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关键词： 灵祭   茔祭   祠祭   祭祀制度  

摘要： 创教以来全真教不同宗系即形成了祭祀列祖列宗的传统。祖宗祭祀制度是不同宗系酝生共同的宗祖认同的土壤，本身又是全真宗祖崇拜的重要内容。灵祭、茔祭、祠祭构成了全真教祖宗祭祀制度的核心内容。这套源于传统世俗社会家族祭祀制度而又有自身特征的宗教礼制，成为全真教构建宗门认同、凝聚教团力量的重要方式。

关键词： 左金丸   去氢吴茱萸碱   吲哚美辛   胃损伤   网络药理学   炎症   代谢组学  

摘要： 目的与意义:左金丸(Zuojin Pill,ZJP)源于元代朱震亨《丹溪心法》的经典名方,在治疗消化性溃疡等疾病中具有多靶点、多功效、治愈率高、复发率低、无毒副作用等优势,具备整体性、系统性调控非甾体抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)诱致胃损伤的巨大潜能;此外,左金丸有效成分去氢吴茱萸碱(dehydroevodiamine,DHE)在胃肠道疾病的应用中具有潜力。故本研究旨在探讨左金丸及去氢吴茱萸碱对吲哚美辛诱导胃损伤大鼠的治疗作用及其机制,从而为ZJP和DHE治疗NSAIDs-溃疡的临床应用提供了实验基础,为深入认识中医药临床应用的现代科学内涵提供理论依据。研究方法:(1)药效研究:采用5mg/kg吲哚美辛(indomethacin,IDO)复制大鼠胃损伤模型,监测大鼠摄食量、体重、胃p H值和一般状态,采用HE及AB-PAS染色、MPO免疫组化、Elisa法测定TNF-α,IL-6,IL-10含量,考察ZJP 1.26、2.56、5.04g/kg及DHE 10、20、40mg/kg对IDO诱导胃损伤大鼠的影响;(2)网药预测及机制验证:借助网络药理学技术,运用TCMSP、Gene Cards及STRING数据库构建“药物-疾病”相关靶点网络,通过GO及KEGG途径富集分析,筛选预测ZJP治疗IDO诱导胃损伤的分子生物学调控机制;采用Western blotting法测定预测机制通路的关键蛋白表达水平,旨在验证与初步阐明ZJP及DHE治疗IDO诱导胃损伤的分子生物学机制;(3)代谢特征研究:采用代谢组学技术,运用SIMCA-P将Metabo Analyst 5.0归一化处理的代谢数据进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA),筛选特异性代谢标志物;使用人类代谢组数据库(HMDB)初步鉴定了所有生物标记物(分子量误差<20 ppm),将鉴定得到的化合物重新导入Metabo Analyst 5.0以分析其可能参与的体内代谢途径,阐明ZJP及DHE治疗IDO诱导胃损伤的代谢组学特征。研究结果:(1)药效研究结果显示,ZJP及DHE给药后能显著改善IDO诱致的摄食量及体重减少,减轻IDO诱导的胃组织出血、水肿、上皮细胞损失,微血管充血等组织病变情况,恢复正常胃p H值及粘膜厚度(p<0.05,p<0.01)。ZJP及DHE治疗后MPO阳性表达以剂量依赖性的方式降低,同时下调TNF-α和IL-6表达,上调IL-10表达(p<0.05,p<0.01)。ZJP 5.04g/kg和DHE 10mg/kg组在三个剂量组中极显著地下调TNF-α和IL-6,上调IL-10。(2)网药预测及机制验证:1)网络药理学预测结果显示,32个靶点被认为是ZJP治疗IDO诱致胃损伤的关键靶点。GO分析结果显示,ZJP治疗IDO诱致胃损伤直接或间接与其抗炎、抗氧化和抗凋亡作用相关。KEGG分析结果显示,ZJP治疗吲哚美辛诱致胃损伤可能与调节MAPK信号通路、VEGF信号通路等信号通路有关,提示左金丸可能通过作用于上述信号通路,发挥抗炎、抗氧化和抗凋亡的作用。2)分子生物学结果表明,ZJP下调了MAPK通路中p-ERK、p-p38、p-JNK磷酸化蛋白表达水平(p<0.05,p<0.01),减少下游炎症因子的表达,减少胃组织中的炎症反应,提示左金丸可通过抑制MAPK信号通路表达,减轻炎症损伤,为胃损伤创造预后环境;DHE 10mg/kg极显著抑制p-ERK、pp38的蛋白质表达水平,但DHE给药后与模型组中JNK的磷酸化程度无显著性差异,表明DHE通过调节MAPK通路中的ERK、P38而非JNK,在IDO诱导的GI治疗中发挥作用。结果提示,需要进一步探讨剖析DHE对IDO诱导胃损伤的分子作用机制。(3)代谢特征研究结果显示,左金丸血清、尿液、粪便样本中分别鉴定出3、6、5种特异性代谢标志物,涉及类固醇激素生物合成、赖氨酸降解、嘧啶代谢、嘌呤代谢等4种代谢途径,Uridine 2',3'-cyclic phosphate,allantoic acid,tetrahydrocorticosterone,7a-hydroxydehydroepiandrosterone,3-hydroxy-N6,N6,N6-trimethyl-L-Lysine可为ZJP治疗胃损伤的代谢标志物;去氢吴茱萸碱中血清、尿液、粪便样本中分别鉴定出7、14、21种特异性代谢标志物,涉及调节体内甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,花生四烯酸代谢,嘌呤代谢发挥治疗IDO诱导胃损伤的作用,Guanidinoacetate,L-cystathionine,O-phospho-L-serine,creatine,5,6-EET,

