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关键词： Ubiquitin   Ubiquitin fusion proteins   Algae   Endosymbiosis   Plastid evolution  

摘要： BackgroundThe process of gene fusion involves the formation of a single chimeric gene from multiple complete or partial gene sequences. Gene fusion is recognized as an important mechanism by which genes and their protein products can evolve new functions. The presence-absence of gene fusions can also be useful characters for inferring evolutionary relationships between *** we show that the nuclear genomes of two unrelated single-celled algae, the cryptophyte Guillardia theta and the chlorarachniophyte Bigelowiella natans, possess an unexpected diversity of genes for ubiquitin fusion proteins, including novel arrangements in which ubiquitin occupies amino-terminal, carboxyl-terminal, and internal positions relative to its fusion partners. We explore the evolution of the ubiquitin multigene family in both genomes, and show that both algae possess a gene encoding an ubiquitin-nickel superoxide dismutase fusion protein (Ubiq-NiSOD) that is widely but patchily distributed across the eukaryotic tree of life - almost exclusively in *** results suggest that ubiquitin fusion proteins are more common than currently appreciated;because of its small size, the ubiquitin coding region can go undetected when gene predictions are carried out in an automated fashion. The punctate distribution of the Ubiq-NiSOD fusion across the eukaryotic tree could serve as a beacon for the spread of plastids from eukaryote to eukaryote by secondary and/or tertiary endosymbiosis.

关键词： 纳米细菌   人关节软骨细胞   凋亡   流式细胞仪  

摘要： 目的观察纳米细菌损伤人膝关节软骨细胞的方式和特点。方法正常人膝关节软骨细胞分为高浓度组、中浓度组、低浓度组和对照组,分别加入吸光度值为0.280、0.035、0.002、0的纳米细菌液进行攻击,加入纳米细菌液24、48h时光镜下观察4组膝关节软骨细胞形态学变化及存活率,免疫荧光染色法观察中浓度组加入纳米细菌液0、1、2、4、8h时纳米细菌与软骨细胞的位置关系,流式细胞仪检测加入纳米细菌液24h时4组软骨细胞凋亡率。结果高浓度组加入纳米细菌液24h、中浓度组加入纳米细菌液48h,光镜下大部分软骨细胞坏死甚至未见完整细胞形态;加入纳米细菌液24、48h时,高浓度组软骨细胞存活率吸光度值(0.413±0.046、0.345±0.125)低于中浓度组(0.496±0.039、0.708±0.043)、低浓度组(0.539±0.047、1.018±0.048)和对照组(0.577±0.045、1.133±0.127)(P<0.05),中浓度组低于低浓度组和对照组(P<0.05),低浓度组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);纳米细菌可在较短时间内侵入至软骨细胞中,且随时间延长软骨细胞内纳米细菌荧光颗粒数目增多;加入纳米细菌液24h,高、中、低浓度组和对照组软骨细胞凋亡率[(1.541±0.046)%、(1.546±0.039)%、(1.539±0.047)%、(1.527±0.045)%]比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论纳米细菌可损伤人关节软骨细胞,短时间内(24h)被攻击的软骨细胞未发现明显凋亡,高浓度纳米细菌可造成人关节软骨细胞更严重损伤。

关键词： 纳米羟基磷灰石/聚酰胺66   骨髓间质干细胞   生物相容性   生物活性   成骨分化   干细胞   羟基磷灰石类   尼龙   细胞生物学   组织工程  

