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关键词： 结肠炎   炎症相关性结肠癌   化学预防   吴茱萸碱   STAT-3信号通路   酪氨酸磷酸酶  

摘要： 目的:胃肠道疾病的发生概率日益增加,结直肠癌已成为世界第三常见恶性肿瘤。肠道炎症为诱发结肠癌发病最重要也是最关键因素之一,研究表明,炎症相关性结肠癌的发病率比散发性结肠癌高5～10倍,近50%左右的结肠炎患者随着发病时间的推移最终会发展为结肠癌。因此,探究出安全可靠的结肠癌预防手段,并结合不同的治疗模式,在结肠癌发病高危人群(如溃疡性结肠炎患者、结直肠腺瘤患者)中注重预防性策略的应用,将是治疗结肠癌的重要策略之一。以往研究发现吴茱萸碱对炎症及肿瘤的发生有着很好的抑制作用,因此我们研究吴茱萸碱对炎症相关性结直肠癌最为关键的致病因素结肠炎不同病程阶段的预防及治疗作用,分析其对肠道炎症微环境中炎症细胞及肠上皮细胞活性及功能的影响,明确其调控的作用机制,这对于充分开发及利用吴茱萸碱治疗相关性疾病有着重要理论意义。方法:首先体内实验证明吴茱萸碱对于炎症相关性结直肠癌癌前炎症阶段的预防及治疗作用,通过不同的浓度的DSS,调整DSS作用时间及剂量,分别诱导小鼠急性、慢性结肠炎模型,HE染色、酶联免疫吸附法、免疫组化法及Western blot等方法衡量吴茱萸碱对小鼠肠道炎症、氧化应激、炎癌转化的预防作用;接着考察吴茱萸碱对肠道炎症微环境两大类细胞——肠上皮细胞和炎症细胞活性的选择性作用,LPS刺激炎症细胞模拟肠道炎症微环境,通过酶联免疫吸附法、Western blot、流式细胞术等考察吴茱萸碱对LPS诱导的炎症细胞分泌促炎因子及STAT-3磷酸化水平影响;然后通过CCK-8、AnnexinV/PI染色法、PI单标法检、流式细胞术等检测手段,探究吴茱萸碱对于多种结肠癌细胞及正常结肠上皮细胞的增殖抑制、凋亡、周期以及ROS水平的影响;最后明确吴茱萸碱对IL-6/JAK/STAT-3信号通路的调控机制,通过Western blot、计算机模拟药物分子对接等方法从吴茱萸碱是否直接作用于IL-6、是否调控上游相关非受体酪氨酸激酶家族JAKs、是否可以直接靶向作用于STAT-3的SH2结构域、N-末端结构以及是否通过调控蛋白酪氨酸磷酸酶水平来抑制STAT-3信号通路。结果:体内实验结果表明,吴茱萸碱对结肠炎向肠癌转化的炎症阶段有着显著的化学预防及治疗效果,可以明显减轻肠道炎症,降低氧化应激水平,保护肠道屏障损伤,同时降低结肠组织中STAT-3磷酸化水平,在急性结肠炎阶段就可以预防癌变的发生和进展。体外实验结果表明吴茱萸碱可以降低LPS所造成的Raw264.7细胞炎性因子表达及氧化应激水平,显著降低STAT-3磷酸化水平。吴茱萸碱对人正常结肠上皮细胞NCM-460几乎没有抑制作用,而对多种结肠癌细胞具有显著抑制用,将结直肠癌细胞阻滞于G2期,升高ROS水平,并促进多种结直肠癌细胞凋亡,抑制STAT-3活化与入核,其作用机制与抑制STAT-3通路密切相关,吴茱萸碱并不直接作用于IL-6,对上游JAK家族蛋白的表达无影响,计算机模拟分子对接结果表明吴茱萸碱直接靶向STAT-3结合位点的可能性并不高,主要通过上调蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1表达,抑制STAT-3磷酸化。结论:吴茱萸碱对炎症相关性结直肠癌最为关键的癌前病变因素结肠炎小鼠模型不同病程阶段均有良好的预防及治疗保护作用,其机制与降低小鼠机体炎症、氧化应激水平,抑制癌细胞增殖及炎癌转化,抑制STAT-3信号通路过度激活有关;同时吴茱萸碱可以降低肠道炎症微环境中炎症细胞炎症因子的分泌,降低ROS水平,抑制STAT-3磷酸化;吴茱萸碱对肠上皮细胞活性具有选择性,抑制结肠癌细胞增殖,通过升高结肠癌细胞ROS水平,将细胞周期阻滞于G2期,调节凋亡相关蛋白表达促进多种结肠癌细胞系凋亡,而对于正常结肠上皮细胞活性没有影响,其机制与抑制STAT-3活化与入核,抑制STAT-3通路密切相关,吴茱萸碱抑制STAT-3磷酸化机制进行分析,发现吴茱萸碱通过主要通过上调蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1表达,抑制STAT-3磷酸化。