关键词： 吴茱萸次碱   阿霉素   氧化应激   凋亡  

摘要： 背景:阿霉素(Doxorubicin,DOX)属于抗肿瘤抗生素,为细胞周期靶向非特异性药物,广泛用于治疗多种实体瘤。然而,DOX的心脏毒性成为限制其临床应用的不可逾越的障碍。DOX心脏毒性的分子机制已被广泛研究,目前普遍认为氧化应激、自噬、线粒体功能障碍和凋亡途径是DOX心脏毒性的潜在机制。先前的研究已经证明,抑制氧化应激可显著减轻DOX引起的心脏毒性。吴茱萸次碱对心血管有保护作用,且具有抗氧化作用,但其在改善抗肿瘤药物引起的副作用方面了解甚少。因此,吴茱萸次碱有望成为一种抑制DOX引起的心脏副作用的药物,从而提高患者的生活质量。吴茱萸次碱(Rutaecarpin,RUT)已被证明具有心血管生物学作用,如变力和变时、血管松弛、抗血小板聚集和抗炎作用,而其在DOX所导致的心脏毒性中的作用尚未研究。目的:本研究的目的是研究RUT在DOX所导致的心脏毒性中的作用,并探讨其可能的机制。方法:(1)购买来自Vital River Laboratory Animal Technology(中国北京)的8-10周龄,体重23～25g的雄性C57BL/6J小鼠,饲养在单独通风的笼子中。所有小鼠生长在标准的湿度/温度控制的环境中(相对湿度70%,22°C),光照-黑暗周期为12:12小时。实验分为6组:(1)对照组,注射含0.5%二甲基亚砜(DMSO)的等量生理盐水;(2)RUT组,将RUT溶于含0.5%吐温-80的37°C生理盐水中,然后每天根据体重用RUT灌胃40 mg/kg,连续4周;(3)DOX组,鼠尾静脉注射阿霉素(5 mg/kg,溶于含0.5%DMSO的生理盐水中),每周1次。(4)DOX+RUT(低剂量)组:DOX+RUT 20 mg/kg/d,连续4周;(5)DOX+RUT(高剂量)组,DOX+RUT 40 mg/kg/d,连续4周;(6)DOX+RUT+Akti(AKT inhibitor)组,从第1天起隔日腹腔注射Akti(20 mg/kg),连续4周,小鼠在麻醉下被处死。(2)用30MHz的超声探头(Vevo 770 imaging system,Visual Sonics,Toronto,Canada)每周对小鼠记录并评估各组小鼠左心室收缩功能的变化。(3)取小鼠心室石蜡切片,采用H&E染色观察小鼠心室大体形态变化;采用Masson染色观察小鼠心室组织纤维化情况并计算纤维化面积;采用DHE染色观察心肌细胞氧化应激的表达;采用TUNEL染色观察心肌细胞凋亡的水平并测算比率。(4)采用Western blot检测心室组织中GCLM,HO-1,p-AKT,AKT,Nrf2,Cleaved Caspase-3,Bax,Bcl-2 and GAPDH表达水平。结果:1.与对照组的小鼠相比,随着阿霉素累积计量增加,DOX组小鼠心脏射血分数、短轴缩短率功能减退,并具有统计学差异。2.与对照组相比,DOX组小鼠心脏明显变小,主要反映在心重/胫骨长(HW/TL)降低与HE染色中心脏横切面减小,在加用RUT治疗以后得到改善。3.与对照组相比,鼠尾静脉注射DOX组小鼠摄食量与体重改变不大。4.与对照组相比,DOX组小鼠的超声心动图显示超声心动图显示,DOX治疗的小鼠出现心力衰竭和血管周围纤维化加重,表现为收缩期间LVEF、LVFS、LVPW和LVAW减少,这些不利影响可通过给予RUT治疗显著减轻。4.与对照组相比,鼠尾静脉注射DOX组小鼠氧化应激水平跟心肌细胞凋亡水平随DOX累积剂量逐渐加重,这些不利影响可通过给予RUT治疗显著减轻。平行实验表明,DOX显著降低心脏SOD活性和GSH含量,升高MDA活性,这些作用均被RUT部分抑制。***处理小鼠心脏中p-AKT、NRF-2、HO-1和GCLM的蛋白水平,与对照组相比,发现DOX降低了p-AKT、NRF-2、HO-1和GCLM的蛋白水平,但这些蛋白表达水平的降低在RUT治疗4周后被逆转。此外,还检测了与细胞凋亡相关的蛋白。我们发现DOX增强了促凋亡蛋白Clevered Caspase-3和Bax的表达,但降低了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,这些变化都被RUT部分抑制。7.与DOX+RUT组相比,AKTi组小鼠表现为心脏SOD活性和GSH含量降低,MDA活性升高。RUT增强了p-AKT、Nrf2、HO-1、GCLM和Bcl-2的蛋白水平,但抑制了Clevered Caspase-3和Bax的表达,蛋白表达的变化在给予AKTi后都被逆转。结论:吴茱萸次碱是一种心脏保护剂,具有抗氧化与抗细胞凋亡的作用,可以通过激活AKT信号通路来发挥作用,抑制DOX所致的心脏毒性。

摘要： 日前，“文昌帝君祭祀大典暨考生祈福活动”在台湾彰化县鹿港文武庙举行。当地士绅乡贤、教育文化界及学生代表200多人参加活动，共祭文昌帝君，弘扬文昌文化。作为中华优秀的传统文化，文昌文化在台湾传承和弘扬，成为连接两岸一条重要精神纽带。

关键词： 戏曲活动   绍兴地区   祭祀   祈福  

摘要： 明清时期，戏曲活动与绍兴地区的平民生活关系密切。戏曲活动既能满足普通民众祈福禳灾、祭神祭祖等民俗活动的需求，也使得民众在演戏、观戏的过程中得到身心的愉悦。无论是出于对转变生活面貌的美好期望，还是在生活压力之下的情感释放，戏曲演出都是平民群体最为喜闻乐见的民俗活动之一。