摘要： 背景:聚多巴胺仿生法被证实可在多种不同金属表面制备羟基磷灰石涂层,但目前缺乏利用其在人工合成材料表面制备羟基磷灰石涂层的研究。目的:利用聚多巴胺仿生法在纳米羟基磷灰石/聚酰胺66表面制备羟基磷灰石涂层,评价其对骨髓间质干细胞生物学的影响。方法:采用聚多巴胺仿生法在纳米羟基磷灰石/聚酰胺66表面制备羟基磷灰石涂层,获得羟基磷灰石-聚多巴胺-纳米羟基磷灰石/聚酰胺66(hydroxyapatite-polydopamine-nano-hydroxyapatite/polyamide66,HA-PDA-HA/P66)材料,通过X射线光电子能谱分析和扫描电镜检测羟基磷灰石涂层,并检测材料的表面粗糙度及亲水性。将骨髓间质干细胞C3H10T1/2分别与纳米羟基磷灰石/聚酰胺66、聚多巴胺-纳米羟基磷灰石/聚酰胺66、HA-PDA-HA/P66材料共培养,培养6,12h后,采用CCK-8法检测细胞黏附情况;培养1d,通过扫描电镜观察细胞形态;培养1,3 d,DAPI染色检测细胞增殖;成骨诱导培养7,10 d,检测细胞碱性磷酸酶活性;成骨诱导培养14 d,茜素红染色检测细胞矿化能力。结果与结论:(1)X射线衍射和扫描电镜证实成功制备了羟基磷灰石涂层,且羟基磷灰石涂层明显提高了材料亲水性和表面粗糙度;(2)培养6,12 h,HA-PDA-HA/P66材料表面黏附的细胞数明显多于其余两种材料(P <0.05);培养1 d,在HA-PDA-HA/P66及聚多巴胺-纳米羟基磷灰石/聚酰胺66材料上的细胞呈多边形,且有较多伪足;培养1,3 d,HA-PDA-HA/P66材料表面的细胞增殖能力高于其余两种材料(P <0.05);(4)成骨诱导7,10 d,HA-PDA-HA/P66材料表面细胞内碱性磷酸酶活性高于其余两种材料(P <0.05);成骨诱导14 d,HA-PDA-HA/P66材料周围钙结节形成多于其余两种材料;(5)结果表明,利用聚多巴胺仿生法可在纳米羟基磷灰石/聚酰胺66表面制备羟基磷灰石涂层,且涂层具有良好的生物活性与生物相容性。

关键词： 护理专科生   现状   教学  

摘要： 护理专科毕业生将是日后护理岗位的中坚力量,其学习投入势必影响专业知识与技能的掌握,进而关系到护理行业的服务质量。专科学生的特点主要是:普遍存在入校起点低,大多均为文科生且未参加高考,在学习过程中的活力较低,积极性参与度低,提问少,基础薄弱,自控能力和主动学习的意识缺乏。不想学,不会学,自控能力和荣誉感缺乏是大部分学生存在的问题。学生需要在一系列强化训练和教师的引导下,帮助其理解并认清事物之间的联系,缩短认识时间,积累经验,更重要的是提高学习兴趣,认识到学科学习对其就业的重要性,提高系统思维能力,养成自己的学习习惯。

