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关键词： 乳腺癌   乳腺癌干细胞   ZEB1   LUCAT1   转录因子   非编码RNA  

摘要： 目的:女性乳腺癌是目前全球发病率最高的恶性肿瘤,乳腺恶性肿瘤在肿瘤内部及肿瘤间包含大量异质的遗传信息和表观遗传信息。乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs)这一微量细胞亚群是肿瘤发生、自我更新和异质性的驱动因素,是肿瘤耐药、放疗抵抗和复发转移的根源。将BCSCs作为靶点进行肿瘤治疗的模式具有较大的探索空间和临床价值。因此找到特异性的肿瘤干细胞指标及对其生物学特性和分子机制的研究具有现实意义。转录因子锌指E-盒结合同源异形盒1(zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)对于调控细胞分化和组织特异性方面具有重要作用,其是转录因子ZEB家族的重要成员。ZEB1可以通过调控恶性肿瘤的上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)促进肿瘤的恶性表型,在多种恶性肿瘤中呈现异常表达,其调控肿瘤细胞顺应性,在肿瘤发生发展的各个阶段起着关键作用。本研究望明确ZEB1在不同临床病理因素下的乳腺癌组织中的表达水平,并分析其表达与生存预后之间的关系,同时进一步阐明ZEB1在促进乳腺癌肿瘤干细胞特性的生物学特性及其独立于EMT的分子调控机制,有望发现BCSCs新的基因表达调控网络,为乳腺癌干细胞靶向治疗提供一全新的理论方向,同时为深入研究ZEB1在恶性肿瘤中非EMT依赖的调控机制补充证据。研究方法:1.诱导MCF-7 CSCs和T47D CSCs乳腺癌干细胞系并对其BCSCs样特性进行鉴定:使用无血清悬浮条件培养,将乳腺癌细胞MCF-7和T47D诱导成乳腺癌干细胞MCF-7 CSCs和T47D CSCs。进行形态学观察,同时通过q RT-PCR、Western blot检测相关干性指标表达的变化,通过流式细胞术、琼脂糖克隆形成实验、CCK-8实验和Transwell迁移等细胞实验鉴定MCF-7 CSCs和T47D CSCs的乳腺癌干细胞样特征。2.基于生物信息学的分析:提取TCGA中RNA-Seq数据,分析ZEB1在CD44CD24及非CD44CD24乳腺癌患者中表达的差异,同时分析干性通路相关指标在ZEB1高表达和低表达患者之间的差异。3.乳腺癌组织样本中ZEB1的表达及临床意义分析:在110例乳腺癌组织中检测ZEB1(免疫组化)和LUCAT1(免疫原位杂交)的表达,应用Pearson卡方检验和logistic回归分析ZEB1与临床病理因素及LUCAT1表达的相关性,通过Kaplan-Meier生存分析,统计ZEB1高表达与低表达乳腺癌患者的预后生存差异。4.细胞学实验:通过质粒转染构建ZEB1和LUCAT1过表达和沉默的细胞模型,通过转染mimic或inhibitor在细胞系中建立mi RNA的不同表达。利用q RT-PCR和Western blot检测乳腺癌干细胞相关标志物的表达水平;在相应细胞系中进行平板克隆实验和球囊形成实验,以检测细胞的增殖和自我更新能力;同时通过流式细胞术检测乳腺癌干细胞表面标志物CD44和CD24的表达,明确不同细胞系间CD44CD24细胞亚群的占比差异。5.相关靶基因的生物信息学预测及分子机制的研究:本研究利用了JASPAR、mi Randa及Target Scan等生物信息学数据库,对相关基因的潜在结合位点进行生信预测;ZEB1和LUCAT1启动子、mi R-5582-3p和ZEB1之间的特异性结合序列通过双荧光素酶报告基因实验进行验证;通过染色质免疫共沉淀验证ZEB1与LUCAT1启动子区的直接结合;RNA pull down实验验证mi R-5582-3p与ZEB1的特异性结合。结果:1.经过悬浮诱导培养后,MCF-7和T47D的细胞形态发生明显变化,呈球囊样生长;与亲本细胞相比,干细胞标记物OCT4、NANOG和SOX2的m RNA和蛋白水平表达提高(p<0.05);MCF-7 CSCs和T47D CSCs中CD44CD24细胞群的比例提高(p<0.0001);克隆形成能力显著增强(p<0.01),MCF-7 CSCs和T47D CSCs具有更强的迁移能力(p<0.01),对紫杉醇具有明显的药物抵抗。***1在乳腺癌组织中的表达与淋巴结转移(p<0.001),HER2阳性表达(p<0.001),Ki-67状态(p=0.014),组织学分级(p=0.042)和TNM分期(p<0.001)相关。ZEB1表达较高的患者的总生存(HR=2.37,p=0.002)和无病生存期(HR=1.910,p=0.038)较短。***分析提示ZEB1在CD44CD24的乳腺癌患者中高表达(p<0.05),且与Hedgehog干性通路相关指标的表达呈正相关(p<0.0001)。***1促进乳腺

