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关键词： 科教融合   生物物理学   会议简讯   学术期刊   系统生物学   栏目设置   神经科学   细胞生物学  

摘要： 1征稿范围与栏目设置1.1征稿范围本刊为国内外公开发行的全国性学术期刊(月刊)。征稿的学科范围是生物化学、分子生物学、生物物理学、细胞生物学、神经科学、免疫学,以及基因组学、蛋白质组学、系统生物学等相关学科领域。1.2栏目设置本刊设有综述与专论、研究快报、研究报告、技术与方法、新技术讲座、科教融合、Letter to Editor、动态与评论、学术争鸣等栏目。同时也刊登学术会议简讯、征文通知、书讯等。

关键词： 医学细胞生物学   细胞器   荧光染色   实验教学   学科交叉整合   开放性实验  

摘要： 目前,多数高校的医学细胞生物学实验对细胞器观察仅通过切片进行形态学观察,实验形式单一,教学效果欠佳。文章基于学科交叉理念设计了结构与功能相对应的细胞器染色和观察综合性教学实验,并招募临床、基础医学等专业学生开展开放性实验。通过将携带荧光基团的药物对细胞进行孵育,同时利用Mitotracker、Lysotracker对线粒体和溶酶体进行特异性荧光染色,观察药物进入细胞器的动态过程。利用线上线下混合式教学,通过课前学习、课中指导、课后培养三个阶段,打造以学生自学为主、教师指导为辅的多学科交叉的实验教学课程,弥补传统实验课程内容单一、学术创新思维培养不够等特点。课程改革旨在提高学生自主学习能力及科研实验技能,通过学科交叉帮助学生深入理解细胞器的功能,为学生将来的科研学习奠定扎实的基础。

关键词： PHF5A   宫颈癌   增殖   侵袭   凋亡   HPV16 E6   HeLa   免疫组化  

摘要： [目的]探究PHF5A介导HPV16 E6对宫颈癌细胞生物学特性的影响。[方法]将宫颈癌HeLa细胞随机分为4组：空白组、siRNA NC组、siRNA PHF5A组和siRNA HPV16 E6组。通过免疫组化分析宫颈癌组织和癌旁的组织PHF5A的表达水平；通过蛋白免疫印迹分析正常宫颈上皮细胞及人宫颈癌细胞中PHF5A的表达差异；通过CCK-8实验分析各组HeLa细胞的增殖能力；通过Transwell实验分析各组HeLa细胞的侵袭能力；通过流式细胞术分析各组HeLa细胞凋亡率；通过蛋白免疫印迹分析HeLa细胞中PHF5A和HPV-16 E6蛋白的表达。[结果]相较于癌旁组织及正常宫颈上皮细胞，宫颈癌组织及宫颈癌细胞中PHF5A表达增加(0.11±0.02 vs 0.37±0.03 vs 0.41±0.05 0.43±0.01;P<0.05)。与空白组及siRNA NC组比较，si PHF5A组、siRNA HPV16 E6组的HeLa细胞增殖、侵袭能力降低，凋亡率增加(5.52%±0.17%vs 6.23%±0.37%vs 17.18%±1.53%vs 15.32%±1.81%;P<0.05);si PHF5A组、siRNA HPV16 E6组的HeLa细胞的HPV-16 E6蛋白表达均降低(0.88±0.05 vs 0.85±0.08 vs 0.13±0.06 vs 0.22±0.03;P<0.05)。[结论] PHF5A在宫颈癌组织及癌细胞中高表达，下调PHF5A表达后能够抑制HeLa细胞的增殖和侵袭，促进HeLa细胞凋亡。此过程与PHF5A调控HPV16 E6的表达相关。

