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关键词： 急性肾损伤   程序性坏死   炎症   吴茱萸次碱   PDE4B  

摘要： 背景和目的:急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)以是一种由多病因引起的,以肾功能迅速下降为特征的临床综合征。引起AKI的原因包括药物毒性,缺血再灌注,脓毒血症等。AKI是住院患者最常见的并发症之一,其发病率日益增加,尤其在老年人中具有高发病率和高死亡率,尽管有一定比例AKI患者肾脏会发生自我修复过程,但严重或反复发生的AKI仍可能转变为慢性肾脏病(CKD)甚至终末期肾脏病。由于目前AKI的治疗仅包括对症支持治疗和肾脏替代治疗,仍缺乏有效的治疗药物和关键靶点,因此寻找AKI的治疗药物具有重要意义。传统中药(TCMs)是以传统中医药理论作为指导,拥有独特的应用形式和理论体系,被用于疾病的防治以及具有保健作用的天然药物或其加工替代品,主要包括植物药、矿物药、动物药等等。由于它具有较低毒副作用的特点,近年来越来越多的研究尝试将中药运用于临床疾病的治疗,而青蒿素在疟疾治疗中的成功应用更证实了天然化合物的潜在价值。本课题组前期通过构建体外和体内AKI模型,初步鉴定出一系列具有抗炎、抗细胞死亡作用的中药单体及其衍生物包括汉黄芩素、葛根素、淫羊藿苷、原儿茶醛、吴茱萸次碱等。前期研究结果显示,从传统中药吴茱萸中提取出的化学单体吴茱萸次碱(Ru)对肾小管上皮细胞损伤具有良好的保护作用。我们通过对吴茱萸次碱的结构改造,增加其选择性,降低其副作用,获得了一系列3-芳香族磺酰胺取代的吴茱萸次碱衍生物。本课题进一步探究吴茱萸次碱衍生物对顺铂诱导的急性肾损伤的保护功能及其作用机制,为急性肾损伤寻找潜在的治疗靶点和新的思路。方法:体外实验:选取第6至15代之间的人肾小管上皮细胞(HK2)用于实验。首先通过MTT筛选药物最适治疗浓度。该实验分为六组:正常对照组,单独给药组,顺铂模型组,低剂量给药组,中剂量给药组,高剂量给药组。提取细胞蛋白和m RNA,通过Western blot,免疫荧光,Real-time PCR检测肾脏损伤因子1(KIM-1)表达,采用Western blot,Real-time PCR检测肾脏炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6的释放,炎症通路关键蛋白NF-kB-P65的磷酸化,运用Western blot检测程序性坏死关键蛋白RIPK1/RIPK3/MLKL的表达,凋亡金指标Cleaved-Caspase3的变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平。最后运用Western blot检测氧化应激NOX家族重要成员NOX1,NOX2,NOX4的表达,DCF、DHE检测细胞内氧化应激水平。运用公共预测网站DS2017进行药物靶点预测,采取分子对接、CESTA实验验证药物与靶点PDE4B的结合。运用Western blot,免疫荧光检测靶蛋白PDE4B的表达。通过si RNA转染沉默PDE4B表达,运用Western blot,Real-time PCR检测PDE4B沉默后,吴茱萸次碱衍生物对肾小管上皮细胞炎症反应,细胞程序性死亡的影响。采用PDE4抑制剂咯利普兰(Rolipram)作为阳性对照组,运用Western blot,Real-time PCR检测药物选择性抑制PDE4B是否具有更好的保护作用。体内实验:通过小鼠腹腔注射顺铂(20 mg/kg)构建急性肾损伤模型,分别给予吴茱萸次碱四号衍生物Ru-4(25,50,和100 mg/kg)治疗。该实验分为六组(n=8):正常对照组,单独给药组,顺铂模型组,低剂量给药组,中剂量给药组,高剂量给药组,吴茱萸次碱母核给药组。造模成功后,通过血肌酐和尿素氮检测观察各组小鼠肾功能变化,运用PAS染色对比各组肾小管形态学改变,通过Western blot,免疫组化,Real-time PCR检测肾脏损伤因子1(KIM-1)表达。同样采用Western blot,免疫组化,Real-time PCR检测肾脏炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6的m RNA表达水平,炎症通路关键蛋白NF-kB-P65的磷酸化,以及药物靶蛋白PDE4B的表达变化。最后运用Western blot检测程序性坏死关键蛋白RIPK1/RIPK3/MLKL的表达,凋亡金指标Cleaved Caspase3的变化以及氧化应激NOX家族重要成员NOX1,NOX2,NOX4的表达。结果:体外实验:MTT显示,在吴茱萸次碱系列衍生物中,Ru-4和Ru-7具有最好的细胞保护作用。同时Western blot结果表明Ru-4具有比吴茱萸次碱母核以及Ru-7更好的减轻肾小管上皮细胞损伤的作用。免疫荧光,Real-time PCR同样证实Ru-4可以减轻KIM-1的表达。Western blot,Real-time PCR也表明Ru-4可以减轻炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6的释放以及NF-kB-P65的磷酸化。此