关键词： 子宫颈癌   癌细胞   微小RNA203   泛素连接酶2   靶基因  

摘要： 目的：　　经本实验组前期研究表明，与正常宫颈组织相比，宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织等病变组织，由于启动子区高甲基化抑制miR-203的转录过程，引起了miR-203在病变组织中的表达下调。但miR-203对宫颈癌变过程的影响，及其在宫颈癌中靶向调控的基因研究甚少。　　明确miR-203对宫颈癌细胞株SiHa（HPV16阳性）生物学特性的影响，如增殖、迁移和凋亡，初步探讨miR-203调控上述生物学特性的靶基因，进而为研究宫颈癌的基础研究（病因学和发病机制）提供理论依据，为阻断宫颈癌的发生发展过程提供新思路。　　方法：　　1.实时荧光定量PCR技术检测正常组织和宫颈癌组织及人永生化表皮细胞HaCaT和宫颈癌细胞株SiHa细胞（HPV16阳性）中miR-203的表达情况。　　2.将miR-203模拟物及抑制物相关片段通过细胞瞬时转染技术转染到宫颈癌细胞株SiHa中，建立miR-203过表达和低表达的SiHa细胞模型，通过免疫荧光初步定性的确定转染效率，实时荧光定量PCR进一步相对定量的确认转染效率。　　3.在转染24h和48h后，通过CCK8法分别检测miR-203过表达和低表达的SiHa细胞模型中增殖的情况。　　4.在转染24h和48h后，通过划痕实验检测miR-203过表达和低表达的SiHa细胞模型中迁移的情况。　　5.在转染48h后，通过流式细胞术检测miR-203过表达和低表达的SiHa细胞模型中凋亡的情况。　　6.通过生物信息学基因预测网站Target鉴定CUL2是对miR-203的潜在的靶基因，双荧光素酶实验验证CUL2是miR-203的靶基因。　　7.实时荧光定量PCR技术检测正常组织和宫颈癌组织及人永生化表皮细胞HaCaT和宫颈癌细胞株SiHa细胞（HPV16阳性）中CUL2的mRNA表达情况。　　8.在转染48h后，通过实时荧光定量PCR技术和Western-blot技术分别检测miR-203过表达和低表达的SiHa细胞模型中CUL2的表达水平。　　结果：　　1.与正常组织相比，宫颈癌组织中miR-203的表达显著降低;与人永生化表皮细胞HaCaT相比，宫颈癌细胞株SiHa（HPV16阳性）中的miR-203的表达水平显著降低。　　2.免疫荧光和实时荧光定量PCR两种方法可确定各种序列的转染效率高达90%，所以，可建立稳定的miR-203过表达和低表达的SiHa细胞模型。　　3.与miR-203mimicsNC组相比，随着转染处理后时间的推移，miR-203mimics组的SiHa细胞增殖和迁移能力有下降的趋势，在转染处理达到48h时，miR-203mimics组的SiHa细胞增殖和迁移能力显著降低。与miR-203inhibitorNC组相比，随着转染处理后时间的推移，miR-203inhibitor组的SiHa细胞增殖和迁移能力有上升的趋势，在转染处理时间48h时，miR-203inhibitor组的SiHa细胞增殖和迁移能力显著升高。　　4.转染48h后，与miR-203mimicsNC组相比，miR-203mimics组的SiHa凋亡细胞数目显著增多，而与miR-203inhibitorNC组相比，miR-203inhibitor组的SiHa凋亡细胞显著减少。　　5.生物信息学基因预测的结果显示，CUL2可通过其198-204位碱基与miR-203的3’UTR高度互补结合，配对方式为7mer-8m，Context++scorepercentile为97（gt;90），由此推测CUL2是miR-203有功能的靶基因;双荧光素酶系统检测显示miR-203和CUL2有直接结合。　　6.与正常组织相比，宫颈癌组织中CUL2的表达显著升高;与人永生化表皮细胞HaCaT相比，宫颈癌细胞株SiHa（HPV16阳性）中的CUL2的表达水平显著升高。　　7.转染48h后，在蛋白水平和mRNA水平都出现了一致的结果，与miR-203mimicsNC组相比，miR-203mimics组的CUL2的表达水平明显降低，而与miR-203inhibitorNC组相比，miR-203inhibitor组的CUL2的表达水平明显升高。　　结论：　　***16阳性的宫颈癌细胞株SiHa中，miR-203表达下调;miR-203低表达会促进利于宫颈癌发生发展的生物学特性（增殖和迁移），同时抑制不利于宫颈癌发生发展的生物学特性（凋亡）;相反，在miR-203过表达会抑制SiHa细胞增殖和迁移，同时促进SiHa细胞的凋亡，由此推测，miR-203参与HPV16E7介导的宫颈癌变过程，实现对子宫颈癌细胞生物学功能的调控。　　***16阳性的宫颈癌细胞株SiHa中，CUL2的表达上调;miR-203低表达会促进SiHa细胞表达CUL2，miR

