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关键词： 细胞生物学   课程目标   师范生   产出导向  

摘要： 师范专业认证工作强调“学生中心、产出导向、持续改进”的基本理念。在细胞生物学教学中,优化课程目标,进而由课程目标反向设计考核评价并改进过程性评价的分级量化。基于此,教学内容上增加基础问题讨论和学科前沿科普;教学方法上改进表现性学习法、增设微视频播放和学习通辅助法。形成“课程目标+评价改进+内容更新+教法改革”的实践探索模式,该模式为师范类专业开展相关教学改革提供借鉴。

关键词： 宫颈癌   底板反应蛋白   Hela细胞   肿瘤微环境  

摘要： 目的探讨底板反应蛋白(F-spondin, SPON1)在宫颈癌组织中的表达情况及对Hela细胞株增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。方法选取徐州医科大学病理科2022年1月至2023年5月存放的宫颈癌组织和宫颈炎组织标本各80例。免疫组化检测宫颈癌及慢性宫颈炎组织中SPON1的表达情况, 收集对应的临床病理学数据整理分析;用特异小干扰RNA(small disturbance RNA, siRNA)干扰Hela细胞株中SPON1表达, 设置没有转染的细胞为正常对照组(Ctrl组)、阴性对照组(NC siRNA组)和底板反应蛋白敲除组(SPON1 siRNA组), qPCR和蛋白质印迹(Western blot)检测干扰效果, 并采用细胞增殖实验(cell counting kit-8, CCK-8)、流式细胞学技术、Transwell以及划痕实验检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况, 每项实验重复3次。符合正态分布的计量资料以xˉ±s表示;3组间均数比较采用单因素方差分析;两两比较使用LSD-t检验。定性资料计算百分率, 组间率的比较采用χ^(2)检验;P<0.05为差异有统计学意义。结果宫颈癌组与慢性宫颈炎组比较, 宫颈癌组织中SPON1的阳性表达率[72.5%(58/80)]高于慢性宫颈炎组织[20.0%(16/80)], 差异具有统计学意义(χ^(2)=44.35, P<0.001);SPON1的阳性表达率与宫颈癌的临床分期、病理分化程度、肿瘤直径大小有关(χ^(2)值分别为4.10、4.98、4.40, P值分别为0.043、0.026、0.036), 与患者的年龄、组织类型无关(χ^(2)值分别为0.72、0.14, P值分别为0.386、0.713)。NC siRNA组、Ctrl组、SPON1 siRNA组、SPON1 mRNA相对表达量分别为1.000±0.014、0.966±0.082、0.365±0.036, SPON1蛋白表达量分别为1.000±0.013、1.022±0.031、0.655±0.026, 3组细胞穿模细胞数分别为(113.3±4.1)、(107.0±3.1)、(80.3±3.2)个, 3组细胞划痕愈合率分别为(56.00±3.45)%、(55.00±5.03)%、(35.33±3.76)%, 3组细胞凋亡率分别为(5.88±0.44)%、(6.27±0.38)%、(10.50±0.39)%。与Ctrl组和NC siRNA组细胞株相比较, SPON1 siRNA组细胞的增殖(均P<0.001)、侵袭(P值分别为0.001、0.004)及迁移(P值分别为0.029、0.035)能力降低, 凋亡率升高(P=0.001)。结论 SPON1在宫颈癌组织中表达较高, 且与宫颈癌的发生发展密切;SPON1促进宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和迁移, 抑制其凋亡。

关键词： 牙髓干细胞   眼   角膜   视网膜   旁分泌  

摘要： 牙髓干细胞(DPSCs)是一类具有广泛应用潜力的间充质干细胞。DPSCs因其多向分化潜能和易获取的特点成为眼科领域研究的热点。近年来,DPSCs在角膜上皮损伤和视网膜退行性病变的治疗中表现出潜在的临床应用前景。DPSCs可以通过分化为角膜上皮细胞和抑制M1巨噬细胞,促进角膜上皮再生和重建。此外,DPSCs也可以分化为视网膜光感受器样细胞和视网膜神经节样细胞,替换原有视神经元,分泌神经营养因子介导损伤修复,促进视网膜的再生,改善视网膜原有功能。现系统地回顾近年来国内外相关文献,就DPSCs的生物学特性及其在角膜和视网膜疾病治疗中应用的研究进展进行综述,以期为DPSCs在转化医学和眼科相关疾病治疗中应用的研究提供思路及策略。

关键词： 医学细胞生物学   课程负责人   教学方法   课程建设   教学实践  

摘要： 课程负责人制有利于课程教学和建设质量的提高。医学细胞生物学课程负责人制度建设的实践表明,课程负责人参与课程教学的各个环节,围绕课程建设开展有益于课程质量提升的各项活动,保证了课程教学质量的稳定性和持续性提升。课程负责人发挥领头雁的作用,带领教师开展课程教学方法和模式改革,及时调整和更新课程教学内容,紧跟学科发展前沿,丰富课程线上线下资源,从而提升了课程教学和建设质量。