关键词： 山茱萸   配方颗粒   制备工艺   质量评价  

摘要： 山茱萸(Corni Fructus)是一种具有补益肝肾和收涩固脱作用的名贵传统药材,在我国栽培和应用历史悠久。传统的中药制剂中常以山茱萸饮片入药,但是饮片存在用量过多,煎煮过程复杂、携带不方便等缺点,严重影响到山茱萸的临床疗效及用药标准。中药配方颗粒的兴起,不仅解决了饮片入药存在的问题,还能在饮片的基础上对药物本身的药性做到最大程度的保留,更具有免煎、服用方便和调制简单等优点。本论文按照《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求(征求意见稿)》中有关中药配方颗粒的规定与要求,从山茱萸原药材-饮片-标准汤剂-配方颗粒等方面进行逐一的质量控制与检测,通过多组分化学表征和生物效价联合使用模式应用于山茱萸配方颗粒的质量评价,初步拟定山茱萸配方颗粒的质量标准草案,确定功效成分指标含量,以期得到全面而独特的山茱萸配方颗粒质量评价方法,以确保山茱萸的质量和临床用药的安全性,为相关部门的质量标准的制定提供数据参考,规范山茱萸药用市场,使中药配方颗粒在临床上得到有效推广,促进山茱萸资源开发和综合利用。主要研究结果如下:1.山茱萸原药材的质量评价:外观片状或扁筒状,多呈暗红色。水分含量范围是8.47%～13.05%;总灰分含量范围是4.02%～6.00%;浸出物含量范围是50.01%～63.75%。没食子酸含量范围是0.02%～0.13%;山茱萸新苷含量范围是0.10%～0.29%;獐芽菜苷含量范围是0.05%～0.13%;莫诺苷含量范围是0.96%～2.14%;5-HMF含量范围是0.29%～1.30%;马钱苷含量范围是0.45%～1.26%;原儿茶酸含量范围是0.01%～0.15%。全部符合2015版《中国药典》第一部山茱萸项下规定。2.山茱萸饮片的质量评价:质地柔软,多呈紫黑色。水分含量的范围是4.47%～12.65%,总灰分含量的范围是3.50%～6.00%,浸出物含量的范围是50.00%～58.60%。全部符合2015版《中国药典》第一部山茱萸饮片项下规定。没食子酸的含量范围是0.16%～0.79%;5-HMF的含量范围是0.24%～0.71%;原儿茶酸的含量范围是0.02%～0.11%;莫诺苷的含量范围是0.64%～1.85%;獐芽菜苷的含量范围是0.13%～0.21%;马钱苷的含量范围是0.07%～0.34%;山茱萸新苷的含量范围是0.17%～0.31%。10批山茱萸饮片莫诺苷和马钱苷含量总和符合药典规定,达到 1.2%。3.山茱萸标准汤剂的质量评价:没食子酸的可接受含量范围是0.15%～0.66%;5-HMF的可接受含量范围是0.16%～0.29%;原儿茶酸的可接受含量范围是0.02%～0.06%;莫诺苷的可接受含量范围是0.57%～3.08%;獐芽菜苷的可接受含量范围是0.03%～0.15%;马钱苷的可接受含量范围是0.06%～0.30%;山茱萸新苷的可接受含量范围是0.07%～0.23%。出膏率范围是46.11%～55.33%,平均出膏率为50.34%。转移率测定结果为,没食子酸的范围是63.33%～96.88%,5-HMF的范围是28.57%～96.43%,原儿茶酸的范围是62.07%～93.68%,莫诺苷的范围是83.33%～178.60%,獐芽菜苷的范围是38.12%～91.61%,马钱苷的范围是50.06%～94.41%,山茱萸新苷的范围是36.66%～86.33%。10批山茱萸标准汤剂莫诺苷和马钱苷含量的总和符合药典规定,达到1.2%。4.山茱萸配方颗粒的制备工艺探究:最佳制备工艺的优化结果表明,参照“征求意见稿”制备山茱萸配方颗粒,采用湿法制粒,选用麦芽糊精作为辅料,按照干浸膏粉和麦芽糊精1:0.8的比例,制成适宜的软材,喷以85%的乙醇,在60℃下进行烘干,即制得山茱萸配方颗粒。5.山茱萸配方颗粒的质量评价:水分含量范围是1.84%～3.70%,溶化性良好,都能在5 min内溶化于90℃的热水中,粒度检查中,不合格率的范围是6.25%～11.07%,全部符合2015版《中国药典》第四部颗粒剂项下规定。含量测定中,共有10批山茱萸配方颗粒的莫诺苷和马钱苷含量总和超过1.2%。转移率测定结果为,没食子酸的范围是28.5%～77.2%,5-HMF的范围是28.27%～89.6%,原儿茶酸的范围是75.0%～100.0%,莫诺苷的范围是50.7%～94.2%,獐芽菜苷的范围是27.2%～90.0%,马钱苷的范围是18.5%～87.5%,山茱萸新苷的范围是78.5%～94.7%。体外细胞实验初探山茱萸配方颗粒药效结果显示,当山茱萸配方颗粒浓度为100mg/L,作用96h时,其对HepG2肝癌细胞的增殖具有显著的抑制作用;当浓度为200mg/L,作用96h时,其对HepG2肝癌细胞的增殖具有极显著的抑制作用。综上所述,本文拟定