关键词： 族群互动   身份认同   鄂博祭祀   马蹄藏族乡   共同体意识  

摘要： 祁连山北麓在青藏高原与河西走廊之间的过渡地带上,农牧结合、多族群互动由来已久,因此本区人民不论是在生产生活还是在文化上都有多元混融的特点。位于此间的马蹄藏族乡是一个汉族、藏族为主体兼有少量裕固族、回族、土族和蒙古族的多民族杂居区域,不同民族共同生活于一处,互动自然在所难免。当然,在这一过程中各民族和睦相处、共同团结发展的一个重要表现就是该地人们所形成的跨越单一的本民族认同的的地域认同。当地人地域认同和各民族间相互认可的一个凝视点便是当地人的“鄂博祭祀”。本文通过田野调查,对祁连山北麓马蹄藏族乡的“鄂博祭祀”这一文化活动进行了民族学研究。在前期文献资料搜集与梳理的基础上,通过走访初步了解了当地人口、民族与鄂博祭祀的情况后,亲自参与了当地的鄂博祭祀活动,还在当地人的帮助下进一步深入了解其他方面并进行了多次深入访谈和细致的地观察,从而对当地多民族互动与地域身份认同做了分析。第一章介绍了祁连山北麓马蹄藏族乡的人文空间和自然地理。第二章梳理了马蹄藏族乡多民族群体的来源,在对他们共居与交往交流交融的现实情境的介绍后,发现当地人的认同不仅仅是单一的民族身份,而更普遍的是多民族互相认可之“我们”的表述,所反映出的是他们的地域认同感。当地人地域认同的一个集中表现是当地的“鄂博祭祀”,所以在第三章具体探讨了该地鄂博,具体包括不同起源观点、统计了当前鄂博祭祀的实际情况、细致地描述了当地三种不同祭祀形式的仪式活动,并分析了该活动之特点与功能。第四章是对当地人为什么会形成地域认同并共同参与到“鄂博祭祀”这一活动中的原因的分析——包括国家政策发力的深层影响、地方精英的努力以及当地人的社会记忆多重作用。第五章也就是本论文的余论,分析了马蹄藏族乡把传统的鄂博祭祀仪式纳入地方文化节日之后形成的多民族共庆的文化节日对于地域文化、生态、多民族交融及实践中华民族共同体意识的意义。总结多民族地域认同的路径,结合地域认同与国家认同的内在联系来说明多族交融后的地域认同是研究多民族国家认同的一个缩影,有其研究价值。