关键词： 组蛋白甲基化转移酶   骨髓源性巨噬细胞   组蛋白赖氨酸甲基化   细胞生物学  

摘要： 目的：　　表观遗传学修饰对细胞生物学功能具有重要影响。本研究探讨组蛋白甲基化转移酶SETD4对骨髓来源巨噬细胞（BMMs）一般物生物学功能的影响及其机制。　　方法：　　1．繁育SETD4基因敲除C57BL/6J杂合子小鼠，分别得到野生型（SETD4WT）和纯合子SETD4基因敲除小鼠（SETD4KO）。　　***的分离、培养及鉴定。分别从成年SETD4WT、SETD4KO小鼠的胫骨、股骨中分离出BMMsWT及BMMsSETD4-KO。分离出的BMMs在含25%（v/v）L929成纤维细胞上清液的培养基（20%胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的DMEM培养液）中培养，7日后弃去非贴壁细胞，所得贴壁细胞即为BMMs（M0型巨噬细胞）;分别采用qRT-PCR和Western blot检测BMMs中SETD4的表达情况，免疫荧光和FCM检测F4/80的表达。　　3．细胞增殖能力分析。在常氧条件下培养BMMsWT和BMMsSETD4-KO。采用CCK-8试剂盒、EdU试剂盒测定细胞增殖能力，qRT-PCR检测Ki67mRNA的表达，流式细胞术分析细胞周期，Western blot检测细胞增殖标记物PCNA及细胞周期相关蛋白的表达。　　4．细胞抗凋亡能力分析。在低血清（2%）条件下培养细胞24h、48h、72h，Western blot检测凋亡蛋白PARP-1、Bcl-2、P53和Caspase-3的表达。　　5．细胞迁移能力的分析。运用Tanswell实验技术检测细胞的迁移能力，Western blot检测MMP-2、MMP-9的表达。　　6．诱导细胞极性分化。BMMsWT和BMMsSETD4-KO分别经LPS（100ng/mL）+IFN-γ（20ng/mL）和IL-4（20ng/mL）处理24h，采用qRT-PCR检测巨噬细胞极性化相关因子的mRNA表达。　　7．检测促血管生成能力。采用qRT-PCR检测两组M2型BMMs分泌的VEGF-A的水平，Matrigel胶成管实验检测BMMs促人脐静脉内皮细胞（HUVEC）形成血管状结构能力。　　8．组蛋白甲基化特异位点蛋白的检测。采用Western blot检测BMMsWT和BMMsSETD4-KO组蛋白H3和H4多个甲基化位点的蛋白表达差异。　　9．信号通路分析。通过半定量夹心法膜蛋白芯片检测JAK/STAT、MAPK、AKT、TGF-β和NF-κB信号表达谱，对差异蛋白进行GO注释和KEGG富集，分析SETD4敲除前后BMMs的信号通路活化的改变。　　10．用EGFR靶向抑制剂CI-1033处理BMMs细胞，分析EGFR对BMMs增殖的影响。　　11.应用RT2Profiler PCR Array技术检测BMMsWT和BMMsSETD4-KO转录因子的表达水平的差异。　　结果：　　1．基于CRIPSR/Cas9技术敲除SETD4基因全身敲除杂合子C57/BL6小鼠，繁殖并鉴定出合格的SETD4WT和SETD4KO子代小鼠。　　2．分别从成年SETD4WT和SETD4KO小鼠成功分离出相应BMMs，标记为为BMMsWT和BMMsSETD4-KO，F4/80表达阳性率达95%以上;Western blot证实SETD4KO组BMMs中SETD4mRNA及蛋白表达显著缺失。　　***4敲除后改变BMMs细胞周期，表现为G2/M期增加，CyclinA2、CyclinB1、CyclinD1、CDK2和CDK4明显上调。　　***4敲除后早期一定程度上调BMMs中Bcl-2和P53蛋白表达。　　5．与BMMsWT相比，SETD4KO显著增强了BMMs细胞增殖活性、EdU阳性细胞比例、Ki67mRNA和PCNA蛋白水平。　　6．与BMMsWT相比，SETD4KO细胞迁移能力轻度下降但无显著性差异。　　7．与BMMsWT相比，SETD4KO分泌VEGF-A和促进HUVEC形成血管状结构能力轻度下降但无显著性差异。　　8．与BMMsWT相比，经LPS+IFN-γ和IL-4刺激后，SETD4KO除少数因子如TNF-1α显著增加外，其余大多数因子如IL1β、IL6、MCP-1、iNOS、Fizz1、Arg、MRC1等均表达下调。　　9．与BMMsWT相比，SETD4KO显著抑制了组蛋白H3K4、H3K9、H3K79、和H4K20多个位点的甲基化，如H3monoK4、H3diK4、H3monoK9、H3diK9、H3triK9、H3monoK79、H3dK79、H3triK79、H4diK20、H4triK20等。　　10．蛋白芯片分析发现SETD4敲除前后BMMs中有32个差异表达蛋白，包括6个上调表达（EGFR(Ser1070)、P27、AKT、Smad2、AMPK