关键词： CYP2E1   二烯丙基硫醚   扩张型心肌病   氧化应激   凋亡   吴茱萸碱   衍生物   神经保护   动物模型  

摘要： 背景:细胞色素P450 2E1(Cytochrome P4502E1,CYP2E1)是由细胞色素P-450基因超家族编码的一种血红素蛋白,主要位于内质网,参与类固醇、脂肪酸、前列腺素、药物、致癌物质和环境污染物等外源性化学物质的氧化代谢。CYP2E1在多种心脏疾病情况下表达上调,主要通过活性氧造成损害。有研究表明,在小鼠体内,CYP2E1表达水平升高可诱导心肌细胞凋亡,而CYP2E1表达水平降低可减轻扩张型心肌病的病理发展进程,但是通过靶向抑制CYP2E1治疗扩张型心肌病的作用和机制尚不清楚。本研究旨在研究二烯丙基硫醚(Diallyl sulfide,DAS)靶向抑制CYP2E1对扩张型心肌病的治疗作用以及可能的治疗机制。方法:(1)动物分组与给药处理:将4月龄的cTnTR141W转基因小鼠和同窝阴性的野生型小鼠随机分为6组,雌雄各半。这6组分别为:NTG安慰剂正常对照组、安慰剂模型对照组、DAS低剂量(200mg/kg)模型治疗组、DAS高剂量(400mg/kg)模型治疗组、依那普利拉阳性药模型治疗组(0.76mg/kg)、DAS(400mg/kg)野生型给药组。(2)在整体、显微和超微水平对小鼠心脏形态和功能进行表型分析:采用超声影像分析对小鼠心脏整体功能和结构进行观察。通过H&E染色、Masson染色和透射电镜技术对小鼠心肌显微和超微形态进行分析。通过聚合酶链式反应技术对小鼠心肌纤维化标志物的mRNA表达进行分析。(3)通过生化及分子生物学技术分析DAS参与扩心病小鼠心肌氧化应激和凋亡进程的分子作用机制:通过生化分析手段对小鼠心肌ROS标志物,即对谷胱甘肽、过氧化氢、丙二醛进行测定。通过分子生物学技术:即Tunel检测和Western Blot技术对心肌细胞凋亡和相关凋亡标志物分子进行测定,包括Procaspase-9、Activated caspase-9、细胞色素 c、Procaspase-3 及 Activated caspase-3。结果:(1)在整体水平上,通过超声影像分析发现,经过DAS处理后,cTnTR141W扩张型心肌病模型小鼠的典型扩张型心肌病病理表型得到明显改善。在显微水平,通过H&E及Masson组织学染色结果表明,DAS处理后,cTnTR141W扩张型心肌病模型小鼠心肌显微排列得到改善,心肌细胞间隙胶原蛋白沉积得到改善,同时Ⅲ型胶原的mRNA水平检测也对胶原沉积的改善作用进行佐证。在超微水平上,通过透射电镜观察结果表明,DAS处理后,cTnTR141W扩张型心肌病模型小鼠心肌的超微结构损伤,包括心肌纤维断裂溶解、肌浆网扩张、线粒体肿胀、嵴缺失和空泡化等得到明显改善。同时,依那普利拉处理后,cTnTR141W扩张型心肌病模型小鼠心脏功能和形态、心肌细胞间隙胶原蛋白沉积、超微结构的损伤均有明显改善作用。(2)通过对氧化应激及凋亡信号关键分子的检测,表明经DAS处理后cTnTR141W扩张型心肌病模型小鼠心肌组织内,过氧化氢、丙二醛水平降低,还原性谷胱甘肽水平显著增加,心肌组织内氧化应激水平得到明显改善。同时,经DAS处理后cTnTR141W扩张型心肌病模型小鼠心肌细胞的凋亡得到显著抑制,同时心肌细胞内Caspases 9和3的激活得到明显抑制,细胞色素c的释放亦得到明显改善。(3)依那普利拉虽然对cTnTR141W DCM小鼠心肌氧化应激水平无明显影响,但是能通过抑制线粒体凋亡通路,降低cTnTR141W扩张型心肌病模型小鼠心肌细胞的凋亡数量。并且,依那普利拉治疗明显改善心脏的结构、功能和病理改变,尤其是显微结构和超微结构的改变。结论:DAS处理可显著改善cTnTR141W扩张型心肌病模型小鼠的心肌病病理表型,包括心室腔扩张、室壁变薄、心肌纤维化和心脏功能减弱等。DAS处理后通过竞争性抑制CYP2E1,降低了心肌内氧化应激水平,并且抑制线粒体相关的凋亡通路,并最终抑制心肌细胞的凋亡。抑制CYP2E1可能是一个有价值的治疗策略,其可参与控制涉及CYP2E1表达上调的心血管疾病的发生发展进程。此外,开发对CYP2E1具有较强抑制性能和较高生物利用度的DAS类似物,可以为扩张型心肌病及心衰的防治提供线索和研究方向。背景:阿尔兹海默症是一种以进行性认知功能障碍,记忆和行为损伤为特征的不可逆的神经退行性疾病,由于其分子发病机理的复杂性和各种因素的相互作用,AD的病因和发病机理尚未得到充分阐明,因此,目前尚待开发有效的AD治疗方法。从中草药吴茱萸中提取出的吴茱萸碱是一种喹诺酮生物碱,已有研宄发现,吴茱萸碱可以抑制炎症反应和大脑内小胶质细胞的过度活化,提高APPswe/PSlAE9转基因小鼠的学习和空间记忆能力。方法:通过EDC1介导的缩合反应有效地合成吴茱萸碱及其衍生物。在体外研宂,通过细胞增殖检测检测吴茱萸碱衍