关键词： LncRNA NEAT1   miR-27b-3p   PFKFB3   皮肤鳞状细胞癌   恶性生物学行为  

摘要： 目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)核富集转录体1(NEAT1)调控miR-27b-3p/PFKFB3轴对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖及上皮间质转化(EMT)的作用机制。方法 以皮肤鳞状细胞癌细胞A431及人正常皮肤细胞HFF为对象，qRT-PCR检测LncRNA NEAT1、miR-27b-3p、PFKFB3 mRNA表达；Western blot分析PFKFB3、Cyclin D1及EMT标志蛋白(E-cadherin、Vimentin、N-cadherin)表达；通过克隆形成、划痕实验评估细胞增殖及迁移能力；双荧光素酶实验验证靶向关系。结果 与HFF细胞相比，A431细胞中LncRNA NEAT1和PFKFB3 mRNA表达显著上调，miR-27b-3p表达显著下调(P<0.001)。过表达miR-27b-3p可抑制A431细胞增殖(克隆数目减少)、迁移(划痕愈合率下降)及EMT进程(E-cadherin上调，Cyclin D1、Vimentin、N-cadherin下调，P<0.01)。沉默LncRNA NEAT1后，miR-27b-3p表达升高，PFKFB3 mRNA表达降低(P<0.05)。双荧光素酶实验证实miR-27b-3p直接靶向LncRNA NEAT1及PFKFB3的3′UTR区域。结论 LncRNA NEAT1通过负调控miR-27b-3p促进PFKFB3表达，驱动皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及EMT进程，沉默LncRNA NEAT1可逆转上述效应。

关键词： 肾癌   Keap1   增殖、迁移及凋亡   6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)   Bcl-2  

摘要： 背景:肾细胞癌（Renal cell carcinoma,RCC）是一种死亡率较高泌尿系统肿瘤,因其高度侵袭及转移特性,约20%到30%的患者在初次发现时已伴有转移,并且约40%的局限性肾癌患者在接受手术治疗后仍会有远处转移,这对患者的预后有极大的影响。因此,进一步探索肾细胞癌的分子机制从而寻找全新的治疗靶点是十分重要的。有研究表明在肾癌中,氧化应激与肿瘤的发生、发展密切相关。以核因子-红细胞2相关因子2（Nrf2）为代表的抗氧化系统在肿瘤细胞的增殖、转移以及免疫逃逸的过程中起着重要的作用。前期研究表明,Nrf2在RCC组织中表达上调,与疾病诊断和患者生存时间密切相关,Nrf2可增强肾细胞癌磷酸戊糖代谢途径（Pentose Phosphate Pathway,PPP）,并上调其代谢产物,同时促进肿瘤微环境中免疫负性调控分子腺苷的生成,促进RCC进展。但哪种因子影响肾细胞癌中Nrf2的表达,目前研究较少。Kelch样ECH相关蛋白1-（Keap1-）核因子-红细胞2相关因子2（Keap1-Nrf2）通路是机体对抗氧化应激损伤的主要参与者,它可以通过多种途径产生抗氧化剂从而保护细胞免受氧化应激导致的损伤,与不同类型癌症的临床分期、肿瘤耐药性及放、化疗抵抗有关。Keap1-Nrf2通路通过调节RNA代谢、细胞周期及影响细胞增殖、迁移等过程在多种癌症的发生、发展中发挥重要作用。本课题主要探讨Keap1-Nrf2通路对肾细胞癌的影响及生物学机制。 目的:探索肾癌中Keap1的表达及意义;探索肾癌786-O细胞中Keap1及Nrf2对细胞增殖、迁移、凋亡和代谢的影响及机制研究。 方法: 1、通过TCGA数据库及在线数据库分析肾癌中Keap1的表达及意义。 2、通过荧光定量PCR（RT-PCR）检测肾癌患者癌及癌旁组织中Keap1的表达情况。 3、使用慢病毒转染体系构建稳定过表达Keap1的肾癌786-O细胞系,使用RT-PCR以及蛋白免疫印迹（Western blotting）检测实验组的建立情况。 4、采用多种实验手段评估Keap1表达水平对786-O细胞生物学特性的影响:细胞增殖情况通过毒性测定及流式检测等方法进行评估;细胞迁移能力则利用划痕实验进行观察;借助流式细胞分析技术比较了不同Keap1表达水平下786-O细胞的凋亡状态差异。 5、蛋白免疫印迹及实时荧光定量PCR检测对照组和Keap1过表达组786-O细胞磷酸戊糖代谢途径限速酶（G6PD）mRNA和蛋白表达;NADP+/NADPH检测试剂盒检测对照组和Keap1过表达组786-O细胞中NADP+/NADPH水平的变化;蛋白免疫印迹检测Keap1对Bcl-2及Bax信号通路的影响。 结果:TCGA数据分析显示与癌旁组织相比,肾癌组织中Keap1的表达明显降低,临床样本PCR结果与数据分析结果一致;肾癌中Keap1的表达与临床分期密切相关,可为影响肾癌预后的独立危险因素;肾癌中Keap1的表达与免疫细胞浸润程度有关;在肾癌786-O细胞中,通过慢病毒转染后蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR结果显示Keap1 mRNA及其蛋白表达升高,提示稳定过表达Keap1的786-O细胞成功构建;Keap1过表达后抑制786-O细胞的增殖与迁移;Keap1过表达后促进786-O细胞的凋亡;肾透明细胞癌中Keap1的表达与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）显著相关;Keap1过表达后G6PD的蛋白水平降低,NADPH的含量降低,NADP+/NADPH比值升高。 结论: ***1在肾癌组织中低表达,且与肾癌的临床分期以及预后相关。 ***1可作为影响肾癌预后的独立危险因素。 ***1与肾透明细胞癌免疫浸润程度密切相关。 ***1过表达后抑制肾癌786-O细胞的增殖、迁移能力,促进786-O细胞的凋亡。 ***1过表达后下调G6PD表达,从而抑制磷酸戊糖代谢（ppp）。 ***1过表达后抑制Bcl-2,上调Bax,从而促进肿瘤凋亡。

