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关键词： 胃癌   Achaete-scute家族bHLH转录因子2   生物信息学   预后   细胞生物学行为  

摘要： 目的 基于生物信息学分析Achaete-scute家族bHLH转录因子2(ASCL2)表达与胃癌患者不良预后的关系,通过细胞实验验证ASCL2对胃癌细胞生物学行为的影响。方法 通过TIMER 2.0数据库分析ASCL2在泛癌和胃癌中的表达,Kaplan-Meier Plotter数据库分析ASCL2表达对胃癌患者预后的影响,借助UALCAN数据库、TIMER 2.0数据库和Sangerbox数据库分析ASCL2表达与胃癌临床特征、免疫细胞浸润和免疫检查点基因以及ESTIMATE分数的关系;选择ASCL2显著高表达的胃癌细胞,通过转染小干扰RNA下调ASCL2的表达,利用CCK-8、流式细胞术、Transwell和细胞划痕实验,验证ASCL2基因对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果 从TCGA数据库中共鉴定出63个与胃癌远处转移相关的差异表达基因。与邻近的正常组织相比,在胃癌中ASCL2基因高表达(P<0.001);ASCL2高表达与胃癌患者更短的总生存期、首次进展期和进展后生存期显著相关(P<0.0001);ASCL2表达与胃癌分级、分期、淋巴结转移有显著相关性(P<0.05);ASCL2表达与CD8^(+)T细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞的浸润水平呈负相关(P<0.05),与CD4^(+) T细胞浸润水平无相关性(P>0.05)。ASCL2表达与60个免疫检查点通路基因中的45个之间存在相关性(P<0.05);ASCL2表达与间质评分、免疫评分和估计评分呈负相关。敲低ASCL2的表达可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。结论 ASCL2在胃癌中的高表达可能与预后不良有关,且在胃癌发病和进展中的作用,提示ASCL2可作为胃癌独立的预后生物标志物。

关键词： 白芨   白芨多糖   坏死性小肠结肠炎   网络药理学   细胞生物学  

摘要： 目的运用网络药理学和细胞生物学验证探讨白芨治疗坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)的分子作用机制。方法通过中药系统药理学数据库(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database,TCMSP)筛选出白芨有效成分;利用GeneCards、OMIM、PharmGKB和DisGeNet数据库筛选NEC的相关靶点,并与白芨活性成分作用靶点取交集;应用String数据库绘制PPI网络;通过Cytoscape软件绘制白芨-成分-靶点-疾病网络;借助DAVID数据库和R软件对靶点进行GO富集分析和KEGG通路富集分析;细胞生物学验证分析白芨多糖(Bletilla striata polysaccharide,BSP)对NEC的保护作用。结果共筛选得到白芨14个有效成分,涉及61个作用靶点,主要涉及炎症反应、氧化应激反应、细胞凋亡等,主要调节TNF、HIF-1、MAPK、NF-κB等信号通路,其作用机制包含抗氧化、抗炎、抑制细胞凋亡等。细胞生物学验证分析表明,BSP能够降低LPS引起的细胞凋亡,提高超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性(P<0.01)并降低肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平(P<0.05)。结论白芨可能是通过多成分、多靶点、多通路等途径发挥其治疗NEC的作用,白芨中的活性成分BSP可能是其治疗NEC的物质基础。体外水平验证了BSP能够降低LPS引起的细胞损伤,降低氧化应激反应,提高抗氧化性,为白芨治疗NEC提供新思路。