关键词： 吴茱萸   热熨   肝郁气滞型   胆石症   疼痛  

摘要： 目的:观察、评价吴茱萸热熨对肝郁气滞型胆石症患者疼痛、CRP浓度、症状积分及中医症候疗效等指标的影响,以期为此类患者提供一种简便、有效的中医护理干预方法,同时为吴茱萸热熨法的推广应用提供依据。方法:本研究选取2019年11月～2020年6月期间入住福建省某三级甲等医院普外科的肝郁气滞型胆石症疼痛的患者为主要研究对象,根据诊断标准、纳入标准和排除标准等进行筛选入组70例患者,合格入选的患者采用SPSS20.0统计软件进行随机分组,各35例。对照组给予西医常规治疗及护理;试验组在给予西医常规治疗及护理的基础上,加用吴茱萸热熨干预。吴茱萸热熨在使用解痉药物氢溴酸山莨菪碱注射液(规格1ml:10mg;生产厂家:成都第一制药有限公司,国药准字号H51021970)10mg肌肉注射前30min进行,每次干预时间为15～20min,每日1次,共干预5d。观察记录两组患者干预前、干预后1h、2h、24h、48h以及干预结束后的疼痛评分(VAS值)、干预前后血清中CRP浓度、症状积分及中医症候疗效等指标变化情况。用Excel软件收集录入数据,用统计学软件SPSS20.0进行数据处理分析。结果:1一般资料及干预前各指标比较分析两组患者的年龄、性别、婚姻情况以及文化程度比较,结果均P>0.05,差异无统计学意义;两组患者的家族史、饮酒史、吸烟史、过敏史、重大疾病史、传染病史以及胆结石病变部位等相关病史比较,均显示P>0.05,差异无统计学意义;两组患者均在使用解痉药氢溴酸山莨菪碱注射液10mg肌肉注射的同时,对两组患者干预前疼痛评分(VAS值)、CRP浓度及症状积分数据进行比较,均显示P>0.05,差异无统计学意义。2干预后各评价指标比较分析2.1疼痛评分两组患者干预前、干预后1h、2h、24h、48h以及干预结束后的VAS比较,时间效应差异、组间效应差异、交互效应差异均有统计学意义(P<0.05)。2.2 CRP浓度两组患者干预前后CRP浓度及干预后两组患者的CRP浓度的比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.3症状积分干预后两组患者的症状积分以及两组患者干预前后的症状积分比较,差异有统计学意义(P<0.05);且试验组干预前后主要临床症状中右胁部疼痛、痞满饱胀、情绪抑郁等有极显著统计学意义(P<0.01),而对照组干预前后主要临床症状积分除了嗳气恶心、口干口苦外,其余差异均有统计学意义(P<0.05)。2.4中医症候疗效评价干预后两组的中医症候疗效差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1.吴茱萸热熨能够有效缓解肝郁气滞型胆石症患者的疼痛。2.吴茱萸热熨有助于降低肝郁气滞型胆石症患者CRP水平。3.吴茱萸热熨有助改善肝郁气滞型胆石症患者的中医症候表现。

