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关键词： 细胞骨架   免疫荧光   实验教学   应用  

摘要： 将间接免疫荧光技术应用到细胞骨架的观察实验教学中,以48孔板培养细胞,控制细胞密度为50%~80%,以鼠抗人tubulin的单克隆抗体和FITC标记的羊抗鼠的荧光二抗对微管蛋白进行间接免疫标记,通过可视倒置荧光显微镜观察细胞骨架的形态和分布,提高了教学效果,增强了学生的科研兴趣和综合素质。

关键词： miR-25-3p   子宫内膜腺癌   增殖   迁移   侵袭   细胞凋亡  

摘要： 目的探讨miR-25-3p在子宫内膜腺癌组织中的表达及其对KLE细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。方法选取2018年1月至12月在河北医科大学第四医院妇科行手术治疗的子宫内膜腺癌患者40例,采用Real-time PCR方法检测癌和癌旁正常组织中miR-25-3p的表达水平;应用细胞转染技术将miR-25-3p模拟物转染至子宫内膜腺癌细胞KLE中,转染后分为过表达组和对照组;采用Real-time PCR方法检测转染后两组KLE细胞中miR-25-3p的表达水平;分别应用流式细胞术、Transwell试验、基质胶试验及流式细胞Annexin v-PI双染实验检测两组细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡能力。结果miR-25-3p在40例子宫内膜腺癌和癌旁组织中的相对表达量分别为0.38±0.91、0.17±0.51,癌组织表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(t=12.28,P=0.003);增殖实验检测结果显示,两组增殖指数分别为(59.41±0.78)%、(40.69±0.78)%,过表达组高于对照组,差异有统计学意义(各期两组间均值差异均有统计学意义:G0G1期t=12.504,P<0.001;S期t=6.902,P=0.020;G2M期t=4.203,P=0.014;PI期t=12.475,P<0.001);迁移实验检测结果显示,两组迁移细胞个数分别为(28.54±1.73)个、(19.21±1.62)个,过表达组高于对照组,差异有统计学意义(t=8.404,P=0.001);侵袭实验检测结果显示,两组的侵袭细胞个数分别为(36.66±1.53)个、(17.66±1.53)个,过表达组高于对照组,差异有统计学意义(t=15.234,P<0.001);凋亡检测结果显示,两组的细胞凋亡率分别为(2.75±0.58)%、(4.81±0.31)%,过表达组低于对照组,差异有统计学意义(t=5.443,P=0.006)。结论miR-25-3p在子宫内膜腺癌组织中呈高表达。过表达miR-25-3p可能促进子宫内膜腺癌细胞KLE的增殖、迁移和侵袭,抑制细胞的凋亡。

关键词： 糖尿病   骨生成   成骨细胞   破骨细胞  

摘要： 糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一种以血糖异常增高为特征的全身代谢紊乱性疾病,口腔临床与其密切相关,可表现为牙周炎严重骨流失,种植体骨结合不良以及颌面部骨缺损修复效果不佳等。近年来为解决复杂多样的糖尿病环境下的骨再生骨修复难题,在材料表面改性、活性物质负载等方面创新不断,这都与骨生成细胞在糖尿病环境中的增殖、分化及功能活性等基础实验研究密切相关。本文就近年糖尿病对骨生成的细胞生物学机制进展作一综述,重点阐述体外实验条件下高糖刺激对间充质干细胞、成破骨细胞及其平衡的影响及相关分子机制,其中包括分子调控新进展和一些互相矛盾或与体内实验相对矛盾的结果。除高糖刺激单独作用之外,文章另外也简要阐述了其与炎性细胞因子、氧化应激等因素协同作用和糖尿病血清研究结果,为糖尿病患者的骨再生治疗及进一步研究提供参考。