关键词： 微RNA   溶质载体家族2成员3   肾透明细胞癌   上皮间充质转化  

摘要： 目的探讨微RNA(microRNA,miR)-429对肾透明细胞癌细胞生物学特征的影响。方法采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人肾小管上皮细胞HK-2及肾透明细胞癌细胞ACHN、Caki-1、786-O、769-P中miR-429及SLC2A3 mRNA表达水平,其中Caki-1细胞中的miR-429、SLC2A3表达变化最为明显,因此选用Caki-1细胞进行后续实验。将对数生长期Caki-1细胞分为mimic NC组(转染mimic NC)、miR-429 mimic组(转染miR-429 mimic)、inhibitor NC组(转染inhibitor NC)、miR-429 inhibitor组(转染miR-429 inhibitor)、oe-NC组(转染oe-NC)、oe-SLC2A3组(转染oe-SLC2A3)、sh-NC组(转染sh-NC)、sh-SLC2A3组(转染sh-SLC2A3)、mimic NC+oe-NC组(同时转染mimic NC和oe-NC)、miR-429 mimic+oe-NC组(同时转染miR-429 mimic和oe-NC)和miR-429 mimic+oe-SLC2A3组(同时转染miR-429 mimic和oe-SLC2A3)。采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法检测上述11组Caki-1细胞中miR-429及SLC2A mRNA的表达水平;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测Caki-1细胞的增殖能力;Transwell实验检测Caki-1细胞的迁移、侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证mimic NC组和miR-429 mimic组Caki-1细胞中miR-429与SLC2A3的结合关系;Western blot检测Caki-1细胞中SLC2A3和上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达;免疫荧光染色检测Caki-1细胞中EMT相关蛋白的表达。结果肾透明细胞癌细胞系中miR-429的表达显著下调,SLC2A3 mRNA的表达显著上调,过表达miR-429能显著抑制癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT过程。SLC2A3能促进肾透明细胞癌细胞系EMT进程,并能恢复miR-429过表达对细胞EMT的抑制作用。双荧光素酶报告实验证实miR-429与SLC2A3相互结合,miR-429可靶向抑制SLC2A3。结论miR-429通过靶向抑制SLC2A3的表达,抑制肾透明细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT过程。

关键词： 细胞生物学   教学改革   实践   创新  

摘要： “细胞生物学”是生命科学相关学科各专业重要的一门专业基础课程,是当前生命科学发展最快的领域之一。“细胞生物学”课程内容繁多,基本概念、生命活动和信号转导过程庞杂抽象且枯燥。深入分析了“细胞生物学”课程在教学过程中存在的主要问题,并探讨了课程教学中的改革举措与具体实践。通过完善教学内容、优化教学方法与手段、全面提升思政育人实效等手段,旨在推动课堂教学改革,培养学生的综合素质和创新能力,助力打造一流本科课程。

关键词： 生存素   程序性死亡受体配体1   CD8^(+)T细胞   小细胞肺癌  

摘要： 目的探讨生存素(Survivin)对小细胞肺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法将NCI-H82细胞分为Vector组、Survivin组,NCI-H209细胞分为si-NC组、si-Survivin组,采用CCK-8和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测程序性死亡受体配体1(PD-L1)表达。CD8^(+)T细胞与各组NCI-H82和NCI-H209细胞共孵育后,酶联免疫吸附试验检测上清液中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)水平,细胞毒性试验检测肿瘤细胞裂解率。结果与Vector组比较,Survivin组NCI-H82细胞PD-L1表达和细胞增殖能力均升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.001)。与si-NC组比较,si-Survivin组NCI-H209细胞PD-L1表达和细胞增殖能力均降低(P<0.001),细胞凋亡率升高(P<0.001)。与Vector+CD8^(+)T组比较,Survivin+CD8^(+)T组细胞上清液中IFN-γ、IL-2水平及细胞裂解率均降低(P<0.001)。与si-NC+CD8^(+)T组比较,si-Survivin+CD8^(+)T组细胞上清液中IFN-γ、IL-2水平及细胞裂解率均升高(P<0.001)。结论Survivin调控小细胞肺癌的增殖、凋亡,并且上调PD-L1表达抑制CD8^(+)T细胞杀伤功能。

