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关键词： 环状蛋白精氨酸甲基转移酶5   结肠癌   细胞增殖   细胞侵袭   细胞凋亡  

摘要： 目的探讨环状蛋白精氨酸甲基转移酶5(circPRMT5)在结肠癌患者中的表达及其对结肠癌细胞生物学性质的影响。方法选择2018年10月至2019年10月该院收治的93例结肠癌患者为研究对象,收集手术切除的结肠癌组织及癌旁正常组织,采用免疫印迹法(Western blot)检测结肠癌组织及癌旁正常组织中circPRMT5蛋白表达量。将人结肠癌SW480细胞分为空白对照组、阴性对照组、试验组,空白对照组不作任何处理,阴性对照组转染10μg pEGFP-N1质粒,试验组转染10μg pEGFP-N1-circPRMT5质粒,采用CCK-8法检测各组SW480细胞增殖率,采用Transwell小室侵袭试验检测各组SW480细胞侵袭能力,采用流式细胞术检测各组SW480细胞凋亡率,采用Western blot检测各组SW480细胞中circPRMT5蛋白表达量。结果结肠癌组织中circPRMT5蛋白表达量显著高于癌旁正常组织(P<0.05);试验组SW480细胞增殖率、侵袭能力、circPRMT5蛋白表达量显著高于空白对照组、阴性对照组(P<0.05);试验组SW480细胞凋亡率显著低于空白对照组、阴性对照组(P<0.05);阴性对照组SW480细胞增殖率、凋亡率、侵袭能力、circPRMT5蛋白表达量与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论circPRMT5在结肠癌患者中呈高表达,circPRMT5高表达能够促进结肠癌细胞增殖、侵袭,抑制结肠癌细胞凋亡。

关键词： 基因,erbB-2   基因沉默   PI3K/Akt/eNOS信号通路   卵巢肿瘤   细胞增殖   细胞凋亡   细胞运动   肿瘤侵润  

摘要： 目的探讨ErbB2基因沉默介导PI3K/Akt/eNOS信号通路对卵巢癌细胞生物学特性的影响及机制。方法选取对数生长期人卵巢癌细胞株HO8910细胞分为5组:空白对照组(不转染任何序列)、阴性对照组(转染空载体质粒)、siErbB2组(转染siRNA序列)、wortmannin组(转染PI3K/Akt/eNOS信号通路抑制剂wortmannin)、siErbB2+IGF-1组(转染siRNA序列+PI3K/Akt/eNOS信号通路激动剂IGF-1)。采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测ErbB2、Akt、PI3K、eNOS、Caspase-3、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平,同时检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的变化。结果与空白对照组比较,siErbB2组和wortmannin组卵巢癌细胞中Akt、PI3K、eNOS和Bcl-2的mRNA和蛋白表达量显著下降,而Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达量则显著增加(F=3.58~8.69,P均<0.05),细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力均显著下降(F=8.84~15.67,P均<0.05),细胞凋亡率上升(F=9.46,P<0.05);siErbB2组ErbB2表达明显下降(P<0.05)。与siErbB2组相比,siErbB2+IGF-1组ErbB2、Akt、PI3K、eNO S和Bcl-2的mRNA和蛋白表达量显著下降(P均<0.05),Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达量显著增加(P均<0.05),细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力均明显下降(P均<0.05),细胞凋亡率上升(P<0.05)。结论ErbB2基因沉默可抑制PI3K/Akt/eNOS信号通路,从而抑制卵巢癌细胞增殖,促进细胞凋亡。而PI3K/Akt/eNOS信号通路激活可逆转ErbB2基因沉默作用,促进卵巢癌细胞增殖并抑制细胞凋亡。