关键词： 先秦   两汉   巫   祭祀   宗教  

摘要： 巫观念是沟通代际的桥梁。巫观念在先秦时期有较大的社会影响,礼仪、祭典、俗例、语汇多与之相关。巫观念的裂变与中国古代文明的推进相关。由“巫”到“人”的转变中,其实弥散着两种趣向。一种是巫的观念驻扎在君王心中;另一种则是巫的观念始终萦绕在士大夫、平民的意识当中。逮至汉代,一方面,帝王在施政活动里融入了巫的传统力量;另一方面,这种力量悄然无声地转化成为他们内心深处的支柱力量。本文选定巫观念作为主要研究对象,通过钩沉不同时空的史料,以其中的语料为基点,厘清出先秦至两汉时期巫观念的发展脉络,兼论史家的书写问题,得出他们的笔下嵌入了自身的思想观念。随着近代考古发掘的进展,一大批出土文献纷纷现世,这些新出土的简牍、帛书无疑给先秦、秦汉史的研究注入了新的活力。为了更好地探究这一长时段巫观念的变迁,笔者将全文析为如下几个部分:第一部分是绪论。这一部分主要论述了这一选题的缘起及研究意义、国内外学人相关的著述情况、相关概念的界定、史料的来源和研究方法等几个方面内容,从而得出这一议题的可行性与争论点,巫观念这一概念的限定范围,理论切己的重要性,并在本部分进行了必要的讨论。第二部分着重于分析巫观念的出现与确立的过程。这一部分重点叙述了人类自扎根于地球后,巫是如何裂变的,进而说明古代农业、历法、宗教出现也是人类观察自然,反观己身的结果,巫具有三个特点,分别是巫具有特异功能、神圣梦境和法器具有稀缺性的特点,历史文本中的古圣王黄帝具备巫的印迹,比如,“黄帝梦境”,梦境类似于异象,多指梦中传道。从史籍中看,颛顼时期对宗教进化的影响力大,但黄帝的身上的巫观念更为后世帝王所承继,可以说,黄帝的影响力并不亚于颛顼。第三部分是分析了三代历史中的巫观念。针对古史的繁芜、分散的特点,这一部分主要引入文法结构来分析古史,笔者通过大量爬梳传世文献、出土文献,诸如《上海博物馆藏战国楚竹书》和《竹书纪年》,组合不同文献中的相同信息,经过分析后,得出观念性的东西不会因为时空而被割裂,夏、商、周三代的历史中笼罩着巫观念的浓郁气息,换句话说,“三王”的背后亦有思想的延续,并对妹喜、妲己的形象进行了再分析,从而得出她们或许是政治权力的牺牲品。第四部分讨论的是巫观念的盛行与时人观念。这一部分遵循的视角是眼光自上及下,重点分析了春秋战国时期的巫观念,这时,巫观念早已褪去单一的祭祀外衣,且转化为人们意识中的一部分。从日渐丰富的史料中,我们可以敏锐地捕捉到君王、大臣、知识分子等相继借助巫观念的情势跃然于纸上,他们不经意间使用的语汇多与巫观念相关,楚国这个国家就颇具这一特色。即便是先进的知识分子,也无法与传统完全割裂,比如,孔子,正因为此,他的形象具有反复性的特点。另外,笔者使用《国语》和《左传》组合分析了史家司马迁笔下的“吴、越之战”,得出了吴、越两君王的意识中亦有巫观念的成份,从而得出史家司马迁的记载具有选择性,甚至存有抵牾之处。第五部分论述的是秦汉帝国的巫观念。这一部分笔者从秦的先祖入手,剖析了秦汉帝国的巫观念,揭示出秦帝国的统治者不仅与先祖有着极深的羁绊,而且追随黄帝的步伐,向往上天,汉帝国的统治者汉武帝更是如此,平民也接受了这一观念,还整合为之己用,并再次得出司马迁记载存有疏漏,其记载带有明显的选择性的特点。如果说齐桓公试图封禅是个别案例,此时,已蔚然成风。另外,语汇的使用限定变得更为明确,比如,“灵”这一语素已成为皇帝的御用语汇,不仅广泛见于正式诏书中,而且大将军卫青一度把它作为上书给武帝的专用语汇。这一部分亦采用出土文献进行佐证,从不偏信于任何一种文献。结语部分对论文的相关论点进行了凝练。