关键词： 精胺氧化酶抑制剂   人胃癌SGC-7901细胞   上皮-间质转化   侵袭   迁移  

摘要： 目的 探讨新型精胺氧化酶(SMO)抑制剂SI-4650对人胃癌SGC-7901细胞侵袭、迁移和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法 以正常培养人胃癌SGC-7901细胞为阴性对照组，40、80μmol/L SI-4650处理SGC-7901细胞48 h为低、高药物浓度实验组，通过高效液相色谱法验证SI-4650进入SGC-7901细胞能力；细胞划痕实验、克隆形成实验、Transwell细胞体外迁移侵袭实验检测SI-4650对单克隆SGC-7901细胞群生长和SGC-7901肿瘤细胞侵袭、迁移能力的影响；Western印迹法检测SGC-7901细胞E-钙黏蛋白(cadherin)、N-cadherin、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9等EMT相关蛋白表达。结果 与对照组相比，低、高药物浓度实验组细胞中SI-4650浓度明显增加，划痕愈合能力明显下降，单克隆形成数量明显减少，穿过膜孔的迁移细胞数量及穿过基质胶膜孔的侵袭细胞数量均明显减少，EMT相关蛋白E-cadherin蛋白表达明显增加，N-cadherin、Vimentin及MMP-2和MMP-9蛋白表达明显减少(P<0.01)。结论 靶向SMO抑制剂SI-4650可高效抑制人胃癌SGC-7901细胞侵袭、迁移，其机制可能与抑制SGC-7901细胞向间质表型转化、增强细胞间黏附能力、减弱细胞对细胞外基质的降解、干扰SGC-7901细胞EMT进程有关。

关键词： 联苯二氟酮   胆管癌   QBC939细胞   磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路   增殖   凋亡  