关键词： 品种   种质资源   成纤维细胞   细胞生物学特性  

摘要： 籽鹅和豁眼鹅是吉林省优良地方品种,具有耐寒、耐粗饲、产蛋量高等特点,在常规杂交育种中常作为母本选择。近年来由于商业化无序杂交,加之行业与农户保护意识不足,致使血统纯度降低,极大的破坏了原始品种的群体结构,因此针对性保种迫在眉睫。本课题重点结合品种在吉林省地理分布特点,开展了品种生存地区天气、光照等地理条件的研究分析,进而开展了多地区地方品种外貌特征鉴定、种蛋采集工作,并对种蛋的蛋重、蛋形指数进行了测定;在细胞保种工作中,对达到品种标准的籽鹅种蛋进行孵化,采集12日龄籽鹅胚胎皮肤,经分离纯化细胞后,以胰酶法进行细胞培养,通过原代、传代培养、冷冻与复苏,建立了籽鹅成纤维细胞保种库,对所培养的细胞进行了生物学活力检测;进而开展传代培养细胞冻存保种工作,经复苏细胞及细胞活率的测定并达到建库标准,表明鹅胚胎皮肤成纤维细胞保种库初建成功。主要研究结果如下:1、吉林省地方鹅种及外来主要品种种质状态数据采集以吉林省西部草原白鹅带(松原、白城)、中部农区白鹅带(四平、吉林)、东部山区白鹅带(辽源、通化为主)三大养鹅带为原则进行区域划分,对鹅养殖基地与农户进行走访,收集了22个县区5个鹅品种的种蛋,测定蛋重、蛋形指数并计算孵化后受精率。在三大区域蛋重与蛋形指数性状比较分析中,籽鹅蛋重在三大区域间的差异显著(P<0.05),以松原地区为主的西部草原白鹅带蛋重最低,与中部农区白鹅带和东部山区白鹅带差异显著(P<0.05);蛋形指数在部分地区种间差异显著(P<0.05);在最适蛋形指数1.349～1.449范围内,西部草原白鹅带的籽鹅种蛋最多;各地区受精率与温度呈负相关(P<0.05)。对豁眼鹅的蛋重和蛋形指数进行比较分析得出,中部农区白鹅带的吉林地区显著高于东部山区白鹅带的通化地区(P<0.05);在最适蛋形指数1.350～1.490内范围内,东部山区白鹅带的豁眼鹅种蛋最多。在非本地品种比较中,卡洛斯鹅、霍尔多巴吉鹅和浙东白鹅蛋形指数差异不显著(P>0.05),卡洛斯鹅蛋重低于霍尔多巴吉鹅且差异显著(P<0.05)。2、籽鹅鹅胚皮肤组织成纤维细胞保种库的建立经免疫荧光鉴定,培养的细胞形态为典型的成纤维细胞,呈梭形或星形扁平状,放射性分布。鹅胚成纤维细胞生长曲线呈“S”型,经历了潜伏期、指数增生期和平顶期三个时期,细胞生长正常,符合体外生长的规律。细胞存活率测定结果表明,三代细胞复苏后活率低于冻存前活率,但活率仍在90%以上,说明细胞在进行冷冻和复苏的过程中可能受到一些损伤,但满足建库要求。在对所建鹅胚成纤维细胞进行微生物检测时,对细胞培养物进行检测分析,结果均为阴性,表明培养物未受到细菌、真菌、病毒以及支原体的污染。开展传代培养细胞冻存保种工作,经复苏细胞及细胞活率测定并达到建库标准,冻存原代、一代、二代和三代细胞共计242份样本。本课题针对吉林省鹅品种资源分布特点,以品种调查为基础,以保种为目标,开展了种质资源保护的数据收集和测定,进而通过细胞培养等手段,建立籽鹅鹅胚皮肤组织成纤维细胞保种库,从细胞保种层面上进行了进一步的探索,为未来中国鹅保种积累了保种素材与理论基础。