关键词： 吴茱萸   神阙穴   阳虚型   慢性心力衰竭   腹胀   阳虚型  

摘要： 目的：探讨隔吴茱萸粉灸神阙穴在阳虚型慢性心力衰竭伴腹胀患者治疗中的优势，为慢性心力衰竭伴阳虚型腹胀患者提供更多的治疗选择。方法：选取本院2020年3—7月收治的66例阳虚型慢性心力衰竭伴腹胀患者为研究对象，依据治疗方式不同分为对照组和观察组，各33例。对照组予以常规治疗+多潘立酮，观察组予以常规治疗+隔吴茱萸粉灸神阙穴。两组患者的治疗时间均为5 d。比较两组患者的腹胀程度、中医证候积分、临床疗效。结果：治疗后，观察组腹胀改善程度、中医证候积分改善及治疗总有效率均优于对照组，组间比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：隔吴茱萸粉灸神阙穴能明显改善阳虚型慢性心力衰竭伴腹胀患者的临床疗效，且具有价格低廉、安全性强、操作简单等优点，值得推广应用。

关键词： 肿瘤   多药耐药   吴茱萸次碱   ABCB1   MARCH8   泛素化  

摘要： 癌症仍然是21世纪全球死亡的主要原因,是提高各国人口预期寿命的重要障碍。化疗作为治疗转移性癌症的有效疗法,在治疗过程中容易使肿瘤细胞产生多药耐药性(MDR)而导致失败。MDR调控涉及的分子机制十分复杂,其中ABC转运蛋白介导的药物流出是肿瘤细胞中常见的耐药机制之一。ABCB1(又名P-gp,MDR1)是ABC转运蛋白超家族的重要成员,能够利用ATP水解释放的能量将多种抗肿瘤药物泵出细胞来介导MDR。现在普遍认为将ABCB1抑制剂与抗肿瘤药物联合使用,是一种克服ABCB1介导的MDR有前景和希望的策略。但出于安全问题考虑或缺乏临床数据,目前还没有抑制剂被FDA批准用于临床治疗。因此,急需开发和筛选新的逆转剂或治疗方案来解决肿瘤耐药问题。吴茱萸次碱(Rut)是一种从吴茱萸(Evodia rutaecarpa)中提取出来的生物活性碱,具有抗血栓形成、抗癌、抗炎等广泛的药理作用。在该研究中,我们发现Rut能够下调ABCB1的蛋白表达水平,增强ABCB1过表达细胞株MCF-7/ADR及A549/Taxol对抗肿瘤药物的敏感性。进一步的机制研究表明,Rut是通过上调E3泛素连接酶MARCH8来实现对MDR的逆转。本论文主要研究内容及结果如下:方法:(1)采用CCK-8法评估Rut对MCF-7和A549细胞及其对应的ABCB1蛋白过表达的耐药性细胞MCF-7/ADR和A549/Taxol的增殖抑制作用,确定其无毒浓度;(2)采用CCK-8法对Rut逆转肿瘤耐药细胞MCF-7/ADR和A549/Taxol的活性进行评价,并以亲本细胞系MCF-7和A549作为对照;(3)采用Western