关键词： 山茱萸   DNA甲基化   5-氮杂胞嘧啶核苷   药用活性成分  

摘要： 山茱萸(Cornus officinalis *** Zucc.)属于山茱萸科山茱萸属多年生乔木,生于海拔400—1500米,主产于陕西、浙江、河南等地,其干燥成熟果肉(俗名枣皮)是我国名贵中药材,具有补益肝肾、收涩固脱和调节免疫等作用。山茱萸果皮中的药用活性成分主要包括环烯醚萜苷类(CIGs,如马钱苷、莫诺苷、獐牙莱苷等)、有机酸类(如没食子酸、原儿茶酸、熊果酸等)、多糖类等,在治疗糖尿病、抗血栓、抗炎、抗癌和增强记忆力等方面具有良好的功效。前期在山茱萸种质资源的评价与保存、遗传多样性分析、药用成分提取及含量测定、分子标记等方面已做了系统研究,但在基因组DNA甲基化与马钱苷等药用活性成分积累关系方面未见相关报道。因此,本研究以实验室筛选综合性状优良、前期已转录组测序的山茱萸种质(ZJ026)为实验材料,5-氮杂胞嘧啶核苷(5-azaC)溶液喷施处理,同时对照组喷施蒸馏水,每隔20天采集样品。采用高效液相色谱(HPLC)法测定了果实和叶片中的6种药用活性成分含量,利用甲基化敏感扩增多态性(MSAP)法测定了果实基因组DNA甲基化率及模式,并应用qPCR法测定了果实中马钱苷合成途径关键酶基因G10H和SLS的相对表达量,通过对比分析对照和不同浓度5-azaC处理下全基因组范围内胞嘧啶甲基化程度及位点、马钱苷和莫诺苷等6种药用成分含量等,探讨基因组DNA甲基化水平、合成途径关键酶基因表达量与药用成分积累之间的关系,以期能够从DNA甲基化方面揭示山茱萸果实药用成分积累与变化的分子机制。主要结果如下:1.低浓度(10 μM、50 μM)5-azaC能显著促进山茱萸成熟期(10月)果实和叶片中环烯醚萜苷的积累(P<0.05),中浓度(100μM)能显著促进生长期(8月)果实中环烯醚萜苷和有机酸的积累,高浓度(500 μM、1000 μM)处理能显著促进生长期果实和叶片中有机酸的积累,其他多为抑制作用。从8月初到10月中旬,对照组果实中5-羟甲基糠醛(5-HMF)的含量逐步增高,莫诺苷含量逐步降低,而马钱苷、獐牙菜苷、没食子酸及原儿茶酸的含量先增高后逐步降低;处理后60 d以内,6种药用成分的含量总体上显著低于对照(P<0.05),60 d之后,其含量趋于对照水平。在同一时期里,对照组叶片中马钱苷及两种有机酸的含量先逐步增高后显著降低,莫诺苷含量于9月中旬达到最高,且叶片中没有检出5-HMF;处理后80d以内,3种环烯醚萜苷的含量总体上显著低于对照(P<0.05),到了成熟期,两种有机酸的含量显著高于对照。6种药用成分含量之间的相关性为:马钱苷、莫诺苷、獐牙菜苷、没食子酸及原儿茶酸含量间均存在显著正相关(P<0.05);而5-羟甲基糠醛与马钱苷、莫诺苷、獐牙菜苷、没食子酸、原儿茶酸含量间均存在极显著负相关(P<0.01)。2.低浓度5-azaC处理果实后20 d和80 d,马钱苷合成通路中两个关键酶基因G10H和SLS的表达量均显著高于对照(P<0.05);中浓度和高浓度处理后20 d,G10H表达量显著增高(P<0.05),而SLS表达量显著降低,处理后40 d两者表达量均显著降低;中浓度处理后80 d,两者表达量相比对照均显著增高(P<0.05);高浓度处理后60 d,两者表达量相比对照也显著增高。3.山茱萸对照组果实基因组DNA半甲基化率和总甲基化率随生长时期逐步降低,经5-azaC处理后,两者总体上低于对照;全甲基化率随生长时期总体呈降低趋势,处理后20d和40d,显著高于对照,处理后80d(成熟期),显著低于对照(P<0.05)。这说明5-azaC处理在前期一段时间内(40 d)能提高全甲基化率,总体上显著降低了半甲基化率和总甲基化率(P<0.05)。另一方面,5-azaC处理后,甲基化和非甲基化位点、半甲基化和全甲基化位点之间均存在相互转变,且5-azaC浓度越高去甲基化位点越多;5-azaC的作用有一定浓度范围。4.对5-azaC处理后基因组DNA甲基化率、关键酶基因表达量和药用活性成分含量进行相关性分析,结果发现:(1)对照组与5-azaC(500 μM)处理后果实的G10H表达量与全甲基化率存在显著负相关(P<0.05),而SLS表达量与总甲基化率存在显著正相关。(2)对照组獐牙菜苷含量与半甲基化率存在极显著正相关(P<0.01),5-azaC浓度为100μM时,马钱苷含量与全甲基化率、獐牙菜苷含量与总甲基化率均存在显著正相关(P<0.05)。(3)对照组G10H表达量与马钱苷和莫诺苷含量之间有正相关性,但不显著;值得关注的是,处理组G10H表达量与莫诺苷含量间存在极显著负相关(P<0.01);对照组与5-azaC(100 μM)处理后SLS表达量与马钱苷和莫诺苷含量均呈显著正相关(P<0.05),表明G10H和

