关键词:
口腔鳞癌
Ku70
上皮间充质转化
磷脂酰激酶-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路
摘要:
目的探讨Ku70在口腔鳞状细胞癌(OSCC)发生发展中作用及其可能分子机制。方法通过对OSCC组织芯片进行免疫组化(IHC)染色评估Ku70表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹检测OSCC细胞(HSC-4和SCC-9)和人永生化表皮细胞Hacat中Ku70表达水平;利用siRNA干扰技术下调Ku70在OSCC细胞中表达,分为阴性对照(NC)组和Ku70 siRNA组,通过RT-qPCR和Western印迹检测干扰效率;采用CCK-8、流式细胞术、划痕实验、Transwell小室迁移等研究Ku70在OSCC细胞增殖、凋亡及迁移中的作用。通过Western印迹检测上皮间充质转化(EMT)相关标志物E-钙黏蛋白(cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平。同时检测磷脂酰激醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路相关标志物PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达水平。裸鼠体内致瘤性实验评估Ku70对OSCC肿瘤生长及EMT相关蛋白的影响。结果与正常组织及Hacat细胞相比,Ku70在OSCC组织和细胞系中明显上调(P<0.05,P<0.01)。干扰Ku70明显抑制OSCC细胞增殖和迁移,明显促进细胞凋亡(P<0.05,P<0.01)。与NC组相比,干扰Ku70使E-cadherin蛋白表达明显升高,Vimentin蛋白表达明显降低,AKT和PI3K蛋白磷酸化水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。与LV-NC组比较,LV-Ku70组裸鼠体内OSCC肿瘤的体积和重量均显著升高,E-cadherin蛋白表达明显降低,Vimentin蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论Ku70在OSCC组织和细胞中表达上调。Ku70可能通过激活PI3K/AKT信号通路促进EMT,并促进OSCC恶性进展。