blot、IF及q RT-PCR法分别检测Rut对ABCB1蛋白表达水平及m RNA水平的影响;(4)采用荧光显微镜、流式细胞仪检测Rut对罗丹明-123、阿霉素的蓄积影响;(5)使用多功能酶标仪检测Rut对阿霉素的外排影响;(6)通过流式细胞仪,利用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒检测Rut与抗肿瘤药物联合使用对敏感细胞株和其对应耐药细胞株凋亡的影响;(7)通过Transwell和伤口愈合实验评估Rut与抗肿瘤药物联合使用对敏感细胞株和其对应的耐药细胞株的侵袭和迁移能力的影响;(8)通过在BALB/c裸鼠中建立MCF-7和A549及其对应的MCF-7/ADR和A549/Taxol皮下移植瘤模型,观察Rut联合抗肿瘤药物对皮下移植瘤的抑制作用;(9)使用RNA-Seq分析进一步探索Rut逆转ABCB1介导的多药耐药机制。结果:(1)Rut(20μM)对所选细胞系均没有明显的抑制作用,因此选择5μM和20μM的浓度来评估其逆转活性并探索其逆转机制;(2)非细胞毒浓度的Rut可显著增加耐药细胞MCF-7/ADR和A549/Taxol对阿霉素、紫杉醇和秋水仙碱的敏感性,并随着Rut的剂量提高逆转效果也提高,然而对非ABCB1底物药物顺铂则没有逆转效果,同时Rut对敏感细胞株MCF-7和A549没有显著影响;(3)Rut以剂量依赖性的方式下调ABCB1蛋白表达水平,但是对其m RNA水平没有显著影响;(4)Rut以剂量依赖性的方式显著增加ABCB1底物罗丹明123以及阿霉素的蓄积量,同时对阿霉素的外排功能起到抑制作用;(5)Rut与抗肿瘤药物联合使用可以显著增强阿霉素和紫杉醇诱导的耐药细胞凋亡;(6)Rut与抗肿瘤药物联合使用可以抑制耐药细胞的侵袭和迁移能力;(7)通过建立动物模型发现Rut与抗肿瘤药物联用可以显著抑制耐药性肿瘤的生长速度,且未观察到裸鼠有明显的体重减轻,表明联合治疗方案被裸鼠耐受,Rut可以安全有效地拮抗ABCB1介导的多药耐药;(8)RNA-Seq分析表明Rut通过上调E3泛素连接酶MARCH8的表达来参与ABCB1蛋白水平的下调作用;(9)对耐药肿瘤组织切片进行IHC染色发现经Rut治疗后的肿瘤,E3连接酶MARCH8蛋白表达水平升高,而ABCB1蛋白表达水平下降;(10)通过Co-IP及PLA实验发现E3泛素连接酶MARCH8可以与ABCB1相互作用,并促进ABCB1的泛素化和降解。结论:Rut可通过调控E3连接酶MARCH8的表达来下调ABCB1的蛋白表达水平,从而在体内和体外逆转ABCB1介导的肿瘤多药耐药。

