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关键词： mir-151a-5p   肺腺癌   上皮间质转化   化疗敏感性  

摘要： 目的通过下调mir-151a-5p在肺癌A549细胞中的表达,研究其对细胞增殖、迁移、侵袭能力和化疗敏感性的影响。方法应用RT-qPCR检测mir-151a-5P在肺腺癌组织和肺腺癌细胞株以及转染inhibitor后的表达情况。通过CCK-8、Transwell、克隆形成实验分别检测转染inhibitor后A549细胞的增殖、迁移、侵袭能力以及克隆形成能力的变化。Western blot检测转染后EMT相关蛋白的表达。CCK-8、流式细胞术检测转染后A549细胞对顺铂的敏感性变化。结果 mir-151a-5p在人肺腺癌组织中的表达较正常肺组织明显升高(P<0.01),且在4种肺癌细胞株(H1975、H1299、H2228、A549)中,A549细胞中mir-151a-5p表达量较高(P<0.01)。成功构建了mir-151a-5p-inhibitor转染的A549细胞(P<0.01)。mir-151a-5p inhibitor转染组较NC对照组细胞的增殖能力、迁移侵袭能力以及克隆形成能力都明显降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与NC对照组比较,mir-151a-5p inhibitor转染组E-cadherin表达明显升高,而N-cadherin、Vimentin、Notch1表达明显下降(P<0.01)。CCK-8结果显示mir-151a-5p inhibitor转染组IC_(50)显著低于NC对照组(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,加入顺铂后mir-151a-5p inhibitor转染组凋亡率显著高于NC对照组(P<0.01)。结论下调mir-151a-5p能显著抑制A549细胞的增殖、迁移及侵袭能力,并能够增加对顺铂的化疗敏感性。

关键词： 植物细胞工程   组织培养   现代生物技术   细胞工程学   分子生物学   教案   再生   细胞生物学  

摘要： 教学背景细胞工程学是应用细胞生物学和分子生物学的原理与方法,在细胞水平上研究和改造生物遗传特性,以获得具有目标性状的细胞系或生物体的有关理论和技术的一门学科。它是现代生物技术的重要组成部分,同时也是现代生物学研究的重要技术工具,是现代生物技术的桥梁和纽带。细胞工程学是生物技术专业学生的必修专业基础课,也是其他生物类本科专业学生的重要专业选修课。细胞工程主要包含植物细胞工程和动物细胞工程两大主要内容。

关键词： 核糖体蛋白S9   多发性骨髓瘤   核因子-κB信号通路   类泛素蛋白修饰分子特异蛋白酶1  

摘要： 目的明确核糖体蛋白S9(RPS9)在多发性骨髓瘤中的表达情况,并明确其对骨髓瘤细胞生物学特性的影响及相应机制。方法 选取10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON组)与30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞(CD138+组),实时荧光定量PCR检测RPS9在mRNA水平的表达,并选取3例CON与11例CD138+细胞,Westernblot检测RPS9在蛋白水平的变化,同时选取GSE19784数据集,检测RPS9的表达与患者总体生存率、核因子-κB(NF-κB)、类泛素蛋白修饰分子(SUMO)、泛素通路之间的关系。随后构建RPS9-短发夹RNA(shRNA)敲低载体,使用流式细胞仪检测感染效率、实时荧光定量PCR与Westernblot检测敲低效率后。RPMI8226分为CON与RPS9-shRNA组,使用膜联蛋白V别藻青蛋白/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡的变化、CCK8法检测细胞增殖的变化、PI染色法检测细胞周期的变化。并构建类泛素蛋白修饰分子特异蛋白酶1(SENP1)过表达载体,Westernblot确定过表达效率后,检测RPS9抑制后SENP1表达的变化,并在RPS9-shRNA中转染SENP1过表达载体,Westernblot检测CON、RPS9-shRNA、RPS9-shRNA-SENP1细胞中NF-κB通路P65、抑制因子κBα(IκBα)磷酸化水平的变化,膜联蛋白V/PI双染法检测细胞凋亡的变化。结果 RPS9在10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON)以及30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞中相对表达量分别为1.00±0.12和5.45±0.71(t=4.291,P=0.0036),Westernblot中大多数骨髓瘤CD138+细胞中RPS9呈现高表达,RPS9的高表达同时与患者髓外浸润相关,并在GSE19784数据集中与患者总体生存率相关。RPMI8226在感染CON与RPS9-shRNA慢病毒48h后,流式细胞仪证实两组细胞感染效率均在90%以上,实时荧光定量PCR与Westernblot证实RPS9在mRNA与蛋白水平的表达均受到抑制。RPMI8226CON与RPS9-shRNA感染病毒48h后,CON与RPS9-shRNA组细胞膜联蛋白V阳性细胞比例分别为3.47±0.37和18.60±1.64,RPS9-shRNA组显著高于CON组(t=9.015,P=0.0008)。在增殖中,CON组与RPS9-shRNA组在72h时增殖指数差异有统计学意义(t=6.846,P=0.0024)。而在细胞周期中,CON与RPS9-shRNA组在感染病毒48h时,G2期细胞比例分别为(29.28±3.42)%和(10.43±1.43)%,CON组显著高于RPS9-shRNA组,差异有统计学意义(t=9.329,P=0.0007)。RPS9的表达在GSE19784数据集中与SENP1正相关,并与IκBα编码基因NFKBIA呈负相关,Westernblot进一步证实RPS9的敲低能够抑制SENP1的表达,并抑制NF-κB亚基P65、抑制因子IKBα的磷酸化,促进IKBα的表达,而SENP1的过表达不仅能够阻碍这一效应,也能够使RPS9诱导的凋亡减少。结论 RPS9在多发性骨髓瘤CD138+细胞中高表达,且与患者总体生存率、髓外浸润相关。RPS9的抑制能够促进骨髓瘤细胞凋亡、细胞周期阻滞并抑制增殖。RPS9能够通过SENP1影响NF-κB通路的活化,并影响细胞的凋亡,提示SENP1可能为RPS9生物学效应的关键因素。