关键词： LncRNA ZFPM2-AS1   膀胱癌   T24   Wnt/β-catenin信号通路  

摘要： 目的探究lncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌组织中的表达和对膀胱癌T24细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。方法QPCR检测膀胱癌组织和细胞系中lncRNA ZFPM2-AS1的表达;将阴性对照siRNA和lncRNA ZFPM2-AS1 siRNA转染至膀胱癌T24细胞中,qPCR检测转染后细胞中lncRNA ZFPM2-AS1表达,MTT检测细胞增殖,克隆形成检测细胞克隆形成能力,细胞划痕检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。结果膀胱癌组织中lncRNA ZFPM2-AS1的水平高于癌旁组织;与正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1相比,T24、J82、56373种膀胱癌细胞株中lncRNA ZFPM2-AS1表达水平均高于正常膀胱上皮细胞,且差异有统计学意义(P<0.01)。与沉默对照组相比,沉默ZFPM2-AS1组T24细胞中lncRNA ZFPM2-AS1表达显著降低(P<0.01),细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01),细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin及其下游蛋白c-Myc和Cyclin D1表达显著降低,p-β-catenin蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论LncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌中高表达,沉默LncRNA ZFPM2-AS1能够抑制膀胱癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

关键词： 模块式教学   教学模式   医学细胞生物学   有机结合  

摘要： 为了培养新时代背景下具有较高分析问题和解决问题能力的医学生,医学细胞生物学教学模式的改革就显得尤为必要。从学生需求出发,从理论教学和实践教学两方面构建的以学生为中心的模块式教学成为了医学细胞生物学教学的重点研究内容。该模块式教学模式的应用,不仅优化了教学内容,完善了评价体系,而且也达到了预期的教学目标,体现了学生的主体地位,激发了学生的学习热情,培养和提高了学生的自主学习能力。

关键词： 线上线下教学   衔接   融合   双螺旋教学模式   医学细胞生物学  

摘要： 新冠肺炎疫情的突然爆发和全球化蔓延,向现有的教育教学模式发起了严峻挑战,同时也带来了前所未有的发展契机。本文立足当前线上线下教学实际,阐述了我们以“双螺旋教学模式”为主导思想,在线上课程建设、线上教学实施,以及学生返校复课后线上线下教学衔接与融合等方面,对医学细胞生物学教学开展的研究与实践,以期为解决当前线上和线下教学中出现的实际问题,和提高人才培养质量,建设学习型社会提供革新思路。

关键词： 微RNAs   骨肉瘤   细胞增殖   细胞周期   细胞凋亡   肌细胞增强因子2A  

摘要： 目的探讨miRNA-1-3p(miR-1-3p)对骨肉瘤细胞肌细胞增强因子2A(MEF2A)表达及生物学功能的影响。方法收集2019年1月至2020年1月山西省肿瘤医院临床确诊的20例骨肉瘤患者的肿瘤组织及癌旁正常组织,使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测样本中miR-1-3p表达水平。采用qRT-PCR检测骨肉瘤细胞株U2-OS、SAOS-2、MG63、SW1353及人正常成骨细胞株hFOB1.19中miR-1-3p表达水平,选择miR-1-3p表达水平最低的细胞株进行后续实验。构建过表达miR-1-3p载体(miR-1-3p mimcs),转染miR-1-3p mimcs的细胞为miR-1-3p过表达组,转染空载体(miR-1-3p nc)的细胞为对照组;使用CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化。采用miRwalk网站工具预测miR-1-3p靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证;蛋白质印迹法检测各组细胞MEF2A蛋白的表达。结果与癌旁组织相比,骨肉瘤组织中miR-1-3p表达下调(0.31±0.14比0.62±0.21),差异有统计学意义(t=5.31,P<0.01)。miR-1-3p在骨肉瘤U2-OS细胞中表达最低;与对照组相比,miR-1-3p过表达组细胞U2-OS细胞增殖活性受抑制(48 h吸光度值0.56±0.01比0.77±0.03,t=2.77,P<0.01;72 h吸光度值0.87±0.02比1.40±0.03,t=2.93,P<0.01),细胞周期G1至S期阻滞增加[G1期(38.24±0.55)%比(32.11±0.80)%,t=9.27,P=0.01;S期(61.24±0.90)%比(67.78±0.83)%,t=7.52,P=0.02],细胞早期凋亡率升高[(11.20±0.12)%比(1.50±0.12)%,t=2.91,P<0.05]。miRwalk网站工具预测miR-1-3p靶基因为MEF2A。双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-1-3p和MEF2A 3’UTR靶向结合,miR-1-3p过表达组U2-OS细胞荧光素酶活性低于对照组(海肾荧光素酶与萤火虫荧光素酶活性比值0.53±0.06比1.00±0.04,t=4.04,P<0.05);蛋白质印迹法结果显示,miR-1-3p过表达组U2-OS细胞MEF2A蛋白表达水平较对照组低(蛋白相对表达量0.41±0.14比0.77±0.12,t=3.93,P<0.05)。结论 miR-1-3p低表达可能与骨肉瘤细胞增殖、凋亡和周期改变相关。miR-1-3p可负向调控MEF2A蛋白表达并调控骨肉瘤的发生、发展。

