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关键词： 半胱氨酸蛋白酶抑制因子6   甲状腺乳头状癌   颈部淋巴结转移   上皮-间充质转化  

摘要： 目的:研究半胱氨酸蛋白酶抑制因子6(Cystatin M/E,Cystatin 6,CST6)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达情况及其与颈部淋巴结转移的相关性,以及CST6表达与PTC细胞恶性生物学行为的关系,并初步探索其作用通路。方法:选取119例PTC患者,应用免疫组化检测PTC及甲状腺滤泡上皮组织中CST6蛋白的表达情况,通过RT-qPCR、Western Blot检测CST6在人甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1、K1、B-CPAP以及人甲状腺正常细胞株Nthy-ori 3-1中蛋白表达水平。根据表达情况筛选并构建CST6过表达及干扰细胞株,通过Transwell及Wound-Healing实验测定PTC细胞侵袭、迁移能力变化。Western Blot检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)关键蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)变化趋势。结果:与正常甲状腺组织相比,CST6在PTC组织中表达水平较低,并且CST6在pN1患者甲状腺滤泡上皮与pN0患者甲状腺癌组织中高表达。CST6表达水平与肿瘤长径(P<0.0001)以及颈部淋巴结转移(P<0.0003)相关。与OE-CST6组相比,sh-CST6组具有更强烈的侵袭、迁移趋势。同时sh-CST6组E-cadherin蛋白表达明显下调,N-cadherin及Vimentin蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:CST6作为保护性因子,在PTC中低表达,其表达程度与淋巴结转移相关。过表达CST6蛋白能抑制PTC细胞迁移、侵袭能力,同时减少经上皮-间质转化途径导致的颈部淋巴结转移。

关键词： 肺癌   LncRNA NEAT1   miR-582-5p/COL5A1   生物学功能  

摘要： 目的:探讨长链非编码RNA富含核的丰富转录物1(LncRNA NEAT1)调控miR-582-5p/COL5A1信号通路对肺癌A549细胞生物学功能的影响。方法:体外培养人肺癌A549细胞并随机分为对照组、si-NEAT1组(转染LncRNA NEAT1 siRNA质粒)、miR-582-5p mimics组(转染miR-582-5p mimics)、si-NC+miR-582-5p-NC组(共转染LncRNA NEAT1 siRNA阴性对照与miR-582-5p阴性对照)、si-NEAT1+miR-582-5p inhibitor组(共转染LncRNA NEAT1 siRNA质粒与miR-582-5p inhibitor),分组转染后以实时荧光定量PCR实验检测细胞LncRNA NEAT1、miR-582-5p、COL5A1表达;构建其裸鼠移植瘤模型,测量裸鼠移植瘤质量、体积。以CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖;以免疫印迹实验检测细胞及裸鼠移植瘤组织增殖相关蛋白(cyclin D1、PCNA)表达;以Transwell实验检测细胞迁移及侵袭;以免疫印迹实验检测细胞上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(Vimentin、MMP2、E-cadherin)表达;以双荧光素酶报告基因实验检测细胞中LncRNA NEAT1对miR-582-5p、miR-582-5p对COL5A1的靶向调控作用。结果:与对照组相比,si-NEAT1组、miR-582-5p mimics组细胞COL5A1 mRNA表达、细胞活力和克隆形成率、裸鼠移植瘤质量和体积、细胞及裸鼠移植瘤组织cyclin D1、PCNA蛋白表达、细胞迁移和侵袭数目、细胞Vimentin和MMP2蛋白表达均降低(P<0.05),细胞miR-582-5p表达、E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05);si-NC+miR-582-5p-NC组各指标均无显著差异(P>0.05)。与si-NEAT1组相比,si-NEAT1+miR-582-5p inhibitor组细胞COL5A1 mRNA表达、细胞活力和克隆形成率、裸鼠移植瘤质量和体积、细胞及裸鼠移植瘤组织cyclin D1、PCNA蛋白表达、细胞迁移和侵袭数目、细胞Vimentin和MMP2蛋白表达均升高(P<0.05),细胞miR-582-5p表达、E-cadherin蛋白表达均降低(P<0.05)。LncRNA NEAT1可靶向下调A549细胞miR-582-5p,且miR-582-5p可靶向下调A549细胞COL5A1(P<0.05)。结论:敲低LncRNA NEAT1可通过上调miR-582-5p表达而降低COL5A1表达,从而抑制肺癌A549细胞的体内外生长,并可减弱其侵袭与迁移活性。

