教学课程资源库 更多>>

关键词： 溶血磷酸酯   宫颈癌   RhoA/Rock2信号通路   干细胞  

摘要： 目的:研究和探讨溶血磷酸酯(lysophosphatidic acid,LPA)对子宫颈癌干细胞生物学特性的影响及对RhoA/Rock2通路的调控作用,进一步明确宫颈癌的发病机制,并为将来研制宫颈癌靶点药物提供理论依据。方法:以宫颈癌Siha细胞株为原代细胞,球囊培养富集宫颈癌干细胞,观察细胞的克隆形成能力,检测细胞表面标志物。成功培养子宫颈癌干细胞,分为对照组、LPA组及抑制组,对照组正常培养,LPA组分别加入不同浓度(1、5、10、15、20umoL/L)的LPA,抑制剂组以最佳促增殖浓度的LPA细胞组为基础,加入Rho激酶抑制剂Y-27632,观察细胞增殖情况并绘制细胞生长曲线图,采用PCR法检测各组细胞LPA、RhoA、Rock2的mRNA水平,western blot法检测RhoA及Rock2的表达情况。结果:经培养后有悬浮细胞球形成,细胞表型为CD44^+、CK17^+、CD34^-、CD105^-,成功获得子宫颈癌干细胞,加入LPA后,对癌细胞增殖有显著的促进作用,且存在时间与剂量依赖性关系(P<0.05),加入Y-27632后对细胞增殖有显著的抑制作用(P<0.05),LPA组的LPA、RhoA、Rock2的mRNA水平及RhoA、Rock2蛋白表达量均显著高于对照组与抑制组(P<0.05)。结论:LPA可以促进子宫颈癌干细胞的增殖,其作用机制可能是通过调控RhoA/Rock2通路来实现的。

关键词： 新冠疫情   课程思政   细胞生物学   病毒   教学研究  

摘要： 立德树人是教育事业的根本任务,课程思政是将立德树人融入教育各环节、各领域的重要手段。"细胞生物学"既是现代生命科学的前沿分支学科之一,也是高校生命科学类专业的重要课程。该文在课程思政的背景下,选择新型冠状病毒肺炎疫情(简称:新冠疫情)为载体,以"细胞生物学"课程中"病毒的特征、入侵、增殖"为主线,从"教学内容的甄选"和"实施策略"两个方面着手,开展聚焦新冠疫情下"细胞生物学"课程思政教学的深入探讨。该研究旨在引导学生在研习专业知识的基础上,提升其科学素养、树立其正确的价值观,为侧重新冠疫情的课程思政研究提供重要参考。

关键词： 医学细胞生物学   实验教学   创新能力  

摘要： 医学细胞生物学是理论和实践相结合的生命科学领域中迅速发展的前沿学科之一,实验教学是培养学生科研素养和创新能力的关键。传统的实验教学理念不利于提升当代大学生综合素质,为提高医学细胞生物学教学效果,文章从目前实验教学现状及存在问题、实验教学的优化、考核评价的优化等三大方面进行改革探讨,以期构建培养医学生科研思维和创新能力。

关键词： 椎间盘退行性变   拉伸强度   生物力学  

摘要： 目的探讨周期性牵张微应变对人髓核细胞生物学功能和退变的影响。方法收集人椎间盘髓核组织,酶消化法分离、培养髓核原代细胞,显微镜下观察细胞生长状态。Mechano Culture FX2加载周期性牵张微应变,应力10万μ?,10%拉伸应变,频率0.1 Hz,8640个循环周期。MTT法检测牵张微应变对髓核细胞增殖的影响;流式细胞仪检测牵张微应变对髓核细胞周期和凋亡的影响。基因表达谱芯片检测牵张微应变组和对照组表达差异的基因,生物信息学分析表达差异基因在髓核细胞的功能。荧光定量PCR法检测牵张微应变对髓核细胞表达炎症相关因子、TGF-β、基质降解酶类、ECM分子等的影响。结果牵张微应变组髓核细胞生长状态较好。牵张微应变促进髓核细胞增殖和周期进程,两组细胞S期(t=5.336,P<0.05)和G2/M期(t=7.288,P<0.01)百分比的差异均有统计学意义。牵张微应变抑制髓核细胞凋亡(牵张微应变组8.56%±0.48%,对照组10.63%±0.32%,t=4.474,P<0.05)。基因表达谱芯片检测到866个差异表达基因,基因本体(gene ontology)分析其在细胞中的作用,主要包括focal adhesion、extracellular matrix,membrane raft、condensed chromosome kinetochore、cytoskeleton等。牵张微应变影响髓核细胞表达炎症相关因子、TGF-β基因、基质降解酶、细胞外基质分子等的表达。与对照组相比,牵张微应变组炎症相关因子IL15(t=5.379,P<0.05)、IGF1(t=5.454,P<0.05)、IGFBP7(t=13.57,P<0.01)的表达降低;TGF-β相关基因TGFB1(t=6.931,P<0.05)、TGFB2(t=15.56,P<0.01)、TGFB3(t=7.744,P<0.05)的表达增高;基质降解酶类ADAMTS3(t=5.241,P<0.05)和MMP19(t=24.72,P<0.01)的表达降低,TIMP3(t=8.472,P<0.01)的表达增高;ECM分子COL2A1(t=5.871,P<0.05)、FLRT2(t=5.216,P<0.05)、FN1(t=4.289,P<0.05)的表达增高。结论周期性牵张微应变促进髓核细胞周期和增殖,抑制髓核细胞凋亡,可能通过调节髓核细胞表达炎症相关因子、TGF-β、基质降解酶类、ECM分子等改善髓核细胞退变。