关键词： 细胞生物学基础实验   小实验   大背景  

摘要： 生物学实验教学是一流人才培养的重要途径。但在传统的实验教学中,教师往往只关注提高学生的动手能力,而忽略了通过基础实验教学实现对学生科学创新思维与能力的培养。为此,在细胞生物学基础实验教学过程中,在不增加实验经费与硬件投入的情况下,通过把细胞生物学"小实验"与学科发展"大背景"相结合,将"小实验"教学内容放在培养学生实验设计能力、批判性与创新思维能力等实验教学大背景之下,以提升实验教学难度和挑战度,增强学生的学习兴趣。该模式既有助于在细胞生物学基础实验课中培养学生的实践动手能力,又能提升学生的科学创新思维等高阶能力。

关键词： 齐墩果酸   瘢痕疙瘩   成纤维细胞   细胞增殖   细胞凋亡   细胞运动  

摘要： 目的探讨齐墩果酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长和迁移的生物学功能的影响。方法收集北部战区总医院整形外科9例患者手术切除的瘢痕疙瘩组织标本,并进行体外培养成纤维细胞。采用不同浓度的齐墩果酸处理成纤维细胞,实验分成3组:对照组加入0.9%NaCl;5μmol/L齐墩果酸组加入5μmol/L齐墩果酸;10μmol/L齐墩果酸组加入10μmol/L齐墩果酸。3组均进行噻唑蓝实验(MTT)检测细胞的增殖状况;流式细胞实验检测细胞周期;膜联蛋白V碘化丙啶(AV-PI)染色检测细胞的凋亡;Transwell实验检测齐墩果酸对细胞的迁移作用;蛋白质印迹法和Real-time PCR实验分别检测相关蛋白表达和mRNA水平。所有实验均设置3个复孔。3组间数据进行方差分析比较,两两比较使用LSD-t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果3组MTT结果发现齐墩果酸能够抑制细胞的增殖,作用24 h时,5μmol/L和10μmol/L齐墩果酸组细胞增殖(吸光度A值)分别为0.66±0.02、0.46±0.02,对照组为0.78±0.00,3组间比较F=114.4,P<0.001;5、10μmol/L齐墩果酸组分别与对照组比较,差异有统计学意义(t=5.94、P<0.001,t=15.60、P<0.001)。流式细胞实验结果发现,细胞周期G1/S期的转导受到阻滞,5μmol/L和10μmol/L齐墩果酸组G1期细胞百分比分别为(72.17±2.04)%和(82.02±1.18)%,与对照组[(62.47±4.95)%]比较差异有统计学意义(t=3.14、P=0.030,t=6.38、P<0.001)。AV-PI染色发现5μmol/L齐墩果酸组(0.9%)和10μmol/L齐墩果酸组(3.4%)细胞的凋亡比例比对照组(0.4%)明显增加,3组间比较F=119.6,P<0.001,5、10μmol/L齐墩果酸组分别与对照组比较差异有统计学意义(t=4.39、P<0.001,t=13.44、P<0.001)。Transwell实验发现5μmol/L齐墩果酸组(57.13±2.65)和10μmol/L齐墩果酸组(42.15±2.55)细胞的迁移数量比对照组(72.27±3.32)明显下调,3组间比较F=101.3、P<0.001,5、10μmol/L齐墩果酸组分别与对照组比较差异有统计学意义(t=6.50、P<0.001,t=14.41、P<0.001)。蛋白质印迹法实验发现齐墩果酸可以抑制细胞周期素D1(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和基质金属蛋白酶-2(MMP2)的表达:5μmol/L齐墩果酸与对照组比较t=8.70、P<0.001,t=5.00、P=0.040,t=12.41、P<0.001,t=10.46、P<0.001;10μmol/L齐墩果酸与对照组比较t=31.61、P<0.001,t=23.17、P<0.001,t=12.11、P<0.001,t=44.52、P<0.001。Real-time PCR反应发现Cyclin D1、Bcl-2、Bax、MMP2的mRNA表达水平也受到了抑制,5μmol/L齐墩果酸与对照组比较t=5.42、P<0.001,t=3.11、P=0.040,t=16.11、P<0.001,t=11.71、P<0.001;10μmol/L齐墩果酸与对照组比较t=51.78、P<0.001,t=30.89、P<0.001,t=10.64、P<0.001,t=17.10、P<0.001。结论齐墩果酸作用于瘢痕疙瘩成纤维细胞24 h后能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和迁移并诱导其凋亡,10μmol/L的齐墩果酸作用强于5μmol/L,齐墩果酸可以用于防治瘢痕疙瘩。