关键词： 骨髓间充质干细胞   传代   长期培养   能量代谢   衰老  

摘要： 背景:人骨髓间充质干细胞体外长期传代培养后是否能保持其生物学特性、能量代谢方式和多向分化潜能等仍存在争议,有待于进一步全面系统研究。目的:观察体外长期传代培养对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响。方法:人骨髓间充质干细胞体外培养至第5,10,15代,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期;成脂、成骨、成软骨诱导分化检测细胞多向分化潜能;划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力;能量代谢分析仪检测细胞线粒体氧化磷酸化和糖酵解能力;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况;Western blot检测细胞衰老标记蛋白p21、p16、p53表达。结果与结论:第5,10,15代骨髓间充质干细胞均呈贴壁生长,第15代细胞体积增大,增殖能力降低,S期细胞百分比减少(P<0.05);随着传代次数的增加,细胞划痕愈合和侵袭能力逐渐减弱(P<0.05),成脂、成骨和成软骨分化潜能未见显著性差异,细胞线粒体氧化磷酸化和糖酵解能力逐渐降低(P<0.05)。随着传代次数的增加,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞增多(P<0.05),衰老标记蛋白p21、p16、p53表达逐渐增加(P<0.05)。结果表明:长期传代培养的骨髓间充质干细胞的生物学特性发生变化,第10代以后骨髓间充质干细胞可能由于衰老导致活性降低。采用第10代以内的骨髓间充质干细胞更适合于临床研究/治疗。

关键词： 三氯生   牙髓干细胞   增殖   分化   活性氧   氧化应激   炎性因子   线粒体膜电位   PI3K/Akt/mTOR   牙髓组织  

摘要： 目的探讨环境污染物三氯生(triclosan,TCS)对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)的多种生物学特性是否有消极影响,以及TCS在大鼠体内牙髓组织的分布情况和危害,为DPSCs的临床应用和TCS的安全性提供依据。方法获得武汉科技大学附属天佑医院医学伦理委员会批准,收集离体牙,分离、培养并鉴定人来源的DPSCs,在DPSCs体外培养液中加入0~0.08 mmol/L的TCS,通过CCK-8检测DPSCs的增殖能力,划痕实验检测DPSCs的迁移能力,诱导三系分化检测DPSCs的分化能力,检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、转化生长因子-β(transforming growth fac-tor-β,TGF-β)的基因或蛋白表达,荧光染色分析DPSCs生成活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平,荧光探针检测DPSCs线粒体膜电位的改变,以及检测DPSCs的PI3K/Akt/mTOR、p38和JNK通路活性。获得武汉科技大学实验动物伦理委员会批准,建立50 mg/kg/d的TCS短期灌胃暴露2个月的大鼠模型,收集并通过液相色谱-质谱联用法检测大鼠肝脏、大脑和牙髓组织中的TCS浓度。结果0.02 mmol/L、0.04 mmol/L和0.08 mmol/L的TCS在与人来源DPSCs接触的第5天和第7天显著抑制了其增殖能力;0.04 mmol/L和0.08 mmol/L的TCS在接触第3天显著抑制了DPSCs的迁移能力和三系分化能力,诱导了促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS以及TGF-β的基因或蛋白表达,抑制了抗炎因子IL-10的蛋白表达;0.04 mmol/L和0.08 mmol/L的TCS在接触第1天诱导了DPSCs的ROS产生,降低了DPSCs的线粒体膜电位,并在第3天抑制了DPSCs的PI3K/Akt/mTOR通路活性,增强了p38通路活性,不影响JNK通路活性;大鼠短期TCS灌胃暴露后,在肝脏(430ng/mL)和大脑(41.4ng/mL)组织中检测到TCS存在,牙髓中未检测到,TCS分布浓度最高的肝脏未出现明显组织病理学变化。结论TCS对DPSCs的多种生物学特性具有抑制作用,对生物体具有潜在风险;短期TCS暴露大鼠的牙髓组织中没有TCS,大鼠健康未受到损害。