关键词： 肺癌   细胞生物学特性   E2F3细胞  

摘要： [目的]：\n 探讨E2F3在肺癌中的表达及其对细胞生物学的影响，分析其高表达对患者预后的影响及探讨初步的作用机制，为肺癌的诊断、预后提供潜在的靶向标志物。\n [方法]：\n 第一部分:1、利用生物信息数据库Oncomine、FireBrowse分析miR-3691靶蛋白E2F3mRNA在肺癌中的表达，并比较在不同肺癌亚型中的表达差异。2、收集组织蜡块制成包含8种常见肿瘤的组织芯片及肺癌组织芯片，免疫组织化学染色分析E2F3蛋白在各肿瘤及相应癌旁组织中的表达。3、统计学方法分析E2F3蛋白高表达与患者各临床病理特征的相关性。\n 第二部分:1、转染siRNA干扰E2F3在非小细胞肺癌细胞株中的表达。2、使用CCK-8实验检测转染E2F3siRNA对人肺腺癌细胞株A549、人肺鳞状细胞癌细胞株NCI-H226增殖能力的影响。3、WesternBlot法检测抑制E2F3表达后细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达量变化。4、划痕愈合实验检测转染E2F3siRNA表达对A549和NCI-H226细胞迁移能力的影响。5、Transwell实验检测下调E2F3表达对A549和NCI-H226细胞侵袭能力的影响。\n 第三部分:1、通过Kaplan-MeierPlotter数据库以基因的表达为变量进行生存率的组间比较，探究E2F3表达对肺癌患者生存率的影响。2、运用Exiqon网站进行E2F3上游miRNA的预测，运用OncomiR网站分析E2F3上游miRNA在肺腺癌和肺鳞状细胞癌中的表达情况及对生存率的影响。3、蛋白互作分析使用GeneMANIA，PANTHER数据库用于与E2F3存在相互作用的基因的生物通路富集分析。\n [结果]：\n 第一部分:1、在Oncomine数据库中发现，共有19个研究涉及E2F3mRNA在肺癌组织和正常组织中的表达。在具有统计学差异(P≤0.01)的15项结果中E2F3mRNA在肺癌中的表达均高于正常组织。TCGA数据可视化工具FireBrowse分析结果显示与正常组织相比，E2F3mRNA在肿瘤组织中高表达，其中肺腺癌的差异表达倍数为2.58，肺鳞状细胞癌的差异表达倍数为2.32。2、多肿瘤芯片结果显示，E2F3在肺癌及癌旁正常组织中的表达存在显著差异(P=0.049)，其余肿瘤IHC结果没有统计学差异。肺癌芯片IHC结果显示，E2F3在肺腺癌和肺鳞癌组织中的表达均显著高于正常癌旁组织。3、E2F3差异表达水平与淋巴结转移显著相关(P=0.003)，与患者性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期没有相关性。\n 第二部分:1、设计合成的3对E2F3siRNA序列均能抑制A549及NCI-H226细胞中E2F3的表达，而si-E2F3-003对E2F3的抑制效果最佳。2、CCK-8结果显示，与ScramblesiRNA组比较，转染E2F3siRNA后，细胞的增殖能力被抑制，且在A549细胞中抑制效果更明显。3、抑制E2F3显著降低细胞中Bcl-2蛋白的表达，然而，Bax和Caspase-3的表达量上升。4、划痕愈合实验显示，转染E2F3siRNA后，两株细胞的迁移距离明显缩短，划痕愈合速度显著变慢。5、Transwell结果显示，降低细胞中E2F3表达后，穿过聚碳酯膜的细胞数目明显降低，表明细胞侵袭能力的减弱。\n 第三部分:1、Kaplan-MeierPlotter显示，高表达E2F3mRNA的患者的生存率明显高于低表达E2F3mRNA的患者的生存率(P=0.019)。2、Exiqon共记录10个被证实的E2F3上游miRNAs，OncomiR生存分析结果显示E2F3上游miRNA在肺鳞状细胞癌和肺腺癌中低表达与不良预后相关。3、GeneMANIA分析显示E2F3共与15个蛋白质存在相互作用，其中大多数与肿瘤的不良预后相关。PANTHER富集分析揭示这些基因共参与了包含细胞增殖、代谢的6个生物过程。\n [结论]：\n E2F3在肺癌组织中的表达高于癌旁组织，且E2F3在肺癌组织高表达与患者的淋巴结转移相关;siRNA靶向干扰E2F3表达后，影响肺癌细胞的增殖迁移和凋亡。因此，E2F3可能通过诱导细胞的异质化而在肺癌的发生发展中起重要作用并与患者的不良预后相关。

关键词： 人脐带间充质干细胞   长期培养   基因稳定性   诱导分化  

摘要： 该课题研究长期体外传代培养对人脐带间充质干细胞重要生物学属性的影响。采用组织块法分离人脐带间充质干细胞,体外反复传代培养后比较第5、10、20代细胞的主要生物学属性:采用细胞计数法与流式细胞仪检测不同代次细胞增殖活性和表面免疫标志物;染色体常规核型分析和微阵列分析检测其基因稳定性;成脂、成骨诱导分化检测其多向分化潜能;定量RT-PCR检测端粒酶反转录基因hTERT的表达; SA-β-gal活性确定细胞老化状态。第5、10、20代脐带间充质干细胞呈现相同的增殖曲线,各代次干细胞的增殖速率无显著性差异。不同培养代次的脐带间充质干细胞表面均呈现CD105、CD90、CD44、CD73高表达, CD19、CD34、CD45及HLA-DR不表达或低表达。基因稳定性分析证实三个代次干细胞均为正常二倍体核型,染色体基因组未发生基因拷贝数缺失、重复和大片段纯合子现象。成脂和成骨分化潜能以及hTERT表达均未见显著性差异。SA-β-gal活性检测显示,随培养代次的增加,脐带间充质干细胞开始呈现衰老征象,尤以第20代明显。体外反复传代长期培养对人脐带间充质干细胞的基本生物学属性、基因稳定性及其多向分化潜能均无显著性影响。过度长期培养有可能导致干细胞老化,活性降低。