关键词： HU-308   静电纺丝   纳米羟基磷灰石   成骨细胞  

摘要： 目的探讨不同浓度HU-308与纳米羟基磷灰石与聚己内酯(nHA/PCL)电纺丝膜对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1生物学性能的影响。方法将静电纺丝膜制成圆形薄膜置于细胞培养板底部,使用含不同浓度HU-308(0、10^-10^、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6 mol/L)的培养液培养MC3T3-E1细胞;培养1、4、7 d,进行CCK-8检测增殖检测及碱性磷酸酶(ALP)活性的检测;Real Time-PCR检测培养7 d时细胞成骨相关基因OPG mRNA表达,观察培养24 h细胞骨架的形态。结果培育1、4、7 d后,与对照组相比,各实验组间细胞增殖活性增强,P<0.05;随着培育时间的延长,同一实验组细胞增殖活性逐渐增强,P<0.05。随着培育时间的延长,同一实验组MC3T3-E1细胞中的ALP活性增加,P<0.05。在相同时间点,与对照组比较,低浓度HU-308(10^-10^mol/L、10^-9 mol/L)促进OPG mRNA的表达,P<0.05;高浓度HU-308对OPG mRNA的表达起抑制作用,且浓度越高抑制作用越明显,P<0.05。成骨细胞随药物浓度的加大,细胞铺展面积有增大趋势且细胞骨架结构更加清晰,尤以10^-6 mol/L浓度组成骨细胞伸展范围最广。结论HU-308和nHA/PCL电纺丝膜可促进MC3T3-E1细胞的黏附、增殖和分化。

关键词： 利拉鲁肽   人附睾蛋白4   乳腺癌   PI3K/AKT通路   ERK通路  

摘要： 目的研究利拉鲁肽对乳腺癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法MTT法筛选利拉鲁肽干预乳腺癌MCF-7细胞的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50),构建人附睾蛋白4(human epididymis protein 4,HE4)基因沉默(si-HE4)重组质粒转染MCF-7细胞。将细胞分为对照组、阴性对照(si-NC)组、si-HE4组、利拉鲁肽组、si-HE4+利拉鲁肽组,划痕实验观察细胞迁移;Transwell小室实验观察细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测HE4、Bad、Bcl-2、Caspase-3、p-PI3K、p-AKT及p-ERK表达水平。结果与对照组相比,si-HE4组、利拉鲁肽组和si-HE4+利拉鲁肽组细胞的迁移和侵袭能力均降低,凋亡率明显升高(均P<0.05),HE4、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT及p-ERK表达均明显降低(均P<0.05),Bad、Caspase-3蛋白表达明显升高(均P<0.05)。上述差异在si-HE4+利拉鲁肽组更明显(P<0.05)。结论利拉鲁肽可抑制乳腺癌MCF-7细胞HE4的表达,下调PI3K/AKT和ERK通路相关蛋白的表达,影响乳腺癌细胞细胞生物学特性。

关键词： 肺肿瘤   长链非编码RNA   LRRC77P   细胞增殖   细胞迁移  

摘要： 目的探讨长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA)LRRC77P在肺腺癌组织和细胞系中的表达及其作用机制。方法采用qRT-PCR法检测LRRC77P在67例肺腺癌组织和5种肺腺癌细胞系中的表达。利用阴性对照慢病毒和载有LRRC77P序列的慢病毒分别感染LRRC77P表达最少的肺腺癌细胞,分别命名为对照组和实验组。MTT法和细胞划痕实验分别检测高表达LRRC77P对肺腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。生物信息学预测LRRC77P的下游基因。qRT-PCR和Western blot检测高表达LRRC77P对下游基因表达的影响。结果LRRC77P在肺腺癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.01)。LRRC77P在肺腺癌细胞系中的表达显著低于正常肺泡上皮细胞(P<0.01),LRRC77P在H1299细胞中的表达最少(P<0.01)。高表达LRRC77P可显著抑制H1299细胞的增殖(P<0.05)和迁移能力(P<0.01)。生物信息学预测LRRC77P可互补结合miR-182-5p,miR-182-5p可互补结合PCDH10。高表达LRRC77P可显著抑制H1299细胞中miR-182-5p的表达(P<0.01),促进PCDH10 mRNA和蛋白的表达水平(P<0.01)。结论LRRC77P在肺腺癌组织及细胞系中呈低表达,高表达LRRC77P可显著抑制肺腺癌H1299细胞的增殖和迁移能力,其作用机制是LRRC77P通过抑制miR-182-5p间接促进PCDH10基因的表达。

关键词： 生物物理学   学术期刊   系统生物学   神经科学   细胞生物学   栏目设置   基因组学   学科范围  

摘要： 1征稿范围与栏目设置1.1征稿范围本刊为国内外公开发行的全国性学术期刊,月刊,每月20日发行.征稿的学科范围是生物化学、分子生物学、生物物理学、细胞生物学、神经科学、免疫学,以及基因组学、蛋白质组学、系统生物学等相关学科领域.