关键词： 文庙   祭祀   教育   褒奖   基本功能  

摘要： 文庙作为具有鲜明的中华传统文化特色的古老建筑,有重要的祭祀功能、教育功能和褒奖功能,发挥着"维系人心、匡扶世道""传承文化、培养人才""振奋士民、淳厚乡风"的重要作用。但无论是祭祀功能、教育功能还是褒奖功能,最终的目的都是为了实行教化。正是由于这三大功能的支撑,文庙才得以经久不衰并延续至今。因此在当代社会,我们更应该重视文庙的功能。

关键词： 理中丸   慢性胰腺炎   吴茱萸汤   小建中汤   cPLA2(胞浆型磷脂酶A2)   EP4(前列腺素E2(PGE2)受体4)   PAR2(蛋白酶激活受体2)   TRPA1(瞬时感受器电位锚蛋白亚型1)  

摘要： 研究背景:理中丸、小建中汤和吴茱萸汤是《伤寒论》中的经典名方,具有温中散寒止痛的功效,在中医《方剂学》教材中归属于温里剂,主治中焦寒证。脘腹疼痛是中焦虚寒证的主要表现之一,通过温中散寒的治疗方法可以有效减缓疼痛。胰腺位处中焦,受到炎症影响,可出现疼痛。吴茱萸汤、小建中汤、理中丸(温中三方)均对中焦寒痛疗效显著,现代研究证明它们均可用于治疗慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)。热敏通道瞬时感受器电位锚蛋白亚型1(Transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)在慢性胰腺炎发病中发挥重要作用,TRPA1介导胰腺的神经元性炎症和痛觉过敏,阻断该通路能显著缓解疼痛,减轻炎症。已报道温中三方中包含的干姜、生姜、肉桂、吴茱萸中所含有的有效成分姜酚、肉桂醛和吴茱萸碱等具有调节TRPA1的作用。温中三方治疗胰腺炎症及疼痛可能是通过活化、脱敏或抑制TRPA1而实现。本研究通过长时间反复多次注射雨蛙素的实验手段诱导产生小鼠慢性胰腺炎模型,采用温中三方进行干预,通过小鼠疼痛行为学测定、髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)和血清淀粉酶(Amylase,AMY)测定、胰腺组织病理学分级以及免疫组织化学、免疫蛋白印迹(Western Blot)等实验方式,从热敏通道TRPA1的角度揭示理中丸、小建中汤、吴茱萸汤治疗CP的炎症和疼痛的分子生物学机制。研究目的:探讨热敏通道TRPA1在理中丸、小建中汤和吴茱萸汤治疗慢性胰腺炎中发挥缓解疼痛和减轻炎症的作用机制,为阐明方剂药效科学内涵提供实验依据,对中医临床作出指导。研究方法:1.通过长期反复多次腹腔注射雨蛙素的实验手段诱导产生小鼠慢性胰腺炎模型,采用理中丸、小建中汤和吴茱萸汤进行干预,观察温中三方对小鼠疼痛行为的影响。2.复制CP小鼠模型,取小鼠血液用于血清淀粉酶的检测,取小鼠胰腺组织以ELISA法检测髓过氧化物酶活性、HE染色法用于胰腺组织病理分级,观察组织病理学变化。3.在小鼠CP模型上,应用免疫组化和免疫蛋白印迹法(Western Blot)检测TRPA1、PAR2、cPLA2和EP4受体在小鼠胰腺组织的定位和表达。研究结果:1.小鼠慢性胰腺炎行为学实验雨蛙素腹腔注射造模后,在机械痛实验中,模型组对纤维丝敏感性增强,差异具有统计学意义(P<0.01),在给药治疗后,理中丸组、小建中汤组和吴茱萸汤组与模型组比较,敏感性下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。2.小鼠CP生理、病理实验模型组小鼠胰腺损伤程度明显,与正常组比较,病理评分高,两者之间存在统计学意义(P<0.01),理中丸、小建中汤、吴茱萸汤与模型组进行比较,三方治疗后,三组病理损伤程度改善,评分低于模型组,两者之间存在统计学意义(P<0.01)。雨蛙素造模后,与正常组进行比较,小鼠MPO明显增高,两组之间进行比较差异具有统计学意义(P<0.01),给药治疗后,阳性对照组、中药治疗组小鼠MPO值较模型组降低,各组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。模型组小鼠血AMY值较正常组升高,差异具有统计学意义(P<0.01),理中丸组、小建中汤组和吴茱萸汤组与模型组比较,AMY值显著下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。***小鼠胰腺免疫组化及免疫蛋白印迹实验三方对小鼠胰腺组织TRPA1的表达影响。胰腺组织中的TRPA1表达在造模后与正常组比较显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),经中药给药后,TRPA1表达与模型组比较表达量下降,差异有统计学意义(P<0.01)。三方对小鼠胰腺组织PAR2的表达影响。雨蛙素造模后,PAR2在小鼠胰腺组织中表达高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01),给理中丸、小建中汤和吴茱萸汤后,组织中的PAR2表达量显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。三方对小鼠胰腺组织cPLA2的表达影响。造模后,与正常组比较cPLA2表达增加,差异有统计学意义(P<0.01),三方给药后,胰腺组织中cPLA2表达较模型组下降,差异有统计学意义(P<0.01)。三方对小鼠胰腺组织EP4的表达影响。小鼠胰腺组织中EP4含量在雨蛙素造模后显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),经给药治疗后,治疗组EP4含量显著下调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:理中丸、小建中汤和吴茱萸汤三方均能降低胰腺组织中PAR2、cPLA2、EP4和TRPA1受体的表达量,抑制TRPA1通道的活性,减少其下游炎症物质释放,从而改善了胰腺炎症,缓解了腹部疼痛。