关键词： 朱熹   鬼神   祭祀   气   理  

摘要： 孔子是儒家学派的创立者,其人的鬼神思想是儒家鬼神思想的滥觞。但相较之于鬼神,孔子更加关注于人事。孔子认为“未能事人,焉能事鬼?”及“未知生,焉知死?”。所以,孔子对鬼神的基本态度是“敬而远之”。虽然孔子“不语怪力乱神”,但他并没有根本否认鬼神的存在。此外,在鬼神与祭祀问题上,孔子认为应“祭如在”及“非其鬼而祭之,谄也”。可以看出,孔子对鬼神问题已经进行了一定程度的理性思考,他对鬼神这一问题的态度是比较理性的。受孔子影响的儒学后辈在编写《礼记》一书时,除了对祭祀这一仪式进行礼仪性规定之外,还提出了“气”与“诚”这两个概念来解释鬼神,为后世宋儒对鬼神问题进行哲学性解释提供了概念。 至张载时,儒家对鬼神问题的解释面对佛教的挑战。故张载便对鬼神这一问题进行哲学性的阐释。张载认为鬼神乃是“气”之屈伸,屈为鬼,伸为神,是“气”的两种截然相反的性质。相比于“气”来说,鬼神是形而下之物。也因此,张载对百姓对鬼神的迷信持批驳态度,并对佛教的“轮回说”,提出了“形溃返原说”,以达到其辟佛的目的。当然张载本人的思想亦不可免地受佛教思想影响。 与张载同时,二程对鬼神问题也进行了哲学性的阐释。二程将鬼神看成是“造化之迹”,这是一种比较笼统的解释。且二程鬼神思想中有着明显的“神道设教”的特征。二程虽然如同张载般批驳民间的迷信行为,但对于儒家经典记载的一些鬼神之事,不敢彻底持否认态度,便只能认为鬼神一事乃圣人“神道设教”,其目的在于教化世人。很明显,二程的鬼神思想虽然如同孔子一般落实在人事上,但其对鬼神一物的哲学性阐释并不完备。 至朱熹时,儒学鬼神思想理论进一步完善。朱熹的鬼神观是以“理”来统摄作为阴阳二“气”的鬼神,即所谓“理”摄“气”。朱熹认为,鬼神是阴阳二“气”,是形而下;“理”是万事万物的本源,是形而上;形而上的“理”统摄形而下的“气”。朱熹对鬼神问题之所以如此思考,一则是在批判继承张载与二程思想的基础上,另一方面是其哲学思想本身逻辑所致。至于鬼神与祭祀之间的关系,朱熹更是提出了“感格”与“诚敬”的哲学概念,认为祭祀者在祭祀仪式中要尽其诚敬方可与祖先的魂魄相感通。朱熹的这种看法,一方面是将鬼神之事落实于人事之上,提出了“此心之理,即是鬼神之理”的观点,给以孔子为代表的鬼神思想赋予了哲学内涵;另一方面也是将形而上的理论与形而下的实践统一了起来,是当时哲学思辨的高峰。