关键词： 自然杀伤细胞   肿瘤微环境   腺苷   免疫抑制   ADORA2A基因  

摘要： 肿瘤微环境中的多种调节因子能够帮助肿瘤细胞逃避免疫系统的杀伤,促进肿瘤生长和侵袭,甚至产生治疗抗性。其中,腺苷是肿瘤微环境免疫抑制网络中的关键调节因子之一。研究发现,微环境中的腺苷主要通过结合细胞表面的腺苷A2A受体来抑制免疫细胞的成熟和细胞毒功能。自然杀伤（NK）细胞是固有免疫系统的效应细胞,在肿瘤免疫治疗和监视中发挥重要作用。虽然NK细胞在小鼠NK细胞及其腺苷受体拮抗剂等方面已有不少的研究报道,但NK细胞在肿瘤微环境中往往处在“失能”状态,其内在机制并不十分清楚,尤其是其表面的腺苷受体在其中承担的作用知之甚少。本文以目前唯一经FDA批准用于临床免疫治疗研究的NK细胞系——NK92细胞系为研究对象,首次在体外模拟肿瘤高腺苷的微环境探究对NK细胞的功能影响,通过CRISPR/Cas9技术建立敲除ADORA2A基因（adenosine A2 a receptor）的细胞株,利用RNA-seq技术比较分析A2AR信号通路及其关键差异基因ADORA2A,为NK92细胞的肿瘤免疫治疗潜在应用提供理论依据。主要结果如下:一、评估不同浓度腺苷对NK92细胞功能的影响在浓度为0-500μM的腺苷或腺苷类似物二氯腺苷处理12 h条件下（体外模拟肿瘤高腺苷的微环境）,NK92细胞的活性及其肿瘤细胞刺激下的IFN-γ、TNF-α分泌受到了抑制;且表现出腺苷或腺苷类似物浓度越高,抑制效果越明显的特征。另外,腺苷对NK92细胞的长期增殖能力也有明显的抑制;不同腺苷浓度损害了NK92细胞对Hep G2细胞的直接杀伤作用。结果显示,体外模拟肿瘤高腺苷的微环境显著抑制了NK细胞的增殖和抗肿瘤效应。二、NK92细胞表面腺苷主要作用通路的探究利用腺苷受体特异性拮抗剂可以探明NK92细胞表面腺苷的主要作用通路。通过RT-q PCR发现腺苷A2A受体是NK92细胞上主要表达的腺苷受体,其次是腺苷A2B受体,几乎不表达腺苷A1受体。在50μM腺苷浓度下,只有A2AR特异性抑制剂ZM241385恢复了NK细胞的活性和IFN-γ分泌能力。另外,在500μM腺苷浓度下,A2BR特异性抑制剂MRS 1754恢复了NK细胞的活性。三、ADORA2A基因敲除NK92细胞系的生物学特征评估首先,利用CRISPR/Cas9技术构建了一株ADORA2A基因敲除NK92细胞系（NK92-2AK）。