关键词： ALI   吴茱萸碱   Apelin   抗炎   螺环氧化吲哚  

摘要： 目的:急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)是一类十分严重的全身性炎症综合征,目前缺乏有效治疗药物。吴茱萸碱是一类具有显著抗炎活性的吲哚类生物碱,对ALI具有改善作用,但是其作用机制的研究还比较有限。本研究利用转录组筛选和生物信息学分析方法,发现Apelin可能是吴茱萸碱抗炎的一个关键作用分子。因此我们以此为切入点,通过体内外药理学实验对吴茱萸碱改善ALI的机制进行研究,为开发ALI治疗药物提供新思路。此外,借助药物设计的思路对吲哚类药效成分骨架进行多样性合成,对新药研发具有重要的研究价值。本研究根据药物化学中的拼合原理,将螺环氧化吲哚与芝麻酚通过[4+2]串联环化进行结合,构建一类螺环氧化吲哚类生物碱类似物,为先导化合物提供化合物源。方法:1.体外以RAW264.7细胞为研究对象,首先采用MTT法检测吴茱萸碱对RAW264.7细胞的细胞毒性,然后以LPS+Nigericin建立炎症模型,采用Annexin V-FITC/PI双染流式和LDH法检测吴茱萸碱对LPS+Nigericin诱导的细胞凋亡的影响;采用转录组测序(RNA-seq)筛选出不同干预条件下RAW264.7细胞的差异表达基因(DEGs),然后采用聚类分析、GO、KEGG和GSEA富集分析等生物信息学分析法,研究吴茱萸碱在LPS+Nigericin刺激下发挥抗炎作用可能调控的分子和信号通路;采用Real-time PCR和Western-blotting验证吴茱萸碱对RNA-seq发现的关键因子以及相关细胞因子的影响并通过ELISA检测法研究外源性Apelin-13对相关细胞因子的影响。体内以LPS构建ALI小鼠模型,采用ELISA法观察吴茱萸碱对小鼠肺灌洗液中细胞因子的影响;采用H&E和Masson’s染色观察吴茱萸碱对LPS诱导的肺组织损伤的作用,并通过免疫组化评估吴茱萸碱对肺组织中相关因子表达水平的影响。2.选用具有生物活性的靛红与芝麻酚为起始原料,通过Aldol反应形成中间体。中间体与2-乙炔基苯酚通过双金属催化进行[4+2]串联环化,构建一类螺环氧化吲哚类生物碱类似物,用NMR、HRMS等方法确定结构。结果:1.(1)通过MTT法、LDH法和双染流式细胞术检测发现,吴茱萸碱对RAW264.7细胞表现出低毒性,并且吴茱萸碱明显抑制LPS+Nigericin导致的细胞凋亡。(2)通过RNA-seq和生物信息学分析发现,吴茱萸碱能改变LPS+Nigericin刺激前后细胞中DEGs表达模式,对Apelin信号传导途径有调控作用;RNA-seq显示,炎症刺激后吴茱萸碱处理能明显上调Apelin的表达,逆转多种细胞因子的表达。(3)Real-time PCR和Western-blotting证实吴茱萸碱能明显上调Apelin的表达,抑制炎症刺激下IL-6和CCL17的表达;外源性Apelin-13能抑制IL-6和CCL17的释放,逆转EGF浓度的下降。(4)在LPS诱导的ALI小鼠模型中,吴茱萸碱处理能促进肺部Apelin的分泌,部分逆转IL-6和CCL17的增加;改善LPS诱导的肺组织损伤和纤维化程度;上调肺组织中Apelin的表达,部分逆转IL-6、CCL17和Col IV表达水平的上升。2.通过[4+2]串联环化构建出一种吡喃螺环氧化吲哚骨架,收率达到95.26%,并进行了底物普适性考察。发现该反应普适性差,目前只得到4个收率低的扩展化合物。结论:1.在体外,吴茱萸碱可通过浓度依赖性的抑制细胞凋亡、抑制炎性细胞因子释放和激活Apelin途径,保护RAW264.7细胞免受LPS+Nigericin诱导的炎症损害。此外,还发现Apelin-13能抑制IL-6、CCL17的释放,上调EGF对肺损伤发挥保护作用,这说明吴茱萸碱可通过调控Apelin发挥抗炎作用。在体内,吴茱萸碱可通过上调Apelin抑制细胞因子和促纤维化因子的表达,改善肺组织的炎症损伤和纤维化,这与体外研究结果一致。它能够通过激活Apelin途径来改善LPS诱导的肺部炎症和纤维化,对ALI发挥保护作用。2.该反应能成功合成目标产物,但是反应普适性差,不利于进行化合物扩展。反应路线的设计还是面临着许多挑战,电子效应和位阻效应对合成效果的影响是后续实验设计改进的重点。

