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关键词： 乳腺癌   环状RNA   非编码RNA   生物标志物   circ-ARHGEF28  

摘要： 目的研究circ-ARHGEF28在乳腺癌组织、外周血液及细胞中的表达情况,评价其表达用于乳腺肿瘤临床诊断的可能性,预测与circ-ARHGEF28结合的miRNA,探究circ-ARHGEF28在乳腺癌增殖转移过程中的作用。方法收集2016年10月至2018年8月在宁夏医科大学总医院肿瘤外科确诊为乳腺癌的患者的癌组织及癌旁组织样本共20对;2017年8月至2018年9月乳腺癌患者血液样本113例。收集2017年10月至2018年9月宁夏医科大学总医院体检科健康体检人群血液样本50例作为对照。对所有患者临床资料和病理检查结果进行对比分析。通过circRNA芯片筛选乳腺癌组织与癌旁组织间差异表达的circRNA,发现546个高表达的circRNAs和1475个低表达的circRNAs(FC≥2,P<0.05),并用qRT-PCR验证了4个作为乳腺癌诊断和治疗的生物标志物的候选circRNA。采用t检验、曲线回归和接受者操作特性曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)等方法分析乳腺癌外周血中circ-ARHGEF28的表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系。构建circ-ARHGEF28的过表达载体,并在乳腺癌细胞中验证其对肿瘤细胞增殖凋亡的作用;通过数据库筛选、预测和验证与circ-ARHGEF28潜在结合的miRNA。qRT-PCR验证过与circ-ARHGEF28结合miRNA的表达,联合GO分析和KEGG分析circ-ARHGEF28对乳腺癌细胞功能的影响。结果相对于癌旁组织,circ-ARHGEF28在乳腺癌组织中显著低表达;相对于健康人群,circ-ARHGEF28在乳腺癌患者外周血中显著低表达;相对于正常乳腺细胞系,circ-ARHGEF28在乳腺癌细胞中显著低表达。ROC曲线分析结果显示,circ-ARHGEF28的AUC为0.823,敏感性为82.3%,特异性为68.0%(P<0.01)。circ-ARHGEF28表达与肿瘤组织分级、雌激素受体ER阳性、肿瘤转移和TNM分期(P<0.05)密切相关。成功构建circ-ARHGEF28过表达载体,并成功转染到乳腺癌细胞中。CCK-8、细胞划痕、细胞周期和凋亡等实验确定该基因对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。高通量测序发现过表达circ-ARHGEF28后有28个上调的miRNA和5个下调的miRNA,并对这些差异表达的miRNAs进行靶基因预测以及靶基因的功能富集分析。GO分析差异表达的miRNA靶基因的生物学途径在细胞增殖的调控、细胞分化、WNT信号通路、细胞凋亡富集,KEGG分析靶基因在PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、TGF-beta信号通路、p53信号通路、Ras信号通路显著富集。根据数据库miRNA靶基因预测、通路富集分析以及研究文献进行筛选,最终确定12个差异显著的miRNA靶点,qRT-PCR验证后发现差异与测序结果相同。通过生物信息学预测了circ-ARHGEF28与miR-375具有结合位点,进一步分析发现miR-375主要与细胞增殖转移调控相关。结论circ-ARHGEF28在乳腺癌患者的外周血中的相对表达circ-ARHGEF28具有显著特异性,其与乳腺癌的发生密切相关,可作为一种新型的生物学标志物用于乳腺癌的诊断。circ-ARHGEF28与乳腺肿瘤的淋巴结转移以及组织病理分期、分型具有很大的相关性,可能作为乳腺癌分期、分型的外周血标志物。circ-ARHGEF28结合的miRNA的靶基因可以抑制乳腺肿瘤细胞增殖和分化,并诱导细胞凋亡,且circ-ARHGEF28可以作为ceRNA吸附miR-375,具有潜在调控乳腺癌增殖转移的功能。