关键词： 局灶节段性肾小球硬化   肾小球疾病   壁层上皮细胞   细胞生物学   内皮细胞   足细胞   系膜细胞   固有细胞  

摘要： 系膜细胞、内皮细胞、足细胞和壁层上皮细胞(parietal epithelial cells,PECs)是肾小球内的四种固有细胞。人们曾普遍认为PECs仅在新月体性肾小球肾炎的发生发展上发挥直接而重要的作用。但随着近二十年来对PECs的研究深入,不少学者发现PECs在1糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)、局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)等疾病中均可能发挥重要的作用。本文对PECs的细胞生物学及其在肾小球疾病发生发展中的作用进行综述。

关键词： 树突状细胞   细胞因子信号抑制因子1   RNA干扰   慢病毒载体   免疫调控  

摘要： 目的探讨沉默细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)基因对人树突状细胞(hDC)生物学特征和功能的影响。方法实验分为RNA干扰组、阴性对照组和空白对照组。应用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默hDC的SOCS1基因表达,Western blot法检测基因沉默效果。采用系列细胞因子诱导DC成熟,流式细胞术检测分析各组DC细胞表面分子CD80、CD83、CD86、HLA-DR、PD-L1的表达情况;ELISA法检测各组DC细胞培养上清中细胞因子白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素12(IL-12)p70及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平。结果SOCS1基因shRNA干扰慢病毒(LV-shRNA-SOCS1)感染DC后,可有效下调DC中SOCS1表达水平;与空白对照组和阴性对照组相比,RNA干扰组DC表面分子CD80、CD83、CD86和HLA-DR的阳性表达率均显著增高(P<0.05),而PD-L1的阳性表达率显著下降(P<0.05);DC细胞培养上清中细胞因子IL-12 p70及TNF-α的分泌水平均显著增高(P<0.05),IL-10的分泌水平显著下降(P<0.05)。结论慢病毒介导的RNA干扰能够有效沉默hDC的SOCS1表达,从而促进DC的成熟和活化,有利于促进DC刺激Th1型免疫反应。

关键词： 罗哌卡因   肺癌   PI3K/Akt信号通路   增殖   转移   凋亡  

摘要： 目的探讨罗哌卡因(Ropivacaine)通过磷脂酰肌醇-3激酶(Phospoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)信号通路影响肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭和凋亡。方法采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测(0、100、200和400μg/ml)罗哌卡因组肺癌细胞A549的增殖。将A549细胞分为对照组(未给药)和罗哌卡因组(400μg/ml),采用Transwell小室法分析细胞迁移和侵袭,流式细胞术评估细胞凋亡,免疫印迹实验(Western blot)测定周期蛋白依赖性激酶4(Cyclin-dependent kinases4,CDK4)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloprotease 2,MMP-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated x protein,Bax)、PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。结果CCK-8结果显示,与0μg/ml罗哌卡因组比较,100、200和400μg/ml罗哌卡因组肺癌细胞A549的细胞存活率明显减少(P<0.05)。Transwell小室法结果表明,罗哌卡因组A549细胞的细胞迁移数和细胞侵袭数明显低于对照组(P<0.05)。流式细胞术结果发现,罗哌卡因组A549细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组比较,罗哌卡因组A549细胞中CDK4、MMP-2、Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平明显降低,Bax蛋白表达水平明显提高(P<0.05),而PI3K和Akt蛋白表达水平无明显变化。结论罗哌卡因可能通过抑制PI3K/Akt信号通路,进而抑制肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭并促进其凋亡。