关键词： 魂魄   鬼神   祭祀   早期儒家  

摘要： 早期儒家基于功能视角对祭祀之道德和社会功能的强调，回答了祭祀“为何必要”的问题，同时，也继承周人祭祀的理性精神，并以魂魄观念和魂气说理解鬼神，回答了祭祀“何以可能”的问题。不同于墨子“明鬼”和民间鬼神信仰强调鬼神的实体与威灵，早期儒家对殷周祖灵观念做了进一步理性化、人文化、非实体化和去威灵化的转化，墨子对其“以鬼为不神”的批评，恰好揭示了儒家祖灵观念的特征。秉持“死而不绝”的生命观和魂魄观，早期儒家认为，祭祖礼仪中鬼神的实质是祖先之魂魄，死后被尊为鬼神，只要必诚必敬地斋戒以祭，基于“气”之感应原理，子子孙孙便可与列祖列宗感通于祭场这一神圣空间中。在祭祀态度与目的上，孔子及其儒家由强调祈福转向强调报本，由强调所信转向强调能信，强调“外则尽物，内则尽志”的祭祀主体本身的努力。在早期儒家的思想世界中，虽然“事人”优先于“事鬼”，但“鬼神得其飨”始终是儒家社会治理蓝图和信仰世界的主题之一。无鬼神的儒家是不完整的，他们所追求的是“敬鬼神”与“远鬼神”的平衡。

关键词： 山茱萸   环烯醚萜苷   网络药理学   肝损伤   异烟肼   利福平   炎症反应   脂质代谢  

摘要： 目的中药山茱萸临床应用广泛,具有抗炎、抗氧化、抗衰老、降血糖、保护神经元、保护肝脏等生物学作用,但是目前关于山茱萸对抗结核药物所致肝损伤方面的研究却鲜见报道。本研究基于网络药理学方法,探索山茱萸的有效成分和抗结核药物性肝损伤靶点之间的网络关系,筛选出山茱萸治疗抗结核药物性肝损伤的关键靶点及作用途径,并通过实验探索山茱萸对抗结核药物所致肝损伤的作用及其机制。方法1.山茱萸对抗结核药物性肝损伤的网络药理学研究(1)通过TCMSP数据库查找并筛选出山茱萸的活性成分,并通过文献报道补充。在PubChem数据库中收集山茱萸活性成分的分子结构式、Canonical SMILES编号,并下载SDF结构文件,通过Swiss Target Prediction数据库、PharmMapper数据库分别预测活性成分的靶点,TCMSP平台及文献收集补充的蛋白质靶点进行补充,整合去重。(2)以“anti-tuberculosis drug-induced liver injury”、“ATB-DILI”等为关键词,在 GeneCards 数据库、OMIM数据库、TTD数据库中搜索并收集抗结核药物性肝损伤的疾病靶点,以OMIM数据库中的OMIM-GeneMap搜索功能检索补充,整合去重。(3)将活性成分靶点与疾病靶点取交集,得到山茱萸对抗结核药物性肝损伤的作用靶点。将交集靶点输入STRING11.0数据库获取蛋白质相互作用数据,并利用Cytoscape3.7.2软件绘制蛋白质相互作用PPI网络图,通过计算获得网络中Top20中心靶点以及潜在的蛋白质功能模块。(4)通过Metascape平台对山茱萸作用于抗结核药物性肝损伤的靶点进行GO富集分析和KEGG通路分析。(5)通过Cytoscape3.7.2软件构建“成分-靶点-通路”网络图,并通过计算获取山茱萸治疗抗结核药物性肝损伤的主要活性成分。2.山茱萸对抗结核药物性肝损伤的实验研究提取山茱萸环烯醚萜苷(CIG),并测定浓度。通过异烟肼(INH)和利福平(RFP)联用灌胃给药14天以复制小鼠肝损伤模型。60只雄性C57BL/6小鼠随机分为6组,即正常对照组(NC)、模型组(IL)、阳性对照组(PC)、中药低剂量组(CIG50)、中药中剂量组(CIG100)、中药 C 高剂量组(CIG200)。用 INH(150mg/kg)+RFP(150mg/kg)灌胃造模14d,正常对照组给予0.9%生理盐水,阳性对照组给予水飞蓟素(100mg/kg),中药组分别给予50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg山茱萸环烯醚萜苷(CIG),灌胃量10ml/kg,末次给药后禁食不禁水16h,然后取材。收集小鼠血液和肝脏组织,计算小鼠肝脏系数,HE染色观察肝组织病理学变化,检测血清生化指标,包括谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA);血清及肝脏脂质代谢指标,包括总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;肝组织氧化因子水平,包括超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA);肝组织炎症因子水平,包括肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)浓度;实时定量PCR法检测抗结核药物性肝损伤相关基因PPAR-α、FABP1和STAT3 mRNA表达水平。结果1.筛选得到山茱萸活性成分24个,经预测得到活性成分靶点482个;抗结核药物性肝损伤疾病靶点共248个,取交集后得到山茱萸作用于抗结核药物性肝损伤的靶点共41个。经筛选得到的山茱萸主要活性成分有熊果酸、鞣质类、油脂类、甾醇类(β-谷甾醇、谷甾醇、豆甾醇)、环烯醚萜苷类(马钱子苷、莫诺苷);与发挥药效的主要活性成分相关的核心靶点主要有 IL-6、EGFR、TNF、NR1H3、TGFB1、BAX、VEGFA、CYP3A4、CYP2C19、IL-1β、KDR、MMP9、MTOR、SRC、STAT3、TP53、F2、FABP1 等。KEGG 通路富集分析得到与抗结核药物性肝损伤相关的通路61条,主要涉及药物代谢、视黄醇代谢、非酒精性脂肪肝、胰岛素抵抗等;信号通路如MAPK、PI3K-Akt、HIF-1、肿瘤坏死因子、p53、JAK-STAT、脂肪细胞因子、PPAR等。GO富集分析共得到具有代表性富集术语的聚类40个,生物过程(Biological Process,BP)主要涉及脂质代谢过程的正调控、类固醇代谢过程、JAK-STAT级联的调控、凋亡信号通路的调控、细胞迁移的正调控、细胞应激反应调节等;分子功能(Molecular Function,MF)主要涉及辅因子及转录因子结合、蛋白酶结合、脂质

