关键词：
黄酮类药物
牛血清白蛋白
金属离子
荧光光谱法
分光光度法
摘要：
血清白蛋白是血浆中含量最丰富的载体蛋白,黄酮类药物有广泛的药理活性。本文运用荧光光谱法和紫外-可见吸收光谱法,从分子水平上研究了有无金属离子存在时,芹菜素、黄芩素、花青素与牛血清白蛋白(BSA)在生理pH条件下的相互作用,得出了这几种黄酮类化合物与BSA相互作用的荧光猝灭常数、结合常数、结合位点数、热力学参数、分子间作用力类型。本论文主要工作和结论如下：
运用荧光光谱法研究了不同金属离子存在下芹菜素与BSA的相互作用及不同浓度Cu2+存在下芹菜素与BSA的相互作用。结果表明,Fe3+、Cu2+、Mn2+、Ni2+、Mg2+、Ca2+等金属离子不改变芹菜素对BSA的猝灭机理,仍是静态猝灭,以铜为例,芹菜素-BSA-Cu2+三元体系的荧光猝灭不是芹菜素和Cu2+降低的加和作用；金属离子的存在减小了芹菜素-BSA的结合常数和结合位点数,且结合常数随着温度的升高而降低,结合反应是放热反应;金属离子的存在不改变芹菜素与BSA的结合力类型,仍是静电作用力。加入不同浓度Cu2+后芹菜素与BSA间的结合常数和结合位点数减小,并且随着Cu2+浓度的增大,芹菜素和BSA的结合能力减弱的程度更大。通过紫外吸收光谱可知,芹菜素与BSA之间形成复合物,芹菜素与Cu2+形成了配合物,BSA能与Cu2+形成配合物,三元体系的紫外图谱与芹菜素-BSA二元体系不同,说明形成了新的复合物。由此可以推断芹菜素与Cu2+形成配合物与芹菜素有着不同的刚柔性、分子结构、疏水-亲水性等,使其难于与BSA结合；另一方面,BSA能与Cu2+形成配合物,可能因为Cu2+部分占据了芹菜素与BSA的结合位点,发生了竞争反应,从而影响BSA与芹菜素的结合,甚至抑制其结合。
运用荧光光谱法研究了不同金属离子存在下黄芩素与BSA的相互作用及不同浓度Fe3+下黄芩素与BSA的相互作用。结果表明金属离子的存在不改变黄芩素对BSA的猝灭机理,仍是静态猝灭,以铁为例,黄芩素-BSA-Fe3+三元体系的荧光猝灭不是黄芩素和Fe3+降低的加和作用；金属离子的存在减小了黄芩素-BSA的结合常数和结合位点数,且结合常数随着温度的升高而升高,结合反应是吸热反应；金属离子的存在不改变黄芩素与BSA的结合力,仍是疏水作用力。加入不同浓度Fe3+后黄芩素与BSA间的结合常数和结合位点数减小,随着Fe3+浓度的增大,黄芩素和BSA的结合能力减弱的程度增大。紫外吸收光谱显示,黄芩素与Fe3+形成了配合物,BSA与Fe3+有弱的相互作用,黄芩素与BSA之间形成了一种复合物,黄芩素-BSA-Fe3+三元体系的紫外图谱与黄芩素-BSA二元体系不同。因此可以推断,黄芩素与Fe3+形成的配合物与黄芩素有着不同的刚柔性、分子结构、疏水-亲水性等,使其难于与BSA结合,使得结合常数降低；BSA与Fe3+有弱的相互作用,使得Fe3+部分占据了黄芩素与BSA的结合位点,发生了竞争反应,从而影响BSA与黄芩素的结合。
采用荧光光谱法研究了自紫甘蓝中提取并经过XAD-2大孔树脂纯化的花青素与BSA之间的相互作用,结果表明花青素对BSA内源荧光产生静态猝灭。38℃时其两者的结合常数为1.09×106L·mol-1,两者有较强的结合能力。花青素与BSA的结合自发进行的,且ΔH>0,ΔS>0,说明花青素和BSA结合的作用力是由疏水作用力主导。同时考察了Ni2+、Zn2+、Cu2+、Fe3+、Mn2+、Mg2+等金属离子对花青素与BSA荧光猝灭常数、结合常数、结合位点数、作用力类型的影响,结果表明在金属离子的存在下,花青素与BSA的荧光猝灭机理仍是静态猝灭,金属离子增大了花青素与BSA的结合常数；在Mg2+存在时,ΔH<0,ΔS>0,说明该过程主要是静电作用力主导的；在Cu2+、Ni2+存在下,ΔH<0,ΔS<0,说明该过程主要是氢键和范德华力主导的；在Zn2+、Fe3+、Mn2+存在时,ΔH>0,ΔS>0,说明该过程主要是疏水作用力主导的。不同金属离子对花青素与BSA之间的作用力类型影响不同。
在pH4.7的乙酸-乙酸钠缓冲体系中,Fe(Ⅲ)与自紫甘蓝中提取并经XAD-2大孔树脂纯化的花青素形成稳定的络合物,利用该性质建立了测定Fe(Ⅲ)的分光光度新方法。实验结果表明,花青素与Fe(Ⅲ)在乙酸-乙酸钠缓冲体系中、溴化十六烷基三甲基铵存在下形成稳定络合物,络合物最大吸收波长610nm,摩尔吸光系数6.16×103L·mol-1·cm-1,Fe(Ⅲ)含量在2-10mg·L-1范围内与吸光度呈良好的线性关系,线性相关系数r=0.9997,定量检出限0.91mg·L-1。方法用于测定国家岩矿标准样品(超基性岩DZE-2)获得准确结果,测定相对标准偏差1.65%,岩矿样品加标回收率在93.8%-105%,方法可运于低常量或微量含
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