PLIN2在人胃癌细胞中的具体生物学功能和机制尚未有研究。细胞铁死亡是近年来研究的热点,它实质是一种细胞内脂质过氧化应激反应,越来越多的研究表明,铁死亡在癌症的发生和发展中发挥重要的作用,但铁死亡与胃癌的相关性研究较少。PLIN2是否参与铁死亡在胃癌中的作用目前也尚未有研究。而PLIN2能否作为一种生物标志物和药物治疗的靶点来诊断和治疗胃癌尚不明确,因此,研究PLIN2对胃癌的发病机制就至关重要了。本文研究PLIN2基因及蛋白与人胃癌细胞系SGC7901和MGC803生物学功能的关系及相关机制,并解释脂质代谢紊乱导致胃癌的机理,推测PLIN2可能是诊断和治疗胃癌的潜在生物学标志物。本研究共分为四部分:第一部分高表达和低表达PLIN2在胃癌细胞株SGC7901和MGC803的建立及对细胞功能的影响方法:1、高表达和低表达PLIN2质粒载体的构建。2、分别将高表达和低表达PLIN2质粒载体转染至胃癌SGC7901和MGC803细胞系。3、分别用Rt-q PCR和免疫印迹验证转染后的胃癌细胞SGC7901和MGC803细胞中PLIN2的表达量。4、分别用流式细胞仪、CCK8、克隆集落、荧光显微镜原位细胞形态检测、ROS的方法对胃癌细胞系SGC7901和MGC803的增殖、凋亡、存活率和活性氧功能进行检测。结果:1、成功构建了高表达和低表达PLIN2质粒载体。2、转染高表达和低表达PLIN2后成功构建了胃癌稳转细胞株。3、Rt-q PCR和免疫印迹验证结果显示转染过表达PLIN2基因的细胞PLIN2的表达含量明显高于对照组,转染低表达PLIN2基因的细胞中PLIN2表达含量明显低于对照组。4、细胞功能结果显示与对照组相比,过表达基因PLIN2的细胞增殖能力,存活率明显增强,而凋亡能力和活性氧的含量明显减低,相反,低表达基因PLIN2的细胞增殖能力,存活率明显降低,而凋亡能力和活性氧的含量明显增高。第二部分裸鼠皮下人胃癌细胞肿瘤模型的构建及裸鼠人胃癌移植瘤组织PLIN2表达水平的验证方法:1、分别将人胃癌细胞过表达和低表达PLIN2基因稳转细胞SGC7901注射到五周大裸鼠nude mice(BALB/c nu/nu)皮下,定期测量肿瘤体积,裸鼠体长和体重,四周后处理裸鼠取出移植瘤组织并比较瘤重量。2、分别用免疫组化、免疫印迹、Rt-q PCR和HE染色的方法来检测裸鼠人胃癌移植瘤组织中PLIN2的表达水平。结果:1、成功构建裸鼠皮下人胃癌细胞肿瘤模型。过表达PLIN2细胞的裸鼠肿瘤体积和重量,裸鼠体重明显高于对照组;低表达PLIN2细胞的裸鼠肿瘤体积和重量,裸鼠体重明显低于对照组。2、过表达基因PLIN2裸鼠人胃癌移植瘤组织中的PLIN2水平明显高于对照组,低表达基因PLIN2裸鼠人胃癌移植瘤组织中的PLIN2水平明显低于对照组。第三部分RNA-seq对裸鼠人胃癌移植瘤组织测序及差异基因的生物信息学分析方法:1、将三组异种移植瘤组织送往北京华大基因组研究所BGI,采用磁珠法提取总RNA,在BGI seq-500系统上进行RNA序列分析。2、分别进行基因定量分析、差异基因分析、Venn分析、聚类分析、GO功能、KEGG Pathway、蛋白与蛋白互作等生物信息学分析。结果:1、比较每两组样品中由PLIN2基因调控的差异基因的数量,火山图显示NC与Ov PLIN2比较共检测到1138个差异基因,其中,上调基因120个,下调基因1018个;NC与Sh PLIN2共检测到627个差异基因,其中,上调基因282个,下调基因345个;Sh PLIN2与Ov PLIN2共检测到1516个差异基因,其中,上调基因1184个,下调基因332个。2、Venn图展示了基因在NC VS Ov PLIN2,NC VS Sh PLIN2 and Sh PLIN2 VS Ov PLIN2共同的差异基因为86个。3、聚类分析展示了三组样本在PLIN2基因调控下的差异基因的表达。4、GO功能分析共富集到20个GO功能中最明显的是脂质代谢功能。5、KEGG pathway分