关键词:
肝癌
当归四逆汤加吴茱萸生姜汤
网络药理学
分子动力学模拟
CASP3
摘要:
目的:基于网络药理学、分子动力学模拟及免疫组化探究当归四逆汤加吴茱萸生姜汤(DSJWST)抗肝癌的作用机制。方法:借助中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)对DSJWST所含8味中药的活性成分及潜在靶点进行筛选,整合GeneCards、OMIM、TCGA等数据库资源,获取与肝癌相关的靶点信息,再通过韦恩图分析,精准确定药物-疾病的交集基因。利用String数据库构建蛋白互作(PPI)网络,直观展示靶点间的相互作用关系,并采用Cytoscape软件的MCC算法识别DSJWST抗肝癌关键靶标,进一步筛选核心成分。通过基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)对靶蛋白功能和相关通路进行富集分析,挖掘DSJWST抗肝癌的潜在分子机制。同时,借助Cytoscape构建“药物-核心成分-核心靶点”网络,呈现药物、成分与靶点之间的内在联系。采用Pymol插件和GROMACS 2016.4软件,开展分子对接及分子动力学模拟实验,从分子层面探究DSJWST活性成分与靶标的结合特性及稳定性。最后,通过免疫组化实验,对肝癌关键靶点表达及其与临床预后的相关性进行验证。结果:经筛选,共获得1 599个活性成分和4 124个肝癌相关靶点,确定了166个交集靶点。通过PPI网络筛选出10个关键靶标,包括IL6、TNF、STAT3、IL1B、AKT1、IFNG、TP53、NFKBIA、JUN和CASP3。KEGG富集分析显示,DSJWST治疗肝癌主要涉及AGE-RAGE信号通路、IL-17信号通路、TNF信号通路及HIF-1信号通路等。分子对接结果显示,DSJWST的10个活性组分与7个靶标的对接结合能均小于-5.0 kcal/mol,表明两者具有一定的结合活性。之后,选取结合能最高的山柰酚与CASP3进行分子动力学模拟,结果表明,在与山柰酚的结合过程中CASP3结构趋于稳定。免疫组织化学实验证实,CASP3在肝癌组织中呈低表达状态,且与良好预后相关。结论:DSJWST可能通过靶向CASP3,进而介导AGE-RAGE信号通路的激活,发挥抑制肝癌进展的作用。