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关键词： 盐酸青藤碱   PI3K/Akt信号通路   结直肠癌   增殖   凋亡  

摘要： 目的探讨盐酸青藤碱(sinomenine hydrochloride,SIN)对结直肠癌细胞的增殖、迁移与凋亡的影响及其可能的作用机制。方法通过CCK-8法检测SIN对人结直肠癌细胞活力的影响,确定半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC 50)及后续实验的药物浓度;采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测结直肠癌细胞的迁移和侵袭能力;采用流式细胞计数测定结直肠癌细胞的凋亡率,采用蛋白印迹法测定PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、Caspaes-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果SIN能够降低结直肠癌SW480细胞的活力(P<0.001),通过计算得出药物的IC 50值为4.881 mmol/L;与对照组比较,SIN处理组的迁移率显著降低,穿膜细胞数明显减少(P<0.001);与对照组比较,SIN处理组凋亡率明显升高(P<0.001);SIN处理组Caspase-3、Bax蛋白表达上调(P<0.001),Bcl-2蛋白表达下调(P<0.05);SIN处理组p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT组间比值存在差异,SIN组最低(P<0.01)。结论SIN可通过调控PI3K/Akt信号通路抑制结直肠癌SW480细胞的增殖和转移,诱导细胞凋亡。

关键词： MOOC   医学细胞生物学   混合式教学   教学设计   教学评价  

摘要： 医学细胞生物学作为医学教育的重要基础课程,在培养学生理性思维和动手能力方面至关重要。本研究利用MOOC平台的可变性和丰富性,构建了线上与线下教学相结合的新型教学模式,并围绕教学设计、课程资源的元素融入、线上线下教学实践路径以及多维评价体系等多角度进行深入研讨。结果显示,该教学模式有效地提高了学生的学习效果和自主学习能力,具体体现在期末成绩平均分数提高7.8分,对知识点的把握程度提高了18个百分点,课堂互动频率增加了30%以上,而学生对于课程的满意度高达88%。这一模式对于医学教学改革具有重要的参考意义。

关键词： 膀胱癌   醛缩酶A   上皮-间质转化   β-连环蛋白   细胞增殖  

摘要： 目的探究醛缩酶A对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响及机制。方法通过慢病毒感染构建干扰或过表达醛缩酶A质粒并转染至T24人膀胱移行细胞癌(T24)细胞中,将细胞分为对照组、空载组、醛缩酶A干扰组和醛缩酶A过表达组。检测醛缩酶A在膀胱癌组织和癌旁组织中的表达。检测细胞增殖、迁移和侵袭情况,同时检测EMT及Wnt/β-连环蛋白信号通路相关蛋白的表达。结果膀胱癌组织中醛缩酶A的免疫组织化学染色评分及相对表达量均高于癌旁组织[(33±7)分比(17±5)分、(63±6)%比(22±4)%](均P<0.001)。细胞计数盒8试验处理24、36和48 h后,醛缩酶A干扰组T24细胞吸光度值均低于空载组,而醛缩酶A过表达组T24细胞吸光度值均高于空载组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。醛缩酶A干扰组划痕愈合率低于空载组,醛缩酶A过表达组划痕愈合率高于空载组(均P<0.05)。醛缩酶A干扰组侵袭细胞数少于空载组,醛缩酶A过表达组侵袭细胞数多于空载组(均P<0.05)。醛缩酶A干扰组E-钙黏蛋白相对表达量高于空载组,神经钙黏蛋白、波形蛋白、β-连环蛋白、细胞周期素D1、c-Myc基因蛋白相对表达量均低于空载组(均P<0.05)。醛缩酶A过表达组E-钙黏蛋白相对表达量低于空载组,神经钙黏蛋白、波形蛋白、β-连环蛋白、细胞周期素D1、c-Myc基因蛋白相对表达量均高于空载组(均P<0.05)。结论醛缩酶A可促进膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,这可能是通过Wnt/β-连环蛋白信号通路发挥影响的。

关键词： 细胞生物学   教学改革   创新思维  

摘要： 医学细胞生物学是临床医学相关专业的重要基础学科,在新医科背景下,医学院校细胞生物学教学在培养学生探索精神和创新能力上亟待提高。本文提出了创新实验教学方式,注重学生动手能力和独立思考能力的培养,将医学案例引入细胞生物学的教学中,加深学生对科学问题的理解,提高学生从医学实例中提出科学问题,通过学习相关知识来解决这些问题的能力。此外,开展“翻转课堂”等教学方式,提高学生自主探索科学问题的能力并发展创新思维,为学生后续医学相关基础课程的学习和科研能力的提高奠定坚实的基础。