关键词： 墨子   节葬   明鬼   祭祀  

摘要： 王充等人对墨子"节葬"与"明鬼"说的批判,脱离了墨子思想体系。墨子认为,"节葬"并没有造成对鬼神的轻漠和不敬,"节葬"是为了更好地创造和保存社会财富,以便生者恭祭鬼神。墨子在提出"节葬"说的同时,突出了祭祀对鬼神的重要性。鬼神的赏善罚暴与"节葬"在本质上是一致的,即"不失死生之利"。墨子"节葬"与"明鬼"说以其外在的悖论,隐潜着内在的统一。

关键词： 巫楚文化   寻根意识   怪诞现实主义   祭祀  

摘要： 寻根文学立足于民间土壤,致力于对民族文化和历史的挖掘,与民间诙谐文化不谋而合,在大量的寻根文学作品中都可以发现民间诙谐文化的文本形态。根据巴赫金的民间诙谐文化理论,本文将从诙谐化的语言、人物和民俗活动,分析韩少功《爸爸爸》的寻根意识。

关键词： 泰逢   太一   泰卦   祭祀   《山海经》  

摘要： “太一”是先秦两汉时期一个重要的复合概念，其本身包括了神话学、哲学、文学等多层次的意义。关于“太一”的原型及其发展演变过程，历代学者都有不同的看法。而将《山海经·中次三经》中的“吉神泰逢”与“太一”相关联，尚不见学者论及。但通过对传世文献梳理，并结合出土文献材料，可以发现“泰逢”从神状、神迹、神名、祭祀用品规格等方面，都与复合概念下的“太一”有着密切的联系。而“太一”概念本身在发展的过程中经历了一个从原始神灵崇拜转向哲学、神灵等复合概念崇拜的复杂过程，在这一过程中，原始神灵形象的“泰逢”是连接神灵“太一”和后来哲学、神灵复合概念下的至高神“太一”的关键节点。

关键词： 《诗经·周颂》   祭祀礼仪   文化意义  

摘要： 《诗经》又称《诗》或《诗三百》,它是我国第一部诗歌总集,是我国诗歌发展史的光辉开端。《诗经》共分为风、雅、颂三部分,其中《颂》诗是周天子及各国诸侯用于宗庙祭典的舞曲、祭歌与颂歌,《周颂》主要是西周王朝歌颂其最高统治者文德武烈的诗,反映了西周祭祀活动的对象、种类、目的,以及祭祀活动的场所和祭祀活动中用的祭品,集中体现了西周时期的宗庙祭祀状况和祭祀文化。在祭祀文化中我们可以窥见中华民族先祖原始、淳朴的情感,及其宗教信仰。在祭祀中体现出来的"礼"的制度成为孔子等儒家思想的重要来源,并影响了中华民族几千年的文化走向。本文旨在通过《诗经·周颂》的具体内容分析,探究周人的祭祀礼仪及其对中华民族文化的重要影响。