NK92-2AK细胞形态,表型与未敲除的NK92细胞无明显差异,NK92-2AK细胞增殖速率比野生型NK92细胞慢,但ADORA2A基因敲除不影响NK92细胞的增殖能力。腺苷处理12 h对NK92-2AK细胞活性、IFN-γ的分泌没有显著的影响;同时,NK92-2AK细胞在50μM腺苷下的体外杀伤活性显著高于野生型的NK92细胞。四、腺苷微环境下NK细胞的转录组分析通过RNA-seq技术对50μM浓度腺苷下的敲除前后的NK92细胞（NK＿50、KO＿50）进行测序分析,分别以0μM浓度腺苷下的敲除前后的NK92细胞（NK＿0、KO＿0）为对照组,筛选各比较组的差异表达基因。NK＿0 vs NK＿50中共筛选出106个差异基因,其中47个基因上调表达,59个基因下调表达;结合GO功能注释与KEGG富集分析结果。NK＿50差异表达基因与生物调节、调节生物过程、刺激的反应、代谢过程显著相关。其主要富集到癌症相关通路、细胞因子与细胞因子受体的相互作用通路和Apelin信号通路上。进一步分析细胞因子与细胞因子受体的相互作用、乳腺癌、Apelin等通路上可能参与腺苷对NK92细胞的活性,增殖和效应功能的抑制。其中EGR1、JUN、ATF3在可能属于调控的主要地位。同时参考与NK功能相关的信号通路筛选出6个免疫抑制相关基因。这为腺苷的免疫抑制奠定了分子生物学基础。KO＿0 vs KO＿50中共筛选出15个差异基因。其中4个基因上调表达,11个基因下调。结合GO功能注释与KEGG pathway富集分析结果,KO＿50差异表达基因与细胞过程、生物调节、调节生物过程、代谢过程;这些基因主要富集到核糖体通路上。编码核糖体复合物亚基的RPL9、RP30、RPL27A、RPS17基因表达量都有所下降。综上所述,本研究通过体外实验研究腺苷对ADORA2A基因敲除前后NK92细胞活性,细胞因子分泌和杀伤能力等生理生化水平的影响,以及腺苷处理下ADORA2A基因敲除前后NK92细胞的转录组分析,获得的结果初步验证了我们的假设,即腺苷是通过腺苷A2A受体对NK92细胞进行免疫抑制。化学靶向或靶向敲除A2AR可以恢复NK92细胞的功能,得到的结论有助于解释肿瘤高腺苷环境下,NK细胞抗肿瘤功能低下的机理,也可为基于NK细胞治疗实体瘤的过继性免疫治疗提供理论依据。