关键词： 鼻咽癌   蒺藜皂苷D   增殖   凋亡   肿瘤干细胞  

摘要： 目的探讨蒺藜皂苷D(Terrestrosin D)对人鼻咽癌CNE-2细胞生物学行为及裸鼠CNE-2细胞移植瘤生长的影响。方法采用CCK-8法检测CNE-2细胞活性及筛选后续实验浓度;将CNE-2细胞分为空白对照组和Terrestrosin D处理组(5、10、20μmol/L);EdU染色观察细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞成球实验检测干细胞性;蛋白质免疫印迹法检测细胞增殖、凋亡相关蛋白和干细胞标记物的表达;观察Terrestrosin D对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响。结果CCK-8实验结果显示,与空白对照组比较,20、40、80、120μmol/L Terrestrosin D可显著抑制CNE-2细胞活性(P<0.05),后续选用5、10、20μmol/L作为实验浓度。以5、10、20μmol/L Terrestrosin D处理CNE-2细胞,结果显示,与空白对照组比较,10、20μmol/L Terrestrosin D处理组的CNE-2细胞增殖能力、细胞增殖相关蛋白(Ki-67、VEGF)表达、细胞成球率、成球直径、细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2)以及干细胞标记物(SOX2、OCT4)的表达均显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率、凋亡相关蛋白(Bax、Caspase-3)表达显著升高(P<0.05)。经20μmol/L Terrestrosin D处理可降低鼻咽癌裸鼠移植瘤质量及肿瘤组织中VEGF阳性表达率,提高肿瘤组织的细胞凋亡率,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Terrestrosin D对人鼻咽癌细胞的生长具有显著抑制作用,可促进鼻咽癌细胞凋亡。

关键词： 威信白山羊   成纤维细胞系   生物学特性  

摘要： 近几年,受养殖成本、环境变化等因素影响,威信白山羊存栏数量急剧下降,已被云南省列为濒危地方畜禽品种,急需开展抢救性保护。因此,本研究以12月龄威信白山羊耳缘皮肤组织为试验材料,采用组织块贴壁法分离培养获得原代细胞,使用胰酶消化法对原代细胞进行传代培养,建立威信白山羊耳缘皮肤组织成纤维细胞系,并对其相关生物学特性进行分析。结果表明,威信白山羊成纤维细胞系为典型的梭形长条状或不规则多角形;细胞生长态势良好,生长曲线呈典型的“S”型曲线;细胞分裂中期染色体数2n=60;冻存前和复苏后均有较高的存活率。综上所述,本试验成功建立了可稳定培养、具有良好遗传学特性的威信白山羊成纤维细胞系,为后续威信白山羊的相关研究提供了宝贵的生物材料。

关键词： 间质干细胞   外泌体   食管肿瘤   细胞增殖   细胞运动   细胞凋亡  

摘要： 目的 探讨间充质干细胞外泌体(MSC-Exos)对食管癌ECA109细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法培养人脐带间充质干细胞,提取并分离外泌体,采用透射电镜、纳米粒径测定及表征蛋白(TSG101、CD63)进行鉴定。实验设MSC-Exo组(MSC-Exos与食管癌ECA109细胞共培养)和空白对照组(仅培养食管癌ECA109细胞),分别培养0、24、48 h,采用CCK-8增殖、划痕实验分别检测各组食管癌EAC109细胞增殖、迁移能力;培养48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期变化,Western blot检测磷酸化磷酸肌醇3-激酶(p-PI3K)、兔源磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、β-catenin蛋白的表达。结果 经鉴定,所得MSC-Exos符合要求标准。细胞培养0 h时,2组细胞增殖能力和迁移愈合率差异均无统计学意义(P>0.05);培养24 h时,MSC-Exo组细胞增殖能力低于空白对照组(P<0.05);培养48 h时,MSC-Exo组细胞增殖能力和迁移愈合率均低于空白对照组(P<0.05)。MSC-Exo组细胞凋亡率高于空白对照组,G2+S期细胞比例低于空白对照组(P<0.05)。MSC-Exo组p-PI3K、p-Akt和β-catenin蛋白表达水平均低于空白对照组(P<0.05)。结论 MSC-Exos能够抑制食管癌细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡,其对食管癌细胞的抑癌作用可能与抑制PI3K、Akt蛋白的活化、下调β-catenin蛋白表达有关。

关键词： 子宫内膜癌   富含亮氨酸α-2糖蛋白1   生物学行为   预后  

摘要： 目的 探究子宫内膜癌(EC)组织中富含亮氨酸α-2糖蛋白1(LRG1)的表达情况及其与EC肿瘤细胞生物学行为及患者预后的关系。方法 选取96例EC患者为研究对象,检测其EC组织和癌旁组织中LRG1水平。比较不同LRG1表达情况EC患者的临床特征,分析LRG1表达对EC患者预后的影响。将EC组织分为control组、NC组(转染si-NC的细胞)、LRG1组(转染siRNA-LRG1的细胞),检测其生物学行为。结果 EC组织中LRG1表达水平与阳性率均高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。LRG1阳性组中国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅲ~Ⅳ期、发生淋巴结转移患者的比例均高于LRG1阴性组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。死亡组EC患者中LRG1阳性表达、年龄≥55岁、肌层浸润≥1/2、腺癌、低分化、FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移患者的比例均高于生存组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。LRG1阳性表达和分化程度为低分化是EC患者发生不良预后的独立危险因素(P﹤0.05)。在48、72 h,LRG1组的EC细胞活力显著低于control、NC组(P﹤0.05);相比control、NC组,LRG1组细胞侵袭数、细胞迁移率均更低,凋亡水平更高(P﹤0.05)。结论 EC组织中LRG1表达升高,是EC患者不良预后的危险因素,抑制LRG1表达可抑制EC细胞活力及侵袭、迁移能力,促进细胞凋亡。

