关键词:
甘草汁
制备工艺
质量标准
吴茱萸
肝毒性
摘要:
目的:本实验以液体炮制辅料甘草汁为研究对象,采用正交实验(L3)考察不同因素对甘草汁制备工艺的影响,以多指标综合评分法优选出最佳工艺,在此基础上去制定炮制用辅料甘草汁的质量控制标准,采用最佳工艺制备的甘草汁进行吴茱萸肝毒性的研究。初步探索炮制用辅料甘草汁在制备、质量标准方面的规范化,以此为甘草汁和甘草汁所炮制的饮片进行质量控制奠定基础。方法:1.建立甘草酸铵和甘草苷的UPLC方法,以乙腈为流动相A和0.05%磷酸为流动相B进行梯度洗脱,对甘草汁中甘草苷和甘草酸铵含量进行测定。采用正交试验设计考察加水量、煎煮时间、煎煮次数对甘草苷和甘草酸铵含量的影响,并结合出膏率综合评价优选出甘草汁的最佳制备工艺。2.选取符合现行药典甘草药材质量要求的5个产地甘草饮片,按最佳工艺制备辅料甘草汁。采用薄层色谱鉴别方法对甘草汁中甘草苷进行鉴别研究;对甘草汁中灰分、pH值、可溶性固形物进行检测;以超高效液相色谱分析方法测定甘草汁中甘草酸铵和甘草苷的含量,并进行方法学考察。3.将小鼠分为正常组、对乙酰氨基酚组、生吴茱萸高中低剂量组(6.1g·kg、3.05g·kg、0.61 g·kg)、甘草汁制吴茱萸高中低剂量组(7.5 g·kg、3.75 g·kg、0.75g·kg),连续进行灌胃给药十五天后取材,计算肝脏指数、检测小鼠血清中ALT、AST的活性以及小鼠肝组织中SOD的活性、MDA的含量。结果:1.将甘草酸铵和甘草苷含量各附以权重0.4、出膏率0.2,综合评分优选出最佳制备工艺为:甘草饮片加入10倍水,煎煮1.5h,反复煎煮3次,最后合并滤液。方差分析结果显示,对实验结果影响最大的是煎煮次数,其他两项因素的影响较小。2.初步制定了的甘草汁的质量标准:甘草苷浓度≥1.93%,甘草酸铵浓度≥0.20%,pH值为5.57±0.27,总灰分为≤5.50%,酸不溶灰分≤0.54%,可溶性固形物为≥27.50%的棕黄色溶液。且不同地区甘草的质量优劣不同,其中甘肃产甘草质量最为优良。3.生、制吴茱萸的肝体指数与空白组相比均偏高(P<0.01或P<0.05),但制品与生品相比指数偏低(P<0.01);生、制吴茱萸的AST、ALT的含量与空白组相比均偏高(P<0.05),但制品与生品相比的二者水平偏低(P<0.01或P<0.05);生、制吴茱萸的MDA含量与空白组相比偏低,但制品与生品相比MDA水平整体偏高(P<0.01);生、制吴茱萸的SOD的含量与空白组相比均偏高(P<0.05),但制品与生品相比的SOD水平整体偏低(P<0.01或P<0.05)。结论:甘草汁为传统中药液体炮制辅料之一,现存甘草汁的制备方法没有统一的标准。本实验首先优化了中药炮制辅料甘草汁制备工艺,方法简单可行可靠。对甘草汁质量做了较为系统的研究,并制定出质量标准,可用于辅料甘草汁的质量评价。使用辅料甘草汁炮制吴茱萸,并进行生品和制品吴茱萸的肝毒性对比,其中甘草汁制吴茱萸毒性较弱,制吴茱萸低剂量组毒性最弱,说明了经甘草汁炮制后的吴茱萸大大的降低了肝毒性,符合古人“甘草汤渍曝解毒致令平和”的辅料作用理论。因此证明甘草汁制可以提高临床用药的安全性,为炮制辅料甘草汁的深入研究提供参考。