关键词： 细胞生物学   串联性教学思维   纵向串联   横向串联  

摘要： 细胞生物学知识高度综合、复杂与抽象,使得学生理解困难而降低了学习兴趣。于是,细胞生物学教学思维的优化就显得尤为必要。串联性教学思维分为纵向与横向串联两类,前者将不同性质的事物进行联系,如理论课与实验课、课堂与生活以及网络与学习;后者将存在相似之处的事物进行类比,如新旧知识、国内外教学以及跨学科知识。这两类教学思维可有效地提高细胞生物学的教学效果,激发学生的学习兴趣,培养他们的创造性思维以及知识综合应用能力。

关键词： 川芎嗪   表没食子儿茶素没食子酸酯   银杏叶提取物   人参皂苷Rg1   黑素细胞   中波紫外线  

摘要： 目的研究和比较川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)、表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)、银杏叶提取物和人参皂苷Rg1对不同剂量中波紫外线(ultravioletB,UVB)诱导的原代人黑素细胞生物学活性的影响。方法分离培养原代人黑素细胞,分别以30,90 mJ·cm-2的UVB照射细胞,然后用不同浓度的各植物药单体或提取物(TMP100,300,600μg·mL-1;EGCG 10,20,40μg·mL-1;银杏叶提取物40,80,160μg·mL-1;人参皂苷Rg1 50,100,200μmol·L-1)孵育至72 h,MTT法测定细胞增殖情况;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;NaOH裂解法测定黑素含量。结果 30 mJ·cm-2UVB能诱导黑素细胞增殖,加强酪氨酸酶活性,促进黑素生成,TMP、EGCG、银杏叶提取物能不同程度地抑制该效应,以EGCG最为显著;90 mJ×cm-2 UVB对黑素细胞产生明显的细胞毒作用,细胞增殖下降,黑素合成减少,TMP、EGCG、银杏叶提取物和人参皂苷Rg1则均能减轻该效应,以TMP最为显著。结论 TMP、EGCG、银杏叶提取物不但能抑制低剂量UVB诱导的黑素细胞增殖和黑素合成,还能减轻高剂量UVB对黑素细胞的细胞毒作用,对黑素细胞起一定的光保护作用。

关键词： 课程思政   医学细胞生物学   教学设计  

摘要： 从医学细胞生物学课程思政教学的合理性、教学设计、教学案例及教学反思4方面探讨医学细胞生物学课程思政的教学思路,以期实现全程、全方位思政育人的新格局。

关键词： FOXN3   食管癌   增殖   迁移   侵袭   凋亡  

摘要： 目的探讨过表达叉头框蛋白N3(FOXN3)对食管癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法通过RT-qPCR实验检测正常食管上皮细胞HEEC、食管癌细胞Eca-109、KYSE-30、TE-1中FOXN3的表达水平,选取表达量最低的Eca-109细胞用于后续实验,通过Lipofectamine2000将pcDNA3.1-FOXN3、pcDNA3.1转染食管癌细胞Eca-109,作为FOXN3过表达组和空载体对照组,对照组细胞不做处理。通过CCK8检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡及细胞周期,Transwell检测各组细胞侵袭水平,细胞划痕实验检测各组细胞迁移水平,Western blot检测各组细胞cleaved-Caspase-3、Ki-67、MMP-2、Wnt1和β-catenin蛋白表达水平。结果FOXN3在食管癌细胞中低表达(P<0.05),过表达FOXN3使食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱,相关蛋白Ki-67、MMP-2表达显著下降(P<0.05),凋亡率及凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3显著升高(P<0.05),细胞周期受到阻滞,Wnt1和β-catenin蛋白相对表达量显著下降(P<0.05)。结论过表达FOXN3能够抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促细胞凋亡,其机制可能与过表达FOXN3抑制Wnt信号通路有关。