关键词： 白内障   糖皮质激素   生物信息学分析   晶状体上皮细胞   生物学功能   Hub基因   微小RNA  

摘要： 目的利用生物信息学方法分析糖皮质激素对晶状体上皮细胞(LECs)生物学功能的影响,并预测相关的微小RNA(miRNA)。方法下载GSE3040数据集,设置1 μmol/L地塞米松处理的人LECs细胞株HLE-B3细胞为实验组,1 μmol/L二甲基亚砜(DMSO)处理的HLE-B3细胞为对照组,利用GEO2R工具分析2个组间的差异表达基因。利用Metascape网站进行差异基因功能富集分析,通过EdU细胞增生实验检测2个组间细胞增生差异。通过STRING网站和cytoscape软件构建蛋白互作网络图,cytohubba app计算出hub基因,采用实时荧光定量PCR法检测2个组间hub基因的表达差异。利用mirCode数据库预测与hub基因相关的miRNA。结果实验组与对照组间分析出341个差异基因,其中上调基因为300个,下调基因为41个。下调基因中差异最显著的5个基因是SLC12A1、MED13L、ALDH5A1、SLC15A3和WWC1基因;上调基因中差异最显著的5个基因是SCNN1A、ANKRD36、FKBP5、PYY和ADH1B基因。列出了富集量排名前20的生物学功能关键词,结果显示富集量最大的是对HLE-B3细胞增生的负向调节。实验组细胞增生率为(8.09±0.20)%,低于对照组的(39.63±0.80)%,差异有统计学意义(t=38.43,P<0.01)。前10位hub基因分别是SST、CXCL8、GRM1、GNRH1、CXCL5、PPBP、CX3CR1、PYY、EDNRA和GRK5,实时荧光定量PCR结果显示2个组间SST、CXCL8、GRM1、PYY、EDNRA和GRK5 mRNA相对表达量比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。与hub基因相关性强的前6位miRNA分别是miR-15abc、miR-214、miR-23abc、miR-129-5p、miR-132和miR-24。结论 1 μmol/L地塞米松即可对HLE-B3细胞的增生产生负性调控作用。SST、CXCL8、GRM1、PYY、EDNRA和GRK5基因可能是糖皮质激素的作用靶点,miR-15abc、miR-214、miR-23abc、miR-129-5p、miR-132和miR-24最可能与hub基因相关。

关键词： 间充质干细胞   生物学特性   可塑性   预处理  

摘要： 间充质干细胞(MSC)同时具有造血支持、免疫调节、组织修复再生和归巢等特性,但由于各种因素常常不能充分发挥其效能。近期研究显示,MSC的生物学特性具有可塑性。研究人员通过对MSC进行低氧预处理、生物活性分子预处理、基因修饰预处理和力学刺激预处理以及调整MSC的移植策略,使其生物效能增强,该方向对于推动MSC的转化应用具有重要意义。基于此,本文就MSC生物学特性的可塑性研究最新进展作一综述。