关键词： 原代胶质瘤细胞   病理机制   A285+细胞   干细胞特性   自我更新能力  

摘要： 目的：　　胶质母细胞瘤是起源于脑实质中最常见的恶性肿瘤。目前对于胶质母细胞瘤的基础实验研究所选用的细胞工具大多为肿瘤细胞单一性及纯度较高的细胞株，如U87，U251，T98G等。然而在临床人脑胶质母细胞瘤组织中细胞成份较为复杂，包含多个异质性的细胞群体，因此在实验研究中所用的胶质瘤细胞株并不能客观反映在亲本胶质母细胞瘤组织中的生物学特性。所以进行原代胶质母细胞瘤细胞培养和建立原代胶质母细胞瘤细胞库是胶质母细胞瘤实验研究中不可缺少的部分。最近，有文献报道了直接从胶质母细胞瘤组织中分选出的A285+肿瘤细胞表现出了干细胞特性，使重新认识A285肿瘤细胞的特性。但是，不清楚A285+细胞在能稳定传代的原代胶质母细胞瘤细胞中的特征变化，因此希望在原代胶质母瘤细胞基础上对A285+细胞的生物学特征进行实验研究。　　方法：　　1.原代胶质瘤细胞培养及A285在原代胶质母细胞瘤细胞中的表达　　(1)用免组织化学检测患者胶质母细胞瘤组织的分子表疫型。(2)通过单细胞悬液方式对新鲜胶质母细胞瘤组织进行原代细胞培养。(3)用CCK8试验方法检测原代细胞（SHG-140，SHG-141，SHG-142）第20代细胞的增殖速率。(4)用免疫荧光实验方法检测三种原代细胞第20代细胞的分子表型。(5)用流式细胞术检测三种原代细胞第20代细胞A285表达率和细胞系细胞周期　　2.原代胶质母细胞瘤细胞中A285+细胞的生物学特性　　(1)用免疫磁珠方法分选三种原代细胞(SHG-140，SHG-141，SHG-142)第20代细胞得到第一代A285+细胞和A285-细胞。(2)用Transwell实验方法检测三种原代细胞分选后的第一代A285+，A285-细胞的侵袭能力的差异。(3)CCK8试验方法检测三种原代细胞分选后第一代A285+细胞和A285-细胞的增殖速率差异。(4)CCK8检测三种原代细胞分选后的第一代A285+，A285-细胞耐替莫唑胺能力的差异。(5)用MS-PCR的实验方法检测三种原代细胞分选后的第一代A285+,A285-细胞的MGMT启动子甲基化状态(6)用qPCR，蛋白质印迹(western blot)，免疫荧光的实验方法检测A285+和A285-干样细胞球的干细胞标志物(CD133，Oct4，Sox2)的相对表达。　　结果：　　1.成功建立的三种原代胶质母细胞瘤细胞分别命名为SHG-140，SHG-141和SHG-142，三种原代细胞形态特征不同;SHG-140，SHG-141，SHG-142第20代分子表型与亲本肿瘤组织相一致;三种原代细胞第20代细胞的成瘤率较低（均为1/10），SHG-140的第20代细胞增殖率低于SHG-141，SHG-142;在三种原代细胞的第20代细胞中A285表达率较低，均在5％以下。　　2.分选后的A285+细胞在传代时A285的表达率会逐渐降低。在三种原代胶质母细胞瘤细胞的中第20代细胞分选后的A285+细胞较A285-细胞具有更强的侵袭能力;CCK8结果显示三种原代胶质母细胞瘤细胞的第20代细胞分选后获得的第一代A285+细胞增殖速率较A285-细胞慢。在耐TMZ曲线中，三种原代胶质母细胞瘤细胞的第20代细胞分选后获得的第一代A285+细胞的耐TMZ曲线中的IC50值较A285-细胞高，表明A285+细胞具有更强的耐TMZ能力。A285+细胞和A285-细胞逆向分化成的干样细胞球均表达了更多的干细胞标志物(CD133，Oct4，Sox2)，A285+干样细胞球比A285-干样细胞球有更强的自我更新能力。　　结论：　　三种原代胶质母细胞瘤细胞(SHG-140，SHG-141，SHG-142)的建立，传至第20代原代肿瘤细胞的分子表型能反应在亲本肿瘤组织中，A285在原代胶质母细胞瘤细胞中表达较低。分选后的A285阳性细胞中A285的表达率随着细胞的传代而降低。A285+细胞比A285-细胞具有更强的耐TMZ能力及侵袭能力，但是增殖能力较A285-细胞慢。A285+干样细胞球与A285-干样细胞球相比，A285+干样细胞球具有更强的自我更新能力和表达更多的干细胞标志物。