关键词： 肥胖症   体重减轻   细胞增殖   细胞迁移分析   成脂分化   脂肪干细胞   成骨分化  

摘要： 目的探索肥胖患者减重成功后其脂肪干细胞(ASC)的生物学特性变化,为该类ASC在难愈性创面修复中的临床应用提供参考。方法该研究为实验研究。将2021年4月—2023年4月郑州大学第一附属医院收治的12例肥胖减重成功后行腹壁皮肤松弛矫正术的患者纳入减重组[女8例、男4例,年龄为(50±9)岁],将该单位同期收治的行腹部抽脂后面部填充术的12名健康志愿者纳入健康组[女10例、男2例,年龄为(50±9)岁]。收集减重组患者与健康组志愿者的脂肪组织并提取ASC,取第4、5代ASC进行实验。于培养0(即刻)、24、48、72 h,采用噻唑蓝法检测细胞增殖水平。行细胞划痕试验,计算划痕后12、24 h细胞迁移率。行细胞Transwell试验,培养24 h后计数迁移细胞。行成脂诱导、成骨诱导实验,分别于诱导18、21 d后观测细胞成脂、成骨分化水平。采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞中脂蛋白脂肪酶(LPL)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白、碱性磷酸酶(ALP)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、转化生长因子β(TGF-β)的mRNA表达。各实验样本数均为12。结果培养0 h,减重组患者与健康组志愿者细胞增殖水平分别为1.022±0.056、1.000±0.144,组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。培养24、48、72 h,减重组患者细胞增殖水平分别为1.366±0.030、1.353±0.012、1.390±0.016,明显低于健康组志愿者的1.755±0.077、1.737±0.014、1.700±0.023(t值分别为16.27、71.35、38.56,P值均<0.05)。细胞划痕试验中,划痕后12、24 h,减重组患者细胞迁移率均低于健康组志愿者,但差异均无统计学意义(P>0.05)。细胞Transwell试验中,培养24 h后,健康组志愿者和减重组患者细胞迁移数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。成脂诱导18 d后,减重组患者细胞成脂分化水平明显低于健康组志愿者(t=27.81,P<0.05);成骨诱导21 d后,减重组患者细胞成骨分化水平明显低于健康组志愿者(t=14.85,P<0.05)。与健康组志愿者比较,减重组患者细胞中LPL、PPARγ、TGF-β和Runx2的mRNA表达均明显降低(t值分别为59.48、146.10、46.10、3.13,P<0.05),而骨桥蛋白、ALP和MMP-9的mRNA表达均无明显变化(P>0.05)。结论相对于健康志愿者,肥胖患者减重成功后其ASC的增殖功能明显减弱,分化功能相对较弱,与成脂、成骨分化对应的部分基因表达水平下降,这可能会影响用这些ASC治疗由烧伤、糖尿病和放射性损伤等导致的难愈性创面的效果,故在临床应用时,需要考虑ASC的供体差异。

关键词： 半胱氨酸蛋白酶抑制因子6   甲状腺乳头状癌   颈部淋巴结转移   上皮-间充质转化  

摘要： 目的:研究半胱氨酸蛋白酶抑制因子6(Cystatin M/E,Cystatin 6,CST6)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达情况及其与颈部淋巴结转移的相关性,以及CST6表达与PTC细胞恶性生物学行为的关系,并初步探索其作用通路。方法:选取119例PTC患者,应用免疫组化检测PTC及甲状腺滤泡上皮组织中CST6蛋白的表达情况,通过RT-qPCR、Western Blot检测CST6在人甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1、K1、B-CPAP以及人甲状腺正常细胞株Nthy-ori 3-1中蛋白表达水平。根据表达情况筛选并构建CST6过表达及干扰细胞株,通过Transwell及Wound-Healing实验测定PTC细胞侵袭、迁移能力变化。Western Blot检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)关键蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)变化趋势。结果:与正常甲状腺组织相比,CST6在PTC组织中表达水平较低,并且CST6在pN1患者甲状腺滤泡上皮与pN0患者甲状腺癌组织中高表达。CST6表达水平与肿瘤长径(P<0.0001)以及颈部淋巴结转移(P<0.0003)相关。与OE-CST6组相比,sh-CST6组具有更强烈的侵袭、迁移趋势。同时sh-CST6组E-cadherin蛋白表达明显下调,N-cadherin及Vimentin蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:CST6作为保护性因子,在PTC中低表达,其表达程度与淋巴结转移相关。过表达CST6蛋白能抑制PTC细胞迁移、侵袭能力,同时减少经上皮-间质转化途径导致的颈部淋巴结转移。