关键词： 细胞生物学特性   胆管癌细胞   超声介导   缺氧   微泡   甲氧基聚乙二醇   磷脂酰乙醇胺   药物敏感性  

摘要： 改变肿瘤细胞的缺氧微环境是目前针对药物敏感性差的实体肿瘤(包括胆管癌)的一个治疗热点而被研究[1]。本实验旨在探讨超声载氧微泡技术对胆管癌细胞的生物学特性改变。一、材料与方法1.材料:选用人胆管癌RBE细胞株,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(AnnexinV-FITC)/碘化丙锭(PI)细胞凋亡检测试剂盒购自凯基生物公司:Matrigel胶购自BD公司;二硬脂酰磷脂酰胆碱和甲氧基聚乙二醇5000-二棕榈酰磷脂酰乙醇胺购自Sigma公司。

关键词： 骨桥蛋白   甲状腺癌   凋亡   侵袭  

摘要： 目的探讨骨桥蛋白(OPN)对甲状腺癌生物学行为的影响。方法 SW579细胞置于6孔板中培养,采用随机数字表法分成对照组、阴性对照组、OPN siRNA干扰组3组,每组3个孔,每个孔2 m L,细胞密度为1×10~4/m L。对照组不作任何处理,阴性对照组转染OPN阴性序列,OPN siRNA干扰组转染OPN siRNA序列。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)测定并比较转染后3组细胞OPN、MMP-2、MMP-9、Caspase-3的mRNA水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)测定转染后3组细胞的抑制率,流式细胞仪检测转染后3组细胞凋亡率,Transwell小室检测转染后3组细胞的侵袭力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测3组OPN、MMP-2、MMP-9、Casepase-3的蛋白水平。结果 OPN siRNA干扰组的OPN mRNA的表达水平显著低于对照组和阴性对照组,细胞凋亡率显著高于对照组以及阴性对照组,侵袭能力显著低于对照组和阴性对照组,OPN、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白水平显著低于对照组和阴性对照组,Casepase-3mRNA和蛋白水平显著高于对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论 OPN干扰后SW579细胞增殖和侵袭能力下降,凋亡率增加,其机制可能与凋亡蛋白caspase-3水平增加,MMP-2、MMP-9水平下降有关。

关键词： 综述论文   细胞生物学  

摘要： 《中国细胞生物学学报》(原《细胞生物学杂志》)创刊于1979年9月,目前由中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所和中国细胞生物学学会共同主办,是国内外公开发行的专业性学术期刊。在过去四十年里,作为我国细胞生物学最权威的中文期刊,《中国细胞生物学学报》秉承推动我国细胞生物学发展的宗旨, 通过研究论文、综述论文和教学研究等栏目, 发表了大量论文, 为中国细胞生物学的发展作出了重要贡献。