关键词： 祭祀文化   殷商   祭祀形式   自然崇拜   祖先崇拜  

摘要： "国之大事,在祀与戎",祭祀文化在中国的上古时期扮演着极为重要的角色,祭祀文化渗透于先民们生活的方方面面,影响着社会、国家的发展。祭祀文化与中华民族的文化,精神、艺术等等方面息息相关。可以说祭祀文化发展史就是一部中国文明发展史。文章从祭祀文化的两大主脉、殷商时期六大祭祀形式出发,探究殷商时期的祭祀文化,有助于我们了解殷商时期中国整个的社会情况以及思想观念,甚至礼制文化,上古艺术,政治经济等等方面。

关键词： 山茱萸   商品规格   化学计量学   产地鉴别   质量评价  

摘要： 山茱萸(Corni fructus)是山茱萸科植物山茱萸(Cornus *** Zucc.)的干燥成熟果肉,具有补肝益肾、涩精固脱等功效,也是中医临床常用于治疗消渴症(糖尿病)的传统良药之一,主产于我国河南、陕西、浙江等地。由于山茱萸种植范围广泛、种植基地环境差异大、采收加工工艺不统一,导致市场上山茱萸的质量参差不齐、良莠兼杂。因此,本研究在前期本草考证的基础上,筛选山茱萸外观性状评价指标,结合市场交易情况,制定陕西山茱萸商品规格等级标准;引入色度学原理,采用Matlab 2014a软件读取药材颜色数据,结合液相色谱法测定山茱萸中5大类物质和7种有效成分含量,探究山茱萸外观颜色与其次生代谢产物间的相关性;采集山茱萸药材的NIR和MIR光谱数据,结合MLR、KNN、BP-ANN和SVM等化学计量学方法进行山茱萸药材的产地鉴别和含量测定研究。旨在深入开展山茱萸饮片规格标准的研究,为山茱萸的质量控制和评价建立便捷、准确、稳定的产地鉴别和品质评价方法,以期对生产实践提供基础理论依据和技术指导。本论文主要研究结果如下:(1)在本草考证和市场调研基础上,结合市场交易情况,建议将山茱萸药材的碎片含量与千粒重作为山茱萸的补充外观性状,通过数据分析,制定道地产区陕西山茱萸药材的规格标准与等级,分为选货与通货,选货分为一等、二等、三等三个等级,以外观鲜红色,无杂质,千粒重≥150g为佳。(2)采集29批次山茱萸药材的图像,通过软件Matlab 2014a提取不同产地山茱萸药材图像的色度值,测定山茱萸药材中的5大类物质和7种有效成分的含量;结合MLR、BP-ANN和SVM等三种不同的化学计量学方法对山茱萸药材外观颜色色度值与其次生代谢产物间的相关性进行分析,并建立含量测定模型。结果表明:山茱萸中总有机酸含量与药材颜色显著性相关,利用BP-ANN建立的模型可以通过山茱萸药材颜色色度值测定总有机酸含量。(3)采集山茱萸药材的NIR光谱和MIR光谱,结合SVM、LR、BP-ANN和KNN建立山茱萸药材的产地分析模型。分析结果表明:NIR和MIR结合SVM建立的产地鉴别模型对不同产地的山茱萸药材识别率高,可用于山茱萸药材的产地鉴别。(4)采集山茱萸药材的NIR和中红光谱数据,利用HPLC法测定山茱萸药材中7种有效成分的含量,结合MLR、BP-ANN和SVM建立基于红外光谱的山茱萸药材含量预测模型。分析结果表明:NIR和MIR结合SVM建立的含量测定模型对山茱萸药材中7种有效成分含量测定结果的准确率高,均可用于山茱萸药材有效成分的含量测定。基于NIR光谱结合SVM所建立的模型对山茱萸药材中有效成分含量的预测更准确。