关键词： 淫羊藿素   蛋白精氨酸甲基转移酶(PRMT)5   Janus激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路   肝癌细胞Smmc-7721   增殖、凋亡  

摘要： 目的探究淫羊藿素通过蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMT)5调控Janus激酶(JAK)2/信号转导与转录激活因子(STAT)3信号通路对肝癌细胞Smmc-7721增殖、凋亡、周期、侵袭的影响。方法用1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、40.00μmol/L淫羊藿素处理肝癌细胞Smmc-7721,用PRMT5 siRNA转染敲低PRMT5表达,梯度浓度淫羊藿素培养48 h后,通过CCK-8、实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)、Transwell、膜联蛋白(Annexin)Ⅴ-别藻蓝蛋白(APC)/7-氨基放线菌素(AAD)双染色法、流式细胞术、West-ern印迹法检测细胞增殖率、PRMT5表达水平、细胞侵袭能力、细胞凋亡、细胞周期,检测细胞PRMT5蛋白表达、细胞周期蛋白(Cyc-lin)D1及Janus激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路关键蛋白磷酸化(P)-JAK2、P-STAT3和信号通路上游炎症因子白细胞介素(IL)-6,检测凋亡蛋白成熟的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved-Caspase)3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平。结果肝癌细胞Smmc-7721中PRMT5表达量显著高于正常肝细胞L-02(P<0.05);CCK-8实验检测后选出淫羊藿素用药效果较为显著的浓度为10.00、20.00、40.00μmol/L,最佳干预时间为48 h;保持淫羊藿素浓度不变,转染后的肝癌细胞增殖率、侵袭力较转染前明显降低(P<0.05);转染前后的肝癌细胞凋亡率与所联合使用的淫羊藿素浓度呈正相关,相同浓度淫羊藿素药物浓度干预时,敲低PRMT5表达肝癌细胞凋亡率显著升高(P<0.05),提示敲低PRMT5表达可促进肝癌细胞凋亡。流式细胞术检测结果提示,转染前后细胞均阻滞于G0/G1期,且转染后阻滞效果更加显著(P<0.05)。不同浓度淫羊藿素处理后,肝癌细胞中PRMT5、Cyclin D1、P-JAK2、P-STAT3、IL-6、Bcl-2蛋白表达均显著降低,凋亡蛋白Cleaved-Caspase3、Bax蛋白表达显著升高,且有浓度依赖性(P<0.05);转染后细胞中PRMT5、Cyclin D1、P-JAK2、P-STAT3、IL-6、Bcl-2蛋白表达明显低于转染前,Cleaved-Caspase3、Bax蛋白水平明显高于转染前(P<0.05)。结论淫羊藿素可通过抑制PRMT5促进肝癌细胞Smmc-7721凋亡,并抑制其增殖、侵袭,其作用机制与PRMT5调控JAK2/STAT3信号通路有关。

关键词： 肺癌   LncRNA NEAT1   miR-582-5p/COL5A1   生物学功能  

摘要： 目的:探讨长链非编码RNA富含核的丰富转录物1(LncRNA NEAT1)调控miR-582-5p/COL5A1信号通路对肺癌A549细胞生物学功能的影响。方法:体外培养人肺癌A549细胞并随机分为对照组、si-NEAT1组(转染LncRNA NEAT1 siRNA质粒)、miR-582-5p mimics组(转染miR-582-5p mimics)、si-NC+miR-582-5p-NC组(共转染LncRNA NEAT1 siRNA阴性对照与miR-582-5p阴性对照)、si-NEAT1+miR-582-5p inhibitor组(共转染LncRNA NEAT1 siRNA质粒与miR-582-5p inhibitor),分组转染后以实时荧光定量PCR实验检测细胞LncRNA NEAT1、miR-582-5p、COL5A1表达;构建其裸鼠移植瘤模型,测量裸鼠移植瘤质量、体积。以CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖;以免疫印迹实验检测细胞及裸鼠移植瘤组织增殖相关蛋白(cyclin D1、PCNA)表达;以Transwell实验检测细胞迁移及侵袭;以免疫印迹实验检测细胞上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(Vimentin、MMP2、E-cadherin)表达;以双荧光素酶报告基因实验检测细胞中LncRNA NEAT1对miR-582-5p、miR-582-5p对COL5A1的靶向调控作用。结果:与对照组相比,si-NEAT1组、miR-582-5p mimics组细胞COL5A1 mRNA表达、细胞活力和克隆形成率、裸鼠移植瘤质量和体积、细胞及裸鼠移植瘤组织cyclin D1、PCNA蛋白表达、细胞迁移和侵袭数目、细胞Vimentin和MMP2蛋白表达均降低(P<0.05),细胞miR-582-5p表达、E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05);si-NC+miR-582-5p-NC组各指标均无显著差异(P>0.05)。与si-NEAT1组相比,si-NEAT1+miR-582-5p inhibitor组细胞COL5A1 mRNA表达、细胞活力和克隆形成率、裸鼠移植瘤质量和体积、细胞及裸鼠移植瘤组织cyclin D1、PCNA蛋白表达、细胞迁移和侵袭数目、细胞Vimentin和MMP2蛋白表达均升高(P<0.05),细胞miR-582-5p表达、E-cadherin蛋白表达均降低(P<0.05)。LncRNA NEAT1可靶向下调A549细胞miR-582-5p,且miR-582-5p可靶向下调A549细胞COL5A1(P<0.05)。结论:敲低LncRNA NEAT1可通过上调miR-582-5p表达而降低COL5A1表达,从而抑制肺癌A549细胞的体内外生长,并可减弱其侵袭与迁移活性。