关键词： 癌,肝细胞   丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白   增殖   脱噬作用   转移  

摘要： 目的检测丝氨酸-苏氨酸激酶受体相关蛋白(STRAP)在肝癌细胞及正常肝组织中的表达,并探索其对肝癌细胞生物学功能的影响。方法通过检测九种肝癌细胞株及正常肝组织STRAP相对表达量,并分别在肝癌细胞株HepG2、SNU449中构建STRAP过表达及敲减细胞株。使用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白印迹技术检测细胞株构建后STRAP表达,用Transwell小室及含有基质胶的Transwell小室检测肝癌细胞的迁移和侵袭能力,并使用细胞计数试剂盒(CCK-8)及细胞克隆形成实验检测STRAP对肝癌细胞增殖能力的影响,并利用流式细胞学技术检测STRAP对肝癌细胞凋亡的影响。结果肝癌细胞株中STRAP表达水平明显高于正常肝组织;在肝癌细胞中STRAP敲减后,敲减组与对照组mRNA相对表达量分别为(0.17±0.19)、(2.22±1.02),敲减组表达水平明显低于对照组(P<0.05)。过表达STRAP基因后,过表达组与对照组mRNA相对表达量分别为(3.25±0.39)、(1.05±0.37),过表达组明显高于对照组(P<0.01)。STRAP基因敲减后,SNU449细胞克隆形成实验对照组和敲减组细胞克隆数目分别为(221.30±9.60)、(58.30±4.49),迁移实验对照组和敲减组细胞穿膜数分别为(0.76±0.04)、(0.44±0.06),侵袭实验对照组和敲减组细胞穿膜数分别为(1.11±0.05)、(0.60±0.05),细胞增殖实验敲减组在第72、96、120小时,细胞增殖数目较对照组下降,细胞凋亡实验对照组和敲减组细胞凋亡比例分别(4.11±0.12)、(11.73±0.40),细胞的克隆形成能力、迁移侵袭能力及增殖能力明显受抑制(P<0.05),细胞凋亡明显增多(P<0.01);SRTAP基因过表达后,HepG2细胞在第48、72、96、120小时,细胞增殖数目较对照组增多,细胞增殖能力明显增强(P<0.01),细胞凋亡实验对照组和过表达组细胞凋亡比例分别(8.87±0.12)、(8.34±0.06),细胞凋亡明显受抑制(P<0.05)。结论STRAP在肝癌细胞中呈高表达,并且起着促进肝癌细胞增殖、增强肝癌细胞迁移侵袭能力,同时抑制肝癌细胞凋亡的作用。

关键词： 生物学科   浙江大学   分子细胞生物学   生物信息学技术   基因组技术   植物营养   大数据分析   蛋白质组学  

摘要： 浙江大学生物学学科源于1929年创建的国立浙江大学生物系,是我国高校最早建立的生物学科之一。本学科在分子细胞生物学、植物营养和抗逆、基因组技术大规模应用、生物信息学技术大数据分析、干细胞及再生生物学、蛋白质组学研究技术与方法、生物治疗及个性化诊疗技术、海洋生物研究等领域形成了较强的研究优势和特色。在近5年美国基本科学指标数据库(ESI)排名中,与本学科相关的植物与动物学、生物学与生物化学、微生物学、分子生物学与遗传学等4个研究领域进入前1%,其中植物与动物学领域跻身全球前100位。

关键词： 学术讲座   研究员   专家   候鸟   细胞生物学   中国科学院   原始生殖细胞   生殖生物学  

摘要： 2019年3月25-26日,我校细胞生物学学科"候鸟专家"中国科学院动物研究所高飞研究员在细胞生物学会议室进行了题为"原始生殖细胞的形成"和"性别决定与性别分化"的两场学术讲座。针对生殖生物学中这两项重要内容从科学机制到应用前沿进行详细介绍,与会师生认真听取学术报告,并进行了热烈的交流和讨论。

关键词： 细胞生物学   实验教学改革   实践  

摘要： 细胞生物学实验教学不仅是理论知识的具体实践,更是培养学生综合能力的重要手段。本课程组针对实验教学中存在的问题,通过优化实验教学内容、更新教学手段以及完善评价及考核制度等方面进行改革,有效提高了教学质量,同时也为创新型和实践型人才的培养提供了新的思路。