关键词： 结直肠癌   UHRF1   WNT信号通路   增殖   侵袭  

摘要： 目的:1.检测人结直肠癌组织与正常组织中UHRF1蛋白表达的情况,研究UHRF1与结直肠癌之间的可能关系。2.探讨过表达和敲减UHRF1后对结直肠癌细胞(SW480、HCT116)生物学特性带来的影响。3.分析UHRF1与WNT信号通路中WNT3a、GSK3β、p-β-catenin、MMP9等相关分子的关系,探求其与结直肠癌细胞生物学特性间的可能分子途径。方法:1.免疫组织化学染色实验检测56例人结直肠癌组织与56例癌旁正常组织的UHRF1的表达。***和Western blot同时检测UHRF1在四株结直肠癌细胞株中的表达情况,选用表现为低表达UHRF1的SW480细胞来构建过表达的稳定转染株,高表达UHRF1的HCT116细胞则作为沉默组细胞株的载体。3.设置对照组和实验组(UHRF1过表达组或UHRF1沉默组),通过q PCR和Western blot验证稳转株是否构建成功。检测各组细胞株中WNT信号通路分子WNT3a、GSK3β、p-β-catenin、MMP9的表达情况。再分别测定运用IWP-2(WNT拮抗剂)和HLY78(WNT活化剂)处理后的实验组细胞的WNT3a、GSK3β、p-β-catenin、MMP9分子的表达。4.将病毒转染前后各组细胞株运用EDU细胞增殖实验来测定增殖细胞数量的变化;同时,通过Transwell小室检测并分析迁移和侵袭入腔室下层的细胞数量的变化情况。结果:1.与正常组织相比,UHRF1蛋白在人结直肠癌组织中的表达更高(p<0.005)。2.实时荧光定量PCR和蛋白印迹实验筛选发现在四株细胞株中SW480细胞UHRF1mRNA和蛋白的表达相对较低,而HCT116细胞则表达相对偏高。选取SW480和HCT116构建稳定高表达与沉默UHRF1的实验组细胞,与对照组细胞进行比较后(p<0.01),证明两株细胞稳转株成功构建。3.慢病毒转染后构建的UHRF1过表达细胞与空白对照组和阴性对照组细胞相比,蛋白印迹实验结果显示过表达UHRF1能够促进WNT信号通路中WNT3a、GSK3β、MMP9分子的蛋白表达,同时抑制p-β-catenin的表达(p<0.05)。用IWP-2(WNT拮抗剂)处理过表达细胞株后,检测上述通路分子蛋白表达发现WNT3a、GSK3β、MMP9的表达减少,p-β-catenin的表达增加(p<0.05)。同样,在慢病毒转染沉默UHRF1实验中,WNT3a、GSK3β、MMP9的蛋白表达受到抑制,而p-β-catenin表达则有显著提升(p<0.05)。再经HLY78(WNT活化剂)处理后,WNT3a、GSK3β、MMP9的表达明显较先前上调,p-β-catenin表达则处于下调趋势(p<0.05)。推测UHRF1与WNT信号通路存在一定的相关关系。***实验检测各组细胞,与对照组比较,UHRF1表达增加可使细胞增殖能力增强;同时UHRF1的表达亦可使得迁移和侵袭入下层的细胞数明显多于对照组。IWP-2(WNT拮抗剂)处理相关细胞株后,细胞的增殖、迁移及侵袭能力则受到抑制。推测UHRF1能够通过WNT信号通路影响结直肠癌细胞的生物学特性。结论:1.与癌旁正常组织相比,UHRF1蛋白在人结直肠癌组织中的表达更高。***1基因可能可以通过WNT信号通路来影响结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭等生物学特性。