关键词： 动物祭祀   希腊   城邦   古典时代  

摘要： 动物祭祀是古希腊宗教活动的核心部分之一,它丰富着古希腊人的日常生活,是城邦社会建构秩序的辅助手段,发挥着表述、巩固城邦政治秩序和性别文化的重要作用。因此通过对古典时代动物祭祀的研究,我们可以从细节窥探出动物祭祀仪式下的古希腊社会百态。在古典时期,动物祭祀因其仪式性和集体性,成为城邦内各阶层的表演大舞台。在政治层面上,城邦内部通过划定参与团体在动物祭祀中的范围和差异化扮演角色的方式,既起到巩固城邦共同体团结,又对外展示政治身份的等级问题的作用。城邦外部则通过划定参祭城邦在共同祭祀活动中的参与程度来表述当下城邦间的邦际关系。因此,我们可说动物祭祀活动反映出了古希腊时期的城邦内部政治现状以及邦际关系。其次,在社会秩序层面上,逐步扩大的祭祀人员范围也反映出古希腊社会的发展问题。在古典时期,希腊城邦的发展、外邦人不断流入、城邦中平民地位提升,都反映在同时期的动物祭祀中。城邦内部逐步扩大外邦人的参祭范围、平民与贵族的祭祀扮演角色差距缩小。最后,在社会性别文化层面上,氏族对动物祭祀仪式的运用、妇女的参与程度及其角色安排都反映了城邦的性别文化主张。并且这一时期希腊各项法令对妇女的约束进一步加强,妇女所扮演的角色为匿名符号的存在。随希腊化时代,妇女地位的上升,城邦出现了关于个体妇女参祭者的记载。综合而言,古典时期的动物祭祀以一种独特的方式表述、展示了希腊城邦的社会现状。动物祭祀不仅仅是一种单纯的宗教活动,而是一种希腊社会的镜像。通过这种镜像,我们可以探寻出当时希腊城邦的社会发展问题。