摘要： 目的 研究联苯二氟酮(EF24)通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路抑制胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭和可能的作用机制。方法 取人胆管癌QBC939细胞，加入不同浓度的EF24将其分为对照组、1、2和4μmol/L EF24组。通过CCK-8法、流式细胞术、划痕实验、Transwell实验、Western印迹方法分别检测EF24对QBC939细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、PI3K/Akt信号通路及相关蛋白表达的影响。结果 EF24能够显著抑制QBC939细胞增殖活性(P<0.01),且呈剂量依赖趋势。与对照组相比，不同浓度EF24组将QBC939细胞阻滞于G0/G1期，同时诱导其发生凋亡，使得细胞核固缩、碎裂，凋亡小体出现，抑制QBC939细胞迁移和侵袭，差异显著(P<0.01)。不同浓度EF24组细胞中p-PI3K、p-Akt、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、前体半胱氨酸蛋白酶(pro-caspase)-9和pro-caspase-3蛋白表达较对照组显著降低，但是磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素(Cyt)c、裂解(cleaved)-caspase-9和cleaved-caspase-3蛋白表达较对照组显著升高(P<0.05)。结论 EF24可以显著抑制胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并诱导其凋亡，该过程可能是通过调控PI3K/Akt信号通路发挥作用。

关键词： 长链非编码RNA母系表达基因3   微小RNA-424-5p   ABL家族非受体酪氨酸激酶(ABL)2   前列腺癌   生物学行为  

摘要： 目的 探讨长链非编码(Lnc)RNA母系表达基因(MEG)3靶向调控微小RNA(miR)-424-5p/ABL家族非受体酪氨酸激酶(ABL)2轴对前列腺癌(PCa)细胞系LnCaP细胞生物学行为的影响。方法 体外培养人正常前列腺上皮细胞系RWPE-1、PCa细胞系PC3、DU145、LnCaP、22RV1,实时荧光定量PCR法检测各细胞系中LncRNA MEG3、miR-424-5p和ABL2 mRNA表达水平。将培养至对数生长期的LnCaP细胞分为对照组(常规培养LnCaP细胞)、LncRNA MEG3-NC组(LnCaP细胞转染LncRNA MEG3空载质粒)、LncRNA MEG3组(LnCaP细胞转染LncRNA MEG3重组质粒)、LncRNA MEG3+miR-NC组(LnCaP细胞转染LncRNA MEG3重组质粒和miR-424-5p空载质粒)、LncRNA MEG3+miR-424-3p组(LnCaP细胞转染LncRNA MEG3重组质粒和miR-424-5p模拟物质粒)。实时荧光定量PCR法检测各组LnCaP细胞中LncRNA MEG3、miR-424-5p和ABL2 mRNA表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA MEG3与miR-424-5p的靶向关系及miR-424-5p与ABL2的靶向关系；细胞计数试剂盒(CCK)-8、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)法、流式细胞术和Transwell实验分别检测各组LnCaP细胞活力、细胞增殖水平(EdU阳性细胞率)、凋亡率和侵袭数目；Western印迹法检测各组LnCaP细胞中ABL2蛋白表达水平。结果 与人正常前列腺上皮细胞系RWPE-1相比，PCa细胞系(PC3、DU145、LnCaP和22RV1)中LncRNA MEG3、ABL2 mRNA表达水平显著降低，miR-424-5p表达显著升高(P<0.05);与对照组和LncRNA MEG3-NC组相比，LncRNA MEG3组LnCaP细胞中LncRNA MEG3、ABL2 mRNA和蛋白表达、凋亡率显著升高，miR-424-5p表达、细胞活力、EdU阳性细胞率和侵袭数目显著降低(P<0.05);与LncRNA MEG3组和LncRNA MEG3+miR-NC组相比，LncRNA MEG3+miR-424-3p组LnCaP细胞中LncRNA MEG3表达差异无统计学意义(P>0.05),miR-424-5p表达、细胞活力、EdU阳性细胞率和侵袭数目显著升高，ABL2 mRNA和蛋白表达、凋亡率显著降低(P<0.05);LncRNA MEG3可靶向调控miR-424-5p; miR-424-5p可靶向调控ABL2。结论 LncRNA MEG3可靶向调控miR-424-5p/ABL2轴抑制LnCaP细胞活力、增殖和侵袭，促进其凋亡。