关键词： 肺癌   瘦素   GRP78   迁移  

摘要： 背景:肺癌是全球范围内最常被诊断的恶性肿瘤之一,也是癌症死亡最常见的原因,对人类生存和发展造成巨大威胁。肥胖已被确定是多种常见肿瘤的危险因素,但因吸烟、病理性消瘦等混杂因素,肥胖与肺癌的关系尚无定论。瘦素(Leptin)作为研究最多的脂肪因子,绝大部分由白色脂肪组织合成分泌,调控肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭等多个关键步骤,影响肿瘤微环境。GRP78是内质网应激至关重要的分子伴侣蛋白,可促进肿瘤发展与诱导耐药。研究发现瘦素、GRP78在多种癌组织中表达升高,包括乳腺癌、结肠癌、肺癌等。肥胖作为慢性应激可导致内质网应激,但目前肥胖、肺癌与内质网应激三者之间的关系尚不明确。目的:(1)利用TCGA、GTEx数据库,分析瘦素、GRP78转录组数据与肺癌的关系,探讨瘦素、GRP78与肺癌预后的相关性。(2)探讨瘦素与GRP78的关系,及其对肺癌细胞A549与H460迁移能力的影响和可能机制。(3)探讨GRP78对肺癌细胞增殖与凋亡的影响及其潜在机制。材料与方法:利用UALCAN网站分析肺腺癌、肺鳞癌患者与健康者体内GRP78表达量的差异,GEPIA网站分析GRP78、瘦素高表达患者与低表达患者在肺癌中的总生存期差异。免疫组织化学法检测乌拉坦诱导的肺癌小鼠与正常小鼠肺组织中GRP78的表达差异;划痕试验检测瘦素、GRP78对肺癌细胞A549与H460迁移能力的影响;免疫荧光法检测瘦素对A549与H460细胞中GRP78表达量的影响;蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)检测瘦素对A549细胞中GRP78及PI3K/m TOR/STAT3途径活化的作用;当HA15靶向抑制GRP78活性后,划痕实验检测HA15对肺癌细胞A549迁移能力的影响,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测HA15对肺癌细胞A549、H460与H1975活力的影响,Ed U法检测HA15对A549、H460与H1975细胞增殖的影响,流式细胞术检测HA15对A549、H460与H1975细胞凋亡的影响,WB检测HA15对A549细胞中凋亡、内质网应激、自噬等相关蛋白表达量的影响,RT-PCR检测HA15对A549细胞中内质网应激、自噬等相关m RNA表达量的影响,免疫荧光检测HA15对A549细胞中LC3B表达量的影响,透射电镜检测HA15处理后肺癌细胞A549细胞亚细胞结构的改变,如内质网形态与自噬小体数量。结果:(1)GRP78不仅在肺腺癌与肺鳞癌患者体内高表达,在乌拉坦诱导性肺癌小鼠肺组织中表达量也显著高于正常小鼠,且GRP78与瘦素高表达的肺癌患者总生存率较低表达者显著下降。(2)瘦素促进肺癌细胞迁移。100ng/m L瘦素处理48 h后,划痕试验结果显示与0ng/m L对照组相比,瘦素处理后的A549与H460细胞划痕弥合率显著上升。HA15(GRP78抑制剂)显著降低瘦素对A549细胞划痕弥合率的促进作用。(3)瘦素上调A549细胞中m TOR、STAT3、GRP78的蛋白表达量;瘦素与Ly294002(PI3K抑制剂)联合处理组m TOR、STAT3、GRP78的蛋白表达量较瘦素组显著降低;瘦素与雷帕霉素(m TOR抑制剂)联合处理组STAT3、GRP78的蛋白量表达较瘦素组显著降低。(4)HA15以剂量与时间效应关系显著降低肺癌细胞A549、H460与H1975的活力。A549、H460与H1975细胞的凋亡率在10μM HA15处理后较对照组均显著上升,增殖较对照组降低。HA15处理后的A549细胞呈现细胞塌陷,核膜皱缩等凋亡特征形态;Bcl-2、p53蛋白表达量显著下降,而Bax蛋白表达量显著上升。(5)HA15诱导A549细胞内发生内质网应激。ATF4、CleavedATF6、XBP1、IRE1的m RNA表达量显著上升,CHOP在m RNA与蛋白质层面的相对表达量均显著上升,内质网网腔出现急剧扩张。(6)HA15诱导A549细胞内发生自噬。Atg5、Atg7、Atg12、LC3与ULK1的m RNA表达量显著上升,Beclin1与LC3B的蛋白表达量上升,p62的蛋白表达下降;胞内观察到自噬小体。结论:(1)瘦素、GRP78高表达的肺癌患者预后不良,总生存率下降。(2)瘦素通过激活PI3K/m TOR/STAT3通路上调GRP78表达;GRP78参与瘦素促肺癌细胞迁移。(3)HA15靶向抑制GRP78可显著降低细胞活力,促进肺癌细胞凋亡同时抑制肺癌细胞增殖,并触发A549细胞内自噬与内质网应激。