关键词： 骨髓间充质干细胞   传代   长期培养   能量代谢   衰老  

摘要： 背景:人骨髓间充质干细胞体外长期传代培养后是否能保持其生物学特性、能量代谢方式和多向分化潜能等仍存在争议,有待于进一步全面系统研究。目的:观察体外长期传代培养对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响。方法:人骨髓间充质干细胞体外培养至第5,10,15代,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期;成脂、成骨、成软骨诱导分化检测细胞多向分化潜能;划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力;能量代谢分析仪检测细胞线粒体氧化磷酸化和糖酵解能力;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况;Western blot检测细胞衰老标记蛋白p21、p16、p53表达。结果与结论:第5,10,15代骨髓间充质干细胞均呈贴壁生长,第15代细胞体积增大,增殖能力降低,S期细胞百分比减少(P<0.05);随着传代次数的增加,细胞划痕愈合和侵袭能力逐渐减弱(P<0.05),成脂、成骨和成软骨分化潜能未见显著性差异,细胞线粒体氧化磷酸化和糖酵解能力逐渐降低(P<0.05)。随着传代次数的增加,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞增多(P<0.05),衰老标记蛋白p21、p16、p53表达逐渐增加(P<0.05)。结果表明:长期传代培养的骨髓间充质干细胞的生物学特性发生变化,第10代以后骨髓间充质干细胞可能由于衰老导致活性降低。采用第10代以内的骨髓间充质干细胞更适合于临床研究/治疗。

关键词： 三氯生   牙髓干细胞   增殖   分化   活性氧   氧化应激   炎性因子   线粒体膜电位   PI3K/Akt/mTOR   牙髓组织  

摘要： 目的探讨环境污染物三氯生(triclosan,TCS)对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)的多种生物学特性是否有消极影响,以及TCS在大鼠体内牙髓组织的分布情况和危害,为DPSCs的临床应用和TCS的安全性提供依据。方法获得武汉科技大学附属天佑医院医学伦理委员会批准,收集离体牙,分离、培养并鉴定人来源的DPSCs,在DPSCs体外培养液中加入0~0.08 mmol/L的TCS,通过CCK-8检测DPSCs的增殖能力,划痕实验检测DPSCs的迁移能力,诱导三系分化检测DPSCs的分化能力,检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、转化生长因子-β(transforming growth fac-tor-β,TGF-β)的基因或蛋白表达,荧光染色分析DPSCs生成活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平,荧光探针检测DPSCs线粒体膜电位的改变,以及检测DPSCs的PI3K/Akt/mTOR、p38和JNK通路活性。获得武汉科技大学实验动物伦理委员会批准,建立50 mg/kg/d的TCS短期灌胃暴露2个月的大鼠模型,收集并通过液相色谱-质谱联用法检测大鼠肝脏、大脑和牙髓组织中的TCS浓度。结果0.02 mmol/L、0.04 mmol/L和0.08 mmol/L的TCS在与人来源DPSCs接触的第5天和第7天显著抑制了其增殖能力;0.04 mmol/L和0.08 mmol/L的TCS在接触第3天显著抑制了DPSCs的迁移能力和三系分化能力,诱导了促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS以及TGF-β的基因或蛋白表达,抑制了抗炎因子IL-10的蛋白表达;0.04 mmol/L和0.08 mmol/L的TCS在接触第1天诱导了DPSCs的ROS产生,降低了DPSCs的线粒体膜电位,并在第3天抑制了DPSCs的PI3K/Akt/mTOR通路活性,增强了p38通路活性,不影响JNK通路活性;大鼠短期TCS灌胃暴露后,在肝脏(430ng/mL)和大脑(41.4ng/mL)组织中检测到TCS存在,牙髓中未检测到,TCS分布浓度最高的肝脏未出现明显组织病理学变化。结论TCS对DPSCs的多种生物学特性具有抑制作用,对生物体具有潜在风险;短期TCS暴露大鼠的牙髓组织中没有TCS,大鼠健康未受到损害。