关键词： 成果导向   医学细胞生物学   实验教学   举措  

摘要： 随着医疗条件的进步和教育体制的改革,社会对学生的综合素质越来越关注。医学细胞生物学作为一门基础的医学课程,对于医学生认知细胞、开展后期学习起到了关键性的作用。成果导向教育作为一种新兴的理念,将其应用于医学细胞生物学实验教学改革可以充分调动学生的积极性,便于学生深入理解医学知识,提升教学质量。基于此,本文在简单介绍了成果导向教育的相关概念后,着重阐述了在成果导向教育视角下医学细胞生物学实验教学改革的举措,以创新教学模式,提升学生的综合能力。

关键词： 实验教学   课堂积极性   动手能力   技能培养  

摘要： 通过对大学细胞生物学实验教学的优化不仅是能够加深学生对细胞结构以及功能原理的理解,还还可以更好地培养学生的科研素养、动手能力和创新思维。同时对实验设计进行优化,引入各种先进技术,不仅仅是可以增强教学的互动性,激发学生的兴趣,还有助于提高实验的效果。本文针对大学细胞生物学实验教学过程中普遍存在的学生参与度低、积极性不足、获得教学信息存在参差、教学器材和实验试剂利用率不足等问题,对实验教学进行了优化改进,有效地提高了细胞生物学实验教学过程中传递知识、培养技能的效率。

关键词： 甲状腺乳头状癌细胞   长链非编码RNA PCED1B反义链1   肉瘤融合蛋白   MAPK信号通路  

摘要： 目的:探讨长链非编码RNA PCED1B反义链1(long noncoding RNA PCED1B antisense strand 1,lncRNA PCED1B-AS1)对甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)细胞增殖、迁移、侵袭与凋亡的影响及作用机制。方法:体外培养人PTC细胞,RT-qPCR检测PCED1B-AS1和肉瘤融合蛋白(fused in sarcoma,FUS)的表达情况;Transwell检测敲减/过表达PCED1B-AS1与FUS对PTC细胞迁移与侵袭的影响;CCK-8和平板克隆实验分析敲减PCED1B-AS1或过表达FUS对PTC细胞增殖的影响;流式细胞术测定敲减PCED1B-AS1对PTC细胞凋亡的影响;生物信息学和RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)实验确定PCED1B-AS1和FUS的靶向结合;荧光原位杂交实验验证PCED1B-AS1和FUS是否存在共定位;Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated pro⁃tein kinase,MAPK)信号通路相关蛋白的表达。结果:(1)与正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1相比,PTC细胞PCED1BAS1表达水平显著升高,FUS表达水平显著降低(P<0.05);(2)敲减PCED1B-AS1与过表达FUS均抑制细胞迁移、侵袭和增殖,促进细胞凋亡(P<0.05);(3)生物信息学分析和RIP验证了PCED1B-AS1与FUS存在靶向结合(P<0.05);(4)PCED1B-AS1和FUS在细胞质中存在共定位;(5)抑制PCED1B-AS1降低MAPK家族蛋白p-ERK1/2、p-JNK和p-P38水平(P<0.05)。结论:lncRNA PCED1B-AS1可抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移与侵袭,促进其凋亡,其机制可能与FUS的表达及MAPK信号通路有关。