关键词： 结直肠癌   nemo样激酶   基因多态性   细胞生物学   发病机制  

摘要： 目的：旨在研究nemo样激酶（Nemo Like Kinase,NLK）基因多态性与结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）的关联性，深入在细胞水平观察NLK对CRC细胞生物学行为的影响，并初步探究长链非编码RNA（LncRNA XIST）/非编码小RNA（microRNA-92b-3p）/NLK信号轴在CRC发生发展过程中的分子机制。　　方法：采用病例对照研究，选取143例CRC患者和150例健康对照，病例组和对照组按性别和年龄进行匹配，通过高分辨率熔解曲线法（HRM）对NLK基因的单核苷酸多态性(SNP）位点rs2125846（A/G）进行基因分型，使用Pearsonχ2检验和非条件Logistic回归分析NLK rs2125846多态性与CRC易感性之间的关系。通过实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）和免疫组织化学检测NLK在CRC组织中的表达量;采用TUNEL染色法检测结直肠癌组织细胞凋亡情况;以结直肠癌细胞系RKO为靶细胞，以慢病毒包装系统为中介进行NLK过表达和干扰内源NLK表达，应用CCK-8、平板克隆、TRANSWELL和流式细胞术观察NLK对RKO细胞增殖、迁移、凋亡和周期的影响。通过qRT-PCR检测CRC组织中LncRNA XIST和microRNA-92b-3p(miR-92b-3p)的表达情况，应用双荧光素酶报告实验以明确LncRNA XIST与miR-92b-3p之间以及NLK与miR-92b-3p之间的靶向关系，利用RNA干扰技术以RKO为靶细胞初步探讨LncRNA XIST、miR-92b-3p、NLK三者之间的关系。　　结果：NLK-rs2125846（A/G）基因型在病例组与正常组之间分布不同。在共显性遗传模型中，与携带AA型基因型者相比，GG基因型携带者CRC发生风险是AA基因型的0.327倍。在隐性遗传模型中，与GG基因型相比，携带A等位基因（AA+AG）的患者发生CRC的可能性是GG基因型的3.528倍。NLK-rs2125846（A/G）与CRC的肿瘤大小、CRC的浸润深度及患者有无饮酒史具有统计学相关性。CRC组织中NLK的表达水平高于相应的癌旁组织。TUNEL实验检测发现相邻正常组织中TUNEL阳性细胞的百分比高于CRC肿瘤组织。NLK基因下调以后RKO细胞体外增殖能力、集落形成能力和迁移能力降低，细胞被阻滞在G1期，凋亡细胞比例增加。CRC组织中LncRNA XIST的表达水平高于癌旁正常组织;miR-92b-3p的表达水平低于癌旁正常组织。通过RNA干扰及双荧光素酶实验发现LncRNA XIST直接作用于miR-92b-3p并使其表达降低;miR-92b-3p直接靶向并且抑制NLK的表达。LncRNA XIST通过下调miRNA-92b-3p使NLK表达增加。　　结论：在安徽人群中鉴定了位于人类NLK基因内含子内的与CRC风险相关的新易感位点rs2125846，其与CRC的肿瘤大小、CRC的浸润深度及患者有无饮酒史明显相关。LncRNA XIST可能通过下调miRNA-92b使NLK表达增加从而促进CRC的发生发展。