关键词： 医学细胞生物学   三明治教学法   自主学习能力   课堂教学  

摘要： 医学细胞生物学是医学院校的基础课程,是学生学习其他基础课及专业课的基础。文章以精神医学本科专业为研究对象,根据课程知识体系选取部分内容开展三明治教学法。学生成绩及问卷调查结果显示,采用三明治教学法有助于激发学生的学习兴趣,加强学生的自主学习能力,提升课堂教学效果。

关键词： 细胞生物学   综合能力   研究型教学   本科教学  

摘要： 日新月异的医疗环境对医学院校本科生的综合能力提出了更高的要求,研究型教学注重学生知识、能力和素养的全面发展,是培养综合型人才便捷有效的方式之一。文章从改进课堂教学方法、提升自主学习能力、探究式实验教学、课外科研活动以及教学效果评价等方面,对研究型教学的实践进行了总结,旨在推进研究型教学在本科生综合能力培养中的实践。

关键词： HU-308   糖皮质激素   MC3T3-E1   增殖  

摘要： 目的:观察HU-308对高浓度糖皮质激素作用下成骨细胞生物学性能的影响。方法:将MC3T3-E1细胞在高浓度糖皮质激素(10-6 mmol/L)进行培养,按HU-308浓度分为0(对照组)、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L(实验组)6组,培养1、4、7d检测细胞增殖及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、成骨基因特异性转录因子Runt相关基因2(runt related transcription factor-2,RUNX2)及护骨素(osteoprotegerin,OPG)mRNA的表达,培养24h观察细胞骨架的形态变化。结果:细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)结果显示,对照组与实验组相比差异均有统计学意义(P<0.05),培育4d,各实验组比较,药物浓度增加对细胞增殖的促进作用越明显(P<0.05)。ALP活性检测结果显示,实验组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。细胞骨架染色随HU-308浓度的增高细胞铺展面积增大且内部框架结构更加清晰。低浓度组Runx2、OPG mRNA表达水平明显上调(P<0.05);而高浓度组Runx2、OPG mRNA的表达受到抑制(P<0.05)。结论:在高浓度糖皮质激素作用下,HU-308可促进MC3T3-E1细胞的粘附、伸展与增殖,且低浓度HU-308可促进其Runx2、OPG mRNA的表达。

关键词： 晚期氧化蛋白产物   妊娠滋养细胞   增殖能力   侵袭能力   分化能力  

摘要： 目的 观察晚期氧化蛋白产物(AOPP)对妊娠滋养细胞(HTR8/SVneo)功能的影响。方法 体外培养HTR8/SVneo 细胞株,用次氯酸(HClO)氧化鼠白蛋白(MSA)体外制备AOPPMSA,将HTR8/SVneo 滋养细胞与不同浓度(50 μg/ml 组、100 μg/ml 组或200 μg/ml 组)的AOPPMSA共同培养。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测滋养细胞的增殖能力,以平均吸光度(A)值表示;侵袭小室检测滋养细胞侵袭能力,以穿膜细胞数表示;检测上清液中滋养细胞分泌的β-HCG水平评价滋养细胞分化能力;Hoechest33258 染色检测滋养细胞凋亡。采用单因素方差分析比较不同浓度AOPP 下,滋养细胞的增殖能力、侵袭能力、细胞分泌β-HCG、细胞凋亡数的差异。结果 与对照组比较,AOPP 浓度为50 μg/ml 时,对HTR8SVneo 滋养细胞增殖、侵袭、分化能力及凋亡影响不明显(P > 0.05);AOPP 浓度为100 μg/ml 和200 μg/ml 时,AOPP 明显抑制滋养细胞增殖、侵袭和分化能力,并促进滋养细胞凋亡(P < 0.05)。结论 AOPP 可以抑制滋养细胞的增殖、侵袭、分化能力及诱导滋养细胞凋亡。降低血浆中AOPP 水平可能有利于改善滋养细胞生物学功能。