关键词： 重组人生长激素   生物学活性   细胞增殖法   方法学验证   联合验证  

摘要： 为探索基于Nb2-11细胞增殖的重组人生长激素(rhGH)体外生物学活性测定方法的标准化,本研究首先检测了2批rhGH原液,3批注射用rhGH和24批rhGH注射液的生物学活性,初步制订了实验有效标准。进一步按照《中华人民共和国药典》2020年版通则9401进行方法学验证。随后联合7家实验室采用本方法测定来自4家不同生产企业的6批制剂及2批原液的体外生物学活性,分别对实验室间一致性,实验室内和实验室间精密度进行了研究。用本方法和体内动物法分别检测28批rhGH原液,进行体内外结果一致性研究。最后检测多批不同效期rhGH样品,进行标准限度研究。联合验证结果表明,本方法具有良好的实验室内及实验室间重现性,拟订实验有效标准通过率为100%。本方法与体内动物法检测结果具有良好的一致性。动物实验获得中国食品药品检定研究院实验动物福利伦理委员会批准[批准号:中检动(福)第2024(B)004号]。本方法适用于国内外不同生产厂家的rhGH原液与制剂,可作为测定rhGH类产品生物学活性的标准化方法替代体内动物法应用于rhGH的质量控制和放行检验。

关键词： 思维导图   医学细胞生物学   章节总结   教学成效  

摘要： 探究思维导图章节总结法对医学细胞生物学的教学成效分析。方法 本研究以175位本科临床医学专业大一学生为研究对象,通过章节总结方式的不同,分为思维导图组和其他形式组,比较两组学生的期末考试卷面成绩、章节总结所用平均时长、问卷调查(包括章节总结的难易度、教学设计合理性、自评学习效果、对超星学习通的使用情况)等数据。结果 思维导图组学生的期末成绩平均分为70.19分(与其他形式组比较时有显著性差异(p<0.05)),其中分数集中在80~89分的占28%,而其他形式组学生的期末成绩平均分为65.24分,其中分数集中在50~59分的占30%;在进行章节总结时所用的时间和难易度方面,思维导图组学生所用时间(均时=1.8小时)更长,且难度更难(88.37%),与其他形式组(均时=1.6小时,总难度=62.12%)比较时均具有显著性差异(p<0.05);在教学设计合理性和对知识的掌握的自我评价中,两组学生的总满意率都较高,但在线上超星学习通的学习频次调查中,其他形式组学生在学习通的学习频次(93.18%)高于思维导图组(83.72%)。结论 通过思维导图进行章节总结,将医学细胞生物学分散的理论知识进行内化理解和梳理,同时将课中学习延展至课外,加强了知识点之间的关联性,有利于知识的复习与记忆,激发学生的创新思维能力,对教学的成效性有促进作用。

关键词： 喉癌   张力蛋白同源物   甲基化   临床价值   生物学行为  

摘要： 目的研究磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)基因甲基化在喉癌中的临床价值及对喉癌细胞生物学行为的影响。方法选择2016年1月至2017年12月诊治的喉癌患者(LGC组)和喉良性疾病患者为研究对象。分别将寡核苷酸序列(MON、UMON和CON)并转染至Hep-2喉癌细胞。采用甲基特异性PCR检测PTEN基因甲基化状态。分析PTEN基因甲基化与临床病理因素的关系。ROC曲线分析PTEN基因甲基化预测喉癌死亡效能。单因素及多因素Logistics回归分析喉癌患者死亡的危险因素。Kaplan-Meier分析PTEN基因甲基化与生存期的关系。CCK-8检测喉癌细胞增殖。细胞划痕试验检测细胞迁移。Transwell小室检测细胞侵袭数。结果LGC组患者肿瘤组织PTEN基因甲基化率显著高于癌旁组织和对照组(分别为72.92%、8.33%、8.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=108.215,P<0.01)。TU138、TU212喉癌细胞中PTEN基因为甲基化状态,而在Hep-2、NHLEC细胞中为未甲基化状态。低分化、肿瘤最大直径≥3 cm、有淋巴结转移及TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者PTEN基因甲基化率高于中-高分化、肿瘤最大直径<3 cm、无淋巴结转移及TNM分期Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05)。PTEN基因甲基化预测喉癌患者死亡的敏感度、特异度、AUC均高于肿瘤分化程度、肿瘤最大直径、淋巴结转移、TNM分期(Z/P=3.267/0.016、4.022/0.007、3.728/0.011、3.452/0.013)。PTEN基因甲基化、肿瘤分化程度低分化、肿瘤最大直径≥3 cm、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期为喉癌死亡的独立危险因素(P<0.05)。转染MON后Hep-2喉癌细胞PTEN基因甲基化,转染UMON及CON后Hep-2喉癌细胞PTEN基因未甲基化。MON组Hep-2喉癌细胞增殖活力、细胞迁移数及侵袭数显著高于UMON组及CON组(P<0.05)。结论PTEN基因甲基化可促进喉癌细胞增殖、迁移及侵袭。PTEN基因高甲基化与喉癌病情及预后密切相关,可作为喉癌病情及预后评估的标志物。