关键词： RACK1   食管鳞癌   ERK1/2信号通路   增殖   凋亡   迁移   侵袭  

摘要： 背景食管癌在我国为高发的恶性肿瘤之一,发病率在我国癌症构成中位居第6位,在患者死亡排列中位居第4位,严重影响了我国人民的身心健康和生活水平,并给社会造成一定负担。目前,我国食管癌病理类型中,以鳞状细胞癌居多,大约为90%,而腺癌较少,占不到10%,小细胞癌、未分化癌等病理类型相对较少。激活性蛋白激酶 C 受体 1(Receptor for activated C kinase 1,RACK1)是许多激酶和受体的支架蛋白,并作为穿梭蛋白在细胞间隙锚定中起着关键作用,在特定位置参与转录/翻译事件并稳定蛋白质活性。而且,RACK1在多个信号通路中起中介作用,这些信号通路互连不同的信号通路以调控必需的细胞生理过程,即细胞生长、增殖、迁移、粘附、分化、信号转导和免疫反应等。细胞外信号调节激酶(Extracellular regulated protein kinases,ERK)是促分裂原激活蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)的一部分,是控制细胞有丝分裂、存活、凋亡、分化和代谢的保守蛋白家族。ERK1/2信号通路增加了分化细胞、种系干细胞和癌症干细胞的增殖,并成为细胞增殖,迁移和凋亡的关键调节因子。目的本研究主要分析RACK1在食管鳞癌组织中的表达水平,以及其表达变化与食管鳞癌Eca109细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力之间的关系,并探讨了 RACK1是否能通过ERK1/2信号通路调控食管鳞癌Eca109细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭能力,以期通过阐明RACK1对食管鳞癌生物活性的分子调控机制,为食管鳞癌早期诊断和预防提供一些新的研究思路。方法1.采用qRT-PCR和western blot检测食管鳞癌组织和癌旁组织中RACK1的mRNA和蛋白质表达水平,采用免疫组织化学方法检测食管鳞癌组织中RACK1的蛋白表达分布,采用SAS 9.0软件分析RACK1表达的临床意义及相关性。2.采用western blot和qRT-PCR筛选高效的RACK1 siRNA载体,为后续实验做准备。实验共设计3组,包括对照组、阴性对照组和siRNA RACK1组;分别分析各组食管鳞癌细胞的增殖、凋亡、迁移侵袭情况,并采用western blot和qRT-PCR检测技术分析增殖、凋亡、迁移和侵袭力相关的蛋白和基因表达水平。3.利用qRT-PCR和western blot检测食管鳞癌细胞中的ERK1/2信号通路的激活状态;siRNA敲低食管鳞癌细胞中RACK1表达,采用western blot分析其对ERK1/2信号通路有关蛋白的影响。结果***1蛋白和mRNA在食管鳞癌组织中高表达。RACK1蛋白表达增高与食管鳞癌病理分级、淋巴结转移、临床分期密切相关(P<0.05);而与患者性别、年龄、肿瘤大小无相关性(P>0.05)。2.敲低RACK1表达可抑制食管鳞癌Eca109细胞增殖,降低增殖相关蛋白ki67、PCNA蛋白表达水平,促进食管鳞癌Eca109细胞凋亡,升高凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bcl-2蛋白表达水平,降低Bax蛋白表达水平。3.敲低RACK1表达水平可抑制食管鳞癌ECA109细胞迁移、侵袭,降低食管鳞癌细胞中侵袭相关蛋白MMP-9、MMP-3蛋白表达水平。***1通过调控ERK1/2信号通路刺激食管鳞癌Eca109细胞增殖。与对照组比较,siRNA RACK1能降低RACK1、MEK、ERK2、P90RSK mRNA水平(P<0.05),下调 RACK1、p-Mek、p-ERK2、p-P90RSK 蛋白水平(P<0.05)。与siRNA Cullin7 2组相比,siRNA RACK1联合ERK1/2信号通路抑制剂PD98059处理后,细胞抑制率明显增加(P<0.05),RACK1、p-Mek、p-ERK2、p-P90RSK蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论***1高表达与食管鳞癌发生发展密切相关。2.降低RACK1表达抑制食管鳞癌Eca109细胞增殖、迁移和侵袭,但促进其凋亡。***1通过激活ERK1/2信号通路调控食管鳞癌Eca109细胞生物学功能,在一定程度上参与了食管鳞癌的发生和进展。