关键词： 增生性瘢痕   成纤维细胞   转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads   生物学功能  

摘要： 该文探讨了熊果酸对瘢痕成纤维细胞生物学功能及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路的影响。取对数生长期的增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB),用不同剂量熊果酸(0、10、20、30、40、50、60μmol/L)干预HSFB后,MTT法确定细胞存活率;将HSFB分为对照组(0μmol/L熊果酸)、L熊果酸组(20μmol/L熊果酸)、M-熊果酸组(40μmol/L熊果酸)、H-熊果酸组(60μmol/L熊果酸)、H熊果酸+SRI-011381组(60μmol/L熊果酸+10μmol/L TGF-β1/Smads通路激活剂SRI-011381)。流式细胞术和TUNEL染色测定细胞凋亡情况;Transwell实验测定细胞迁移和侵袭能力;Western blot测定各组中TGF-β1/Smads通路蛋白(TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3、Smad4)、纤维化蛋白(Col 1A1、Col 3A1、α-SMA)及凋亡蛋白(Bax、Bcl-2)的表达情况。结果显示,随着熊果酸浓度的增加,HSFB存活率逐渐降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。与0μmol/L熊果酸对比,10、20、30、40、50、60μmol/L熊果酸处理后细胞存活率降低,差异显著(P<0.05)。与对照组对比,L-熊果酸组、M-熊果酸组和H熊果酸组的HSFB凋亡率、TUNEL阳性细胞比例、Bax蛋白表达水平均升高(P<0.05),迁移细胞数量、侵袭细胞数量以及纤维化标记蛋白(Col 1A1、Col 3A1、α-SMA)、Bcl-2、TGF-β1/Smads通路相关蛋白表达水平均降低(P<0.05),且熊果酸高剂量相比于低剂量变化程度更显著(P<0.05);与H熊果酸组对比,H-熊果酸+SRI-011381组的HSFB凋亡率、TUNEL阳性细胞比例、Bax蛋白表达水平均降低(P<0.05),迁移细胞数量、侵袭细胞数量以及纤维化标记蛋白(Col 1A1、Col 3A1、α-SMA)、Bcl-2、TGF-β1/Smads通路相关蛋白表达水平均升高(P<0.05)。由此提示,熊果酸可有效抑制HSFB的增殖、侵袭、迁移和纤维化,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制TGF-β1/Smads信号通路激活有关。

关键词： 细胞生物学实验   经典案例的过程的重现   创新  

摘要： 高等教育细胞生物学实验的教学目的是激发学生发现生物学科学问题,提高高校学生利用合适的细胞生物学技术解决生物学科学问题,最终助力学生形成一套自然科学类探究的思辨思维和创新创造能力。然而,目前的细胞生物学实验教材在内容上忽略了实验过程的设置,从而导致学生只是按照细胞生物学实验课教材按部就班,不多问每一步实验步骤的为什么,大大降低了细胞生物学实验课对学生创新创造能力的培养。本文详细罗列了细胞生物学实验教学中存在的问题以及针对目前的问题我们提出的解决方案。

关键词： 在线课程   细胞生物学   精品课程   教学设计  

摘要： 随着互联网信息技术的快速发展,“互联网+教育”已经成为教育领域的热门话题。在线开放课程作为互联网快速发展和高等教育相结合的产物,不拘泥于固定场所和时间,是对传统教学方式的补充和延伸,采用线上线下相结合的授课方式逐渐成为主流。细胞生物学目前已经成为农业院校生命学院本科生的专业核心必修课程,理论知识点比较抽象,建设细胞生物学在线开放课程体现了以学生为主体的教育理念。通过明确课程定位与目标,加强课程团队建设,优化课程内容设计,加速课程资源库和习题库建设,建设农业院校细胞生物学在线开放课程。利用在线开放课程结合线下教学,通过课前预习、课堂教学和课后评价等方面的实施,提升课堂教学效果。