关键词： 翻转课堂   PBL教学法   实验教学  

摘要： 传统教学模式已不能满足现代医学学生培养的需要,翻转课堂与PBL教学法都是新的教学模式,能提高学生创新思维能力、自主学习能力,两者结合使用,能相互弥补缺点,充分发挥各自优点。通过将翻转课堂与PBL教学法相结合,在现代网络通信的协助下,应用于医学细胞生物学实验教学中,结果发现这种教学方式能促使学生主动学习,能培养学生的创新思维以及团队协作能力,能满足现代医学教学的需要。

关键词： lncRNA MIR4435-2HG   miR-873-5p   神经母细胞瘤   增殖   凋亡  

摘要： 目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)MIR4435-2HG通过靶向调控miR-873-5p影响小儿神经母细胞瘤细胞生物学功能的作用。方法:RT-qPCR检测神经母细胞瘤组织和细胞中lncRNA MIR4435-2HG和miR-873-5p表达。在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中转染si-MIR4435-2HG,MTT和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的多聚ADP-核糖聚合酶(Cleaved PARP)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达,生物学信息预测与双荧光素酶报告实验验证MIR4435-2HG和miR-873-5p的靶向关系。在SK-N-SH细胞中转染miR-873-5p,观察其在细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭中的作用。si-MIR4435-2HG和anti-miR-873-5p共转染干扰miR-873-5p对沉默MIR4435-2HG诱导的SK-N-SH细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结果:神经母细胞瘤组织和细胞中MIR4435-2HG表达明显上升,miR-873-5p表达显著下降(P<0.05)。沉默MIR4435-2HG可明显降低SK-N-SH细胞存活率、迁移数、侵袭数、Ki-67、CDK2、MMP-2和MMP-9蛋白表达,显著提高细胞凋亡率、Cleaved caspase-3、Cleaved PARP蛋白水平(P<0.05)。MIR4435-2HG靶向调控miR-873-5p表达。转染miR-873-5p可抑制SK-N-SH细胞增殖、迁移、侵袭、Ki-67、CDK2、MMP-2、MMP-9蛋白表达并诱导细胞凋亡,上调Cleaved caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达。干扰miR-873-5p可部分逆转沉默MIR4435-2HG对SK-N-SH细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。结论:lncRNA MIR4435-2HG通过靶向miR-873-5p调控神经母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。

关键词： 消退素E1   牙髓干细胞   氧化应激  

摘要： 目的探讨消退素E1(resolvin E1,RvE1)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导的氧化应激下人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)生物学性能的影响。方法采用酶解组织块法体外分离培养hDPSCs,免疫荧光染色检测hDPSCs中RvE1受体ChemR23的表达情况;hDPSCs随机分为3组,对照组、H2O2组和H2O2+RvE1组,H2O2组和H2O2+RvE1组加入200 nmol/L H2O2预处理建立细胞氧化应激模型,24 h后,对照组和H2O2组换用完全培养基继续培养,H2O2+RvE1组则换用加入100 nmol/L RvE1的完全培养基继续培养,苏木素-伊红(HE)染色和鬼笔环肽染色观察hDPSCs形态学改变;cck-8、划痕实验、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和活性定量及RT-qPCR检测DMP1和DSPP基因水平分别检测hDPSCs增殖、迁移和成牙向分化能力的改变。结果ChemR23在hDPSCs中广泛表达;与对照组相比,H2O2组的hDPSCs形态异常,增殖、迁移和成牙向分化能力显著降低(P<0.05),与H2O2组相比,H2O2+RvE1组的hDPSCs增殖、迁移和分化能力明显增强(P<0.05)。结论RvE1促进氧化应激下的hDPSCs增殖、迁移及成牙向分化。