关键词： G蛋白偶联受体107   人类角质形成细胞   CRISPR/Cas9   细胞增殖   细胞周期  

摘要： 目的 构建稳定敲除G蛋白偶联受体107（GPR107）基因的人类角质形成细胞系（HaCaT）,并初步探究GPR107的缺失对HaCaT细胞生物学行为的影响。方法 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，构建敲除GPR107基因的HaCaT细胞，并通过有限稀释法获得GPR107缺失的单克隆细胞；利用Western blot和PCR扩增基因组DNA并测序验证验证敲除GPR107的单细胞克隆。运用流式细胞分析术检测细胞周期变化；利用CCK-8检测细胞增殖；运用流式细胞术检测细胞凋亡水平；运用Western blot检测细胞分化标记分子的变化；运用细胞划痕实验等方法分析细胞迁移能力。结果 成功将LentiCas9-Blast与plenti-guide-RNA-GPR107质粒转染进HaCaT细胞，并通过有限稀释法得到了21株单克隆细胞，Western blot显示其中8株细胞GPR107表达显著降低；进一步采用细胞基因组PCR测序，显示获得了C4与2D8 2株GPR107-/-HaCaT单克隆细胞株。CCK-8检测、流式细胞术检测显示GPR107基因缺失导致HaCaT细胞出现G0G1期阻滞，增殖能力显著减弱，凋亡水平增加；Western blot显示敲除GPR107后HaCaT细胞分化加快；细胞划痕实验结果表明敲除GPR107后HaCaT细胞迁移能力增强。结论 成功构建GPR107基因缺失的HaCaT细胞株；GPR107缺失阻滞HaCaT细胞G0G1期从而抑制了HaCaT细胞增殖并促进细胞凋亡，敲除GPR107后HaCaT细胞分化能力与迁移能力均增强。

关键词： 青蒿琥酯   口腔鳞癌   血红素加氧酶-1   增殖   侵袭   迁移  

摘要： 目的:探讨青蒿琥酯(ART)对人口腔鳞癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度(0、6.25、12.5、25、50μg/mL)ART处理HSC-4细胞，CCK-8法检测细胞存活率，Transwell小室实验检测各组细胞侵袭细胞数，划痕实验检测各组细胞迁移率，平板克隆实验检测各组细胞克隆形成率，RT-qPCR和Western blot检测各组细胞中血红素加氧酶-1(HMOX-1)表达水平。将HMOX-1干扰腺病毒载体(si-HMOX-1)及其对照(si-NC)转染至HSC-4细胞中，经50μg/mL ART干预，设立对照(Con)组、ART组、ART+si-NC组和ART+si-HMOX-1组。使用CCK-8、Transwell、划痕、平板克隆、RT-qPCR和Western blot实验检测各组细胞生物学行为；流式检测各组细胞活性氧(ROS)水平和细胞凋亡率。设置平行实验，采用KOSC-2cl3-43和Tca8113细胞进行以上检测。结果:经ART处理的HSC-4细胞存活率、侵袭细胞数、迁移率和克隆数以剂量依赖性降低，而HMOX-1 mRNA和蛋白表达水平以剂量依赖性升高，其中50μg/mL ART浓度效果最佳。ART可显著抑制HSC-4细胞的增殖、侵袭和迁移，并显著升高ROS水平和细胞凋亡率(P<0.05)。而下调HMOX-1可明显逆转ART对HSC-4细胞增殖、侵袭和迁移能力的抑制作用。ART通过上调HMOX-1表达抑制KOSC-2cl3-43和Tca8113细胞的增殖、侵袭和迁移。结论:ART通过上调HMOX-1表达从而抑制人口腔鳞癌细胞的增殖、侵袭和迁移等恶性生物学行为。