关键词： Lin28   肝母细胞瘤   细胞增殖  

摘要： 目的:研究Lin28基因在肝母细胞瘤(HB)中的表达情况,并探讨Lin28的表达对HB细胞生物学功能的影响。方法:综合分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库和3个不同来源的基因表达数据库(GEO)数据集中Lin28基因的表达差异情况;通过转染构建的siRNA分别敲低HB细胞系Huh-6和HepG2的表达水平,通过细胞克隆集落形成实验、CCK-8、流式细胞术检测Lin28对HB细胞生物学表型的影响。结果:在TCGA数据库中,Lin28在大多数肿瘤中的表达均上调(P<0.05)。在GEO数据库中,Lin28在HB肿瘤组织较癌旁组织表达上调(P<0.05)。成功构建转染si-Lin28后,Lin28在mRNA及蛋白水平表达显著下降(P<0.05);敲低Lin28的表达可以显著抑制HB细胞系Huh-6和HepG2增殖能力(P<0.01),增加细胞凋亡率(P<0.05)。结论:Lin28在HB中表达上调,敲低Lin28的表达可以抑制细胞恶性表型,提示Lin28可能是HB一个潜在的治疗靶点。

关键词： 核受体亚家族2F组成员2   卵巢肿瘤   肿瘤干性   免疫逃逸   耐药  

摘要： 目的:探讨核受体亚家族2F组成员2(NR2F2)对人卵巢癌SKOV3细胞生物学行为的影响,并阐明其分子机制,为卵巢癌的临床治疗提供新的思路。方法:采用基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库分析卵巢组织中NR2F2基因表达水平,并分析其与卵巢癌患者临床预后的相关性。将人卵巢癌SKOV3细胞分为对照组和NR2F2过表达组(NR2F2 OE组),待细胞密度达到70%时,分别转染mCherry对照病毒和NR2F2 OE过表达病毒,48 h后通过嘌呤霉素(puro)筛选稳定转染的SKOV3细胞系。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组细胞转染效率,RT-qPCR法检测2组细胞中NR2F2和性别决定区Y-box 2(SOX2)mRNA表达水平,Western blotting法检测2组细胞中NR2F2、SOX2、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)和程序性细胞死亡配体1(PD-L1)蛋白表达水平。CCK-8法检测2组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测2组细胞迁移率,Transwell小室实验检测2组穿膜细胞数,成球实验检测2组细胞成球数,外周血单核细胞(PBMCs)杀伤肿瘤细胞活性实验检测2组存活肿瘤细胞的相对密度,CCK-8法检测紫杉醇(PTX)和卡铂(CBP)对2组细胞的半数抑制浓度(IC_(50))。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢肿瘤组织中NR2F2 mRNA表达水平降低(P<0.05),并随卵巢肿瘤临床病理分级提高而降低;NR2F2 mRNA表达水平较高的患者临床预后较好。成功构建过表达NR2F2的SKOV3细胞,与对照组比较,NR2F2 OE组细胞中NR2F2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.001);CCK-8实验,与对照组比较,不同时间点(1、2、3和4 d)NR2F2 OE组细胞增殖活性均降低(P<0.05或P<0.01);细胞划痕实验,与对照组比较,NR2F2 OE组细胞迁移率降低(P<0.001);Transwell小室实验,与对照组比较,NR2F2 OE组穿膜细胞数减少(P<0.01);与对照组比较,NR2F2 OE组细胞成球数减少(P<0.05),SKOV3细胞中SOX2 mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.001)表达水平均降低;与对照组比较,NR2F2 OE组存活肿瘤细胞的相对密度降低,但差异无统计学意义(P>0.05),PD-L1蛋白表达水平降低(P<0.05);与对照组比较,NR2F2 OE组细胞增殖活性减弱(P<0.05),对PTX和CBP的药物敏感性增强,PTX的IC_(50)明显减小,CBP的IC_(50)因其药物浓度过高未能计算;ABCG2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:NR2F2过表达可抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,降低SOX2、PD-L1和ABCG2蛋白表达水平,抑制人卵巢癌SKOV3细胞的干性和免疫逃逸能力,增强人卵巢癌SKOV3细胞对PTX和CBP的敏感性。