关键词:
山茱萸
2型糖尿病
胰岛素抵抗
炎症
NF-κB
摘要:
山茱萸是我国传统的名贵中药,是植物山茱萸(Cornus *** Zucc.)的去核干燥成熟果肉,属中医临床常用的传统抗衰老、治消渴(糖尿病)良药之一。目前已有研究表明,山茱萸对于改善2型糖尿病(T2DM)有良好功效,本论文分别从体外和体内实验探讨和比较山茱萸不同提取物改善胰岛素抵抗和T2DM作用,并从炎症角度研究山茱萸改善T2DM的具体机制。主要结果及结论如下.:(1)HepG2胰岛素抵抗细胞模型的建立:本实验以HepG2细胞为研究对象,利用高胰岛素诱导建立胰岛素抵抗模型,通过测定葡萄糖消耗量和细胞存活率确定胰岛素最佳作用浓度为10-7mol/L,最佳作用时间为24h,模型稳定时间为48h。(2)山茱萸不同提取物及其单体对胰岛素抵抗HepG2细胞糖脂代谢、氧化应激和炎症的影响:利用MTT法测定细胞存活率,确定醇提物最适浓度为200μg/mL,环烯醚萜苷最适浓度为50μg/mL,皂苷最适浓度为25μg/mL,鞣质最适浓度为50μμg/mL,马钱苷最适浓度为200μg/mL,莫诺苷最适浓度为25μg/mL,没食子酸最适浓度为5μg/mL,齐墩果酸最适浓度为50μμg/mL,上述条件下均能增加胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗量;在脂代谢方面,山茱萸不同提取物及其单体处理后,可以降低胰岛素抵抗细胞中TC、TG、脂滴含量,光镜下观察细胞周围脂滴明显减少,提示山茱萸不同提取物及其单体可以改善细胞内脂代谢紊乱,结果显示,各提取物组与对应的单体组相比,改善细胞内脂代谢紊乱效果相当或更为明显,其中鞣质提取物、醇提取物改善细胞内脂代谢紊乱效果最为明显;在氧化应激和炎症方面,山茱萸不同提取物及其单体可以降低细胞内MDA、ROS、TNF-α和IL-6含量,增加SOD活性,说明山茱萸不同提取物及其单体可以改善胰岛素抵抗细胞内氧化应激和炎症反应,结果显示,各提取物组与对应的单体组相比,改善胰岛素抵抗细胞的氧化应激和炎症效果相当或更为明显,其中鞣质提取物和醇提取物改善胰岛素抵抗细胞的氧化应激和炎症效果最为明显。(3)山茱萸不同提取物对T2DM小鼠糖脂代谢、胰腺、肝脏、氧化应激和炎症的影响:在糖脂代谢和胰腺病理学方面,山茱萸不同提取物可以显著降低空腹血糖、胰岛素水平、HOMA-IR、TG、TC、LDL-C水平,明显改善糖耐量,提高ISI、HOME-β、HDL-C水平,通过光镜观察,发现给药组的胰腺组织损伤状况也有所好转,说明山茱萸不同提取物可以改善T2DM的高血糖高血脂症状,缓解胰岛素抵抗,改善胰腺组织损伤,结果显示,鞣质提取物、总皂苷提取物和醇提取物改善效果最佳;在保护肝脏方面,山茱萸不同提取物显著降低小鼠AST和ALT水平,肝脏组织病变呈现不同程度的恢复,说明山茱萸不同提取物可以改善T2DM小鼠的肝脏损伤,结果显示,鞣质提取物和醇提取物对T2DM小鼠的肝脏损伤改善作用最佳;在氧化应激和炎症方面,山茱萸不同提取物显著降低CRP、TNF-ααIL-6和MDA水平,显著增强T-SOD、T-AOC、GSH-PX活性,说明山茱萸不同提取物对T2DM小鼠炎症及氧化应激具有明显改善作用,结果显示,鞣质提取物和醇提取物对氧化应激和炎症的改善效果最佳。(4)山茱萸不同提取物对T2DM小鼠NF-κB炎症信号通路和胰岛素信号途径的影响:山茱萸不同提取物显著或极显著下调p-TAK1/TAK1、p-JNK/JNK的比值和p-IKKβ、NF-κκBp65、COX2、iNOS、PEPCK的表达量,鞣质提取物、总皂苷提取物和醇提取物显著或极显著上调p-AKT/AKT比比值,环烯醚萜苷提取物上调p-AKT/AKT比比值,但无显著性差异,鞣质提取物和醇提取物显著或极显著上调p-GSK3β/GSK3β比值,总皂苷提取物和环烯醚萜苷提取物上调p-GSK3β/GSK3β比值,但无显著性差异。推测山茱萸不同提取物通过作用NF-κκB炎症信号通路影响胰岛素信号通路,改善胰岛素抵抗,进而改善T2DM。其中,鞣质提取物和醇提取物对NF-κB炎症信号通路作用效果最为显著。