关键词： 吴茱萸碱   子宫内膜异位症   异位子宫内膜间质细胞   缺氧诱导因子-1α   低氧刺激   增殖与凋亡  

摘要： 子宫内膜异位症（Endometriosis,EMs）是指具有活性的子宫内膜细胞附着在子宫腔以外的部位,在低氧微环境中发生、发展,被称为良性类肿瘤疾病。低氧主要受到缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的调节,在EMs中表达程度较高,并随着病程发展不断上调,被认为是EMs治疗的潜在靶点。现代药理学研究提示,吴茱萸碱（Evodiamine,Evo）可在低氧条件下加速HIF-1α的降解,破坏肿瘤生存的低氧微环境,发挥抗肿瘤的药理作用。但目前尚未有研究表明Evo可以通过调控HIF-1α表达,改善EMs所处的低氧微环境,在治疗中发挥潜在应用价值。 综上所述,本研究将通过体外细胞实验和动物体内实验两部分,探究Evo对EMs的治疗作用及可能机制。 第一部分探究不同含氧微环境中吴茱萸碱对子宫内膜异位症患者异位内膜间质细胞增殖、凋亡及HIF-1α表达的作用 目的:探究Evo对EMs患者异位内膜间质细胞（Endometrial stromal cells,ESCs）的影响,分析暴露于常氧、低氧环境中Evo对细胞增殖、凋亡及HIF-1α表达量变化的差异,以期初步明确Evo对异位ESCs增殖凋亡特性的影响与HIF-1α调控的关系。 方法:分离培养原代异位ESCs,设置空白对照（Control）组及Evo不同剂量组,采用MTT比色法检测常氧环境下Evo各组（2.5、5、10、20、40、80μmol/L）在不同时间（24h、48h、72h）内细胞存活率,分析量效关系,筛选后续实验使用剂量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）、蛋白印迹（Western blot）技术分别检测常氧环境下Evo各剂量组（2.5、5、10、20、40μmol/L）孵育异位ESCs 48h对细胞中HIF-1αm RNA、HIF-1α蛋白表达量的影响;Western blot技术检测常氧环境下Evo各剂量组（2.5、5、10、20、40μmol/L）孵育细胞48h后凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2）表达情况;采用流式细胞术检测暴露于Evo各剂量组（2.5、5、10、20、40μmol/L）48h对细胞凋亡情况的影响。 在低氧刺激下进一步探究Evo对异位ESCs增殖、凋亡及HIF-1α表达的影响:确定CoCl2构建低氧刺激的条件,检测不同剂量Evo（2.5、5、10、20、40、80μmol/L）孵育细胞24h、48h的存活率;依据MTT检测结果,选定后续实验Evo使用剂量（2.5、5、10、20、40μmol/L）及孵育时间（24h）检测异位ESCs中HIF-1α表达量,以及Bax、Bcl-2蛋白表达情况,分析比较不同含氧微环境中药物对细胞作用的异同。 结果: 1.观察Evo在常氧环境下的抑制增殖作用,筛选实验条件 MTT比色法检测常氧环境下Evo各组中异位ESCs存活率,发现Evo各剂量（2.5、5、10、20、40、80μmol/L）组细胞存活率均低于Control组,存活率随浓度升高而降低,呈明显的量-效关系;相同浓度Evo处理细胞不同时间（24、48、72h）后,存活率随处理时间的增加而降低,呈明显的时-效关系。通过分析比较并初步筛选出应用于后续实验的剂量（2.5、5、10、20、40μmol/L）以及作用时间（48h）。 ***在常氧环境下影响HIF-1α表达 通过qRT-PCR及Western blot技术对细胞中HIF-1α表达情况进行检测,结果表明常氧下,与Control组相比,5、10、20、40μmol/L Evo可以显著降低细胞中HIF-1αm RNA及蛋白表达量（P<0.05,P<0.01）。 ***在常氧环境下促进凋亡相关蛋白表达,诱导细胞凋亡 分析常氧下Bcl-2/Bax表达结果,发现与Control组相比,2.5、5、10、20、40μmol/L Evo可以显著促进促凋亡蛋白Bax表达（P<0.05,P<0.01）;5、10、20、40μmol/L Evo可显著抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达（P<0.05,P<0.01）;Evo各剂量组均可降低Bcl-2/Bax比值（P<0.05,P<0.01）。 常氧下流式细胞术检测结果表明,与Control组相比,10、20、40μmol/L Evo各组中Q2、Q4象限凋亡细胞团块明显增多,凋亡率显著升高（P<0.01）。 4.确定CoCl2构建低氧刺激的条件,观察Evo抑制细胞增殖作用 选用25μmol/L CoCl2孵育异位ESCs 24h,在常氧环境实验基础上,进一步分析低氧刺激下Evo各剂量组对异位ESCs存活率的影响,结果表明,与CoCl2组相比,2.5、5、10、20、40、80μmol/L Evo孵育细胞24h、48h,均可显著抑制细胞增殖（P<0.01）