关键词： Biology  

摘要： Reprogramming of gene expression by post-translational modification of chromatin is a hallmark of cellular differentiation. In particular, histone acetylation states in the cell, which are determined by a balance in the activities of histone acetyltransferases (HATs) and histone deacetylases, reflect the highly dynamic control of transcriptional activation and repression. In this study, I characterized the functions of two highly-related HAT paralogues, lysine acetyltransferase 2A (KAT2A) and lysine acetyltransferase 2B (KAT2B), in regulating the proliferation and differentiation of human keratinocytes. I found that keratinocytes switch from high KAT2A and low KAT2B expression under self-renewing conditions, to low KAT2A and high KAT2B expression upon cellular differentiation. In proliferative keratinocytes, depletion of KAT2A triggered changes in cell morphology, colony clustering, perturbation of cell trajectories, and led to premature expression of early and late differentiation markers in the absence of initiating signals. By contrast, KAT2B loss did not have a significant impact on the biology of proliferative keratinocytes. The effects of KAT2A depletion in self-renewing keratinocytes coincided with a specific and extensive loss of global H3K9ac levels, a histone modification known to affect transcriptional elongation. In addition, I found that the function of KAT2A in proliferating keratinocytes is wholly dependent on its acetyltransferase activity as I was able to rescue the aberrant culture morphology and premature differentiation of KAT2A-depleted cells with the expression of full-length KAT2A but not with an acetyltransferase-dead mutant isoform. On induction of differentiation, KAT2A-deficient cells differentiated rapidly in response to initial signals whilst KAT2B-depleted keratinocytes exhibited delayed differentiation morphology and decreased expression of mid-to late differentiation markers. Taken together, my results indicate that KAT2A functions pr

关键词： 医学细胞生物学   实验教学   大型仪器  

摘要： 探讨大型仪器在医学细胞生物学实验教学中的应用,一方面提高大型仪器设备的使用率;另一方面,充分发挥大型仪器在本科实验教学中的作用,将科研成果向教学效果转化,提升学生的学习兴趣与科研素养,培养适应现代医学科学发展和高等医学教育发展需要、具有综合能力的医学人才。

关键词： 思政教育   细胞生物学   课堂教学   实践  

摘要： 为贯彻执行党中央加强高校思政教育的号召,在细胞生物学课程教学中对思政教育的实施进行了积极探索。阐述了在专业课中进行思政教育的实施方案,列举了教材中开展思政教育的一些知识点,并举例介绍了实施思政教育的几个方面的具体内容和在课堂教学中的具体实施方法,总结了在专业课程中进行思政教育的成果、经验和体会。

关键词： 喉癌   细胞周期   凋亡   CDK6  

摘要： 目的研究小RNA干扰技术靶向沉默周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)对喉癌细胞生物学特性的影响.方法在喉癌细胞中依次转染CDK6 siRNA1和CDK6 siRNA2,用荧光定量PCR和Western印迹测定转染效率,筛选干扰效果较好的CDK6 siRNA2作为下调CDK6的小RNA.以CCK-8法测定细胞的增殖情况,以流式细胞术测定细胞周期分布情况及细胞凋亡情况,以Western印迹法测定细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)蛋白水平.结果CDK6 siRNA1和CDK6 siRNA2都可以下调喉癌细胞中CDK6的转录和表达,并且CDK6 siRNA2转染后下调水平更多.下调CDK6后的喉癌细胞的增殖能力下降,细胞G1期比例增多,同时细胞凋亡率也增加,细胞中周期促进因子CDK4、CCND1蛋白水平降低,周期抑制因子p21蛋白水平升高,细胞中Cleaved Caspase-3水平升高,与没有转染的细胞比较有显著性差异(P<0.05).结论沉默CDK6能够在体外抑制喉癌细胞生长,阻滞喉癌细胞周期,诱导喉癌细胞凋亡.