关键词： 骨肉瘤   SEMA6D   侵袭   PI3K/AKT  

摘要： [目的]探讨信号素6D(semaphorin 6D,SEMA6D)对骨肉瘤细胞增殖、侵袭的影响及其机制。[方法]将MG63细胞分为空白对照组(Ctrl组)、阴性对照组(si-NC组)和转染靶向SEMA6D的si-RNA组(si-SEMA6D组),给予相应的体外转染。采用CCK-8、细胞划痕、Transwell侵袭实验检测MG63细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化。Western blot检测下游相关信号通路蛋白表达情况。[结果]培养24 h,三组CCK-8值差异无统计学意义(P>0.05),在48 h和72 h,Ctrl、si-NC组CCK-8值显著高于si-SEMA6D组[(0.7±0.1)vs(0.7±0.1)vs(0.4±0.1),P<0.001;(1.7±0.1)vs(1.6±0.1)vs(1.0±0.1),P<0.001]。Transwell侵袭实验显示,Ctrl、si-NC组细胞侵袭数显著高于si-SEMA6D组[(435.0±28.2)vs(400.7±41.4)vs(291.3±31.1),P=0.022]。划痕24 h、48 h,Ctrl、si-NC组划痕愈合率显著高于si-SEMA6D组[(48.8±3.3)%vs(40.6±3.4)%vs(16.6±2.4)%,P<0.001;(74.7±1.1)%vs(67.6±3.0)%vs(49.5±2.3)%,P<0.001]。Western blot检测表明,相较于si-SEMA6D组,Ctrl组、si-NC组p-PI3K、p-AKT、pp38、MMP2的蛋白表达水平均显著增加(P<0.05),而三组中P13K、AKT、p38、Bcl-2及Bax的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]沉默SEMA6D后骨肉瘤MG63细胞可通过抑制PI3K/AKT及p38-MAPK信号通路,抑制细胞增殖、迁移及侵袭能力。

关键词： 医学院校   细胞生物学   科研素养   创新能力   序贯式培养   课程思政   医学教育改革  

摘要： 深化高等学校创新创业教育改革,不仅是对传统教育模式的挑战,更是对高等教育功能的重新定位。在全球化、信息化和知识经济的时代背景下,培养创新型青年人才已成为建设创新型国家的核心战略,也是高校人才培养的主要任务。大学生作为国家的未来和希望,其科研素养和创新能力的水平直接关系到国家的创新能力和国际竞争力。因此,近年来,高校纷纷将大学生科研素养和创新能力的培养提升到战略高度,并在教学实践中不断探索和尝试。文章在分析培养大学生科研创新能力的必要性和现状的基础上,以滨州医学院药学院的《细胞生物学》课程教学为例,阐明如何在日常教学中与科研有效融合,通过序贯式的科研训练提升学生的创新能力,探索为社会培养出更多优秀的创新型人才的新模式。