关键词： 脂肪间充质干细胞(ADSCs)   不饱和脂肪酸   油酸   亚麻酸   生物学特性  

摘要： 探讨不饱和脂肪酸对人脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)的形态、增殖、免疫表型及分化潜能的影响。采用0.15%Ⅷ型胶原酶消化法从皮下脂肪组织中分离获得ADSCs,使用添加了油酸或亚麻酸的培养基对ADSCs进行传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态,计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面抗原,同时使用特定的诱导培养基对细胞进行成脂、成骨、成软骨诱导培养和染色鉴定,并采用实时定量PCR检测三系分化诱导培养9 d后成脂、成骨及成软骨相关标志基因m RNA的表达水平。结果显示,0.15%Ⅷ型胶原酶消化法能获得形态均一的ADSCs;培养相同的时间后,与未添加脂肪酸的空白对照组相比,含有20μmol/L油酸或亚麻酸的培养体系所收获ADSCs的细胞数量增加了20%左右;各组细胞CD13、CD29、CD44、CD73、CD90、CD105呈阳性表达, CD31、CD45呈阴性表达;使用20μmol/L油酸或亚麻酸进行传代培养的细胞经成脂、成骨、成软骨诱导后,油红O、茜素红、阿利新蓝染色呈阳性反应,同时细胞中的成脂标志基因PPAR-γ、成软骨标志基因SOX9和COL2A1及成骨标志基因ALP、OCN、RUNX2的m RNA表达水平较对照组显著增加。实验结果表明,油酸及亚麻酸能够促进ADSCs增殖,维持细胞的免疫表型,并且提高细胞的三系分化潜能。

关键词： 木犀草素   宫颈癌   miR-425-5p   侵袭   凋亡   HeLa细胞  

摘要： 目的探讨木犀草素联合下调miR-425-5p对宫颈癌HeLa细胞生物学特性的影响及可能机制。方法将宫颈癌HeLa细胞(购自中国医学科学院肿瘤细胞库)分成Control组(不做任何处理)、Anti-NC组(在HeLa细胞中用Lipofectamine 2000转染inhibitor control)、Anti-miR-425-5p组(在HeLa细胞中用Lipofectamine 2000转染miR-425-5p inhibitor)、木犀草素+Anti-NC组(在HeLa细胞中用Lipofectamine 2000转染inhibitor control,经40μmol/L木犀草素处理)、木犀草素+Anti-miR-425-5p组(在HeLa细胞中用Lipofectamine 2000转染miR-425-5p inhibitor,经40μmol/L木犀草素处理)共5组,并对上述5组采用MTT测定细胞培养24 h后A值(以A值代表细胞增殖活性),平板克隆实验测定细胞培养12 d后克隆形成率,流式细胞术检测细胞培养24 h后凋亡率,Transwell小室测定细胞培养24 h后侵袭和迁移数目,Western blot法检测细胞培养24 h后p-Akt、c-caspase-3、c-caspase-9、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2、Bax、Bcl-2蛋白表达水平,比较5组上述指标差异。结果与Anti-NC组比较,Anti-miR-425-5p组、木犀草素+Anti-NC组、木犀草素+Anti-miR-425-5p组细胞增殖活性、侵袭与迁移数目和MMP-9、MMP-2、p-Akt蛋白表达水平均明显降低,细胞凋亡率和c-caspase-3、c-caspase-9、Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Anti-miR-425-5p组、木犀草素+Anti-NC组比较,木犀草素+Anti-miR-425-5p组细胞增殖活性、侵袭与迁移数目和MMP-9、MMP-2、p-Akt蛋白表达水平均明显降低,细胞凋亡率和c-caspase-3、c-caspase-9、Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论木犀草素联合下调miR-425-5p可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡,作用机制可能与抑制Akt信号通路的激活有关。

关键词： 细胞   知识   衔接  

摘要： 通过对高中与大学的教学方法、学习方法以及教学内容进行对比分析,详细论述了二者的衔接问题。通过本研究,有助于促成细胞知识体系教与学的衔接,为教师在课堂上教学和大学生的自主学习提供了参考依据。