关键词:
吴茱萸碱
动物实验
协同作用
荟萃分析
系统评价
吴茱萸碱
肾母细胞瘤
增殖
凋亡
摘要:
吴茱萸碱(evodiamine,EVO)是一种天然化合物,是从吴茱萸的干燥果实中分离出来的喹诺酮类生物碱。近年来,EVO被广泛应用于肿瘤研究。EVO对包括结肠癌、卵巢癌在内的多种肿瘤起抑制作用;其机制可能和抑制增殖及促进凋亡相关。EVO虽然在实验室阶段取得显著成效,但仍未见在肿瘤领域进行临床应用。本研究通过系统评价和荟萃分析,评价矛盾结论的争议性问题,为临床转化提供证据支持。大量研究表明,EVO对多种肿瘤有抑制作用。我们课题组前期研究表明,EVO对舌鳞癌的生长有抑制作用,但未见EVO抑制肾母细胞瘤的相关研究。本课题通过动物实验,探究吴茱萸碱对肾母细胞瘤的抑制作用,并初步探讨相关机制,为临床转化提供证据。第一部分:吴茱萸碱在体内实验中的协同抗肿瘤作用:一项系统评价和荟萃分析目的:吴茱萸碱在肿瘤研究中进展显著,但仍存在争议结论,且尚未应用于临床治疗。本课题通过系统评价和荟萃分析,评价吴茱萸碱在体内实验中的协同抗肿瘤作用,为临床转化提供依据。方法:检索Pub Med、Scopus、中国生物医学文献服务系统(Sino Med)和中国知网(China National Knowledge Infrastructure,CNKI)公开发表的吴茱萸碱在动物肿瘤模型中研究抗肿瘤作用的相关文献。按照制订的纳入和排除标准进行文献筛选。对筛选出的文献进行数据提取,本研究采用肿瘤体积和肿瘤重量为结局指标并应用Stata 15.0软件分析检测相关数据。对异质性进行探究,若存在异质性,则通过回归分析进一步探究。通过Begg’s检验评估发表偏倚,并采用敏感性分析评估结果稳定性。结果:本研究共纳入7篇文献,其中包含瘤体结局指标的研究有7篇,包含瘤重结局指标的研究有4篇。在瘤体结局指标中,联合治疗组和对照组相比疗效更佳,并具有统计学显著性差异(SMD=-25.64,95%CI:-5.77,-3.13;I2=92.5%,P<0.05)。在瘤重结局指标中,联合治疗组和对照组相比同样具有显著疗效并有统计学显著性差异(SMD=-8.91,95%CI:-16.37 to-1.44;I2=94.1%,P<0.05)。结论:本研究表明,与单一治疗方法相比,吴茱萸碱在体内实验中与其他药物联合应用具有协同抗肿瘤作用,可能为肿瘤治疗的潜在化疗药物。这将为肿瘤的治疗和临床转化提供新思路。第二部分:吴茱萸碱在体内实验中抑制肾母细胞瘤增殖并诱导凋亡目的:通过建立肾母细胞瘤裸鼠皮下移植瘤模型,探讨EVO对肾母细胞瘤的抑制作用,观察增殖及凋亡相关标志物,为EVO的临床转化提供新证据。方法:通过右侧腋下皮下注射肾母细胞瘤细胞建立皮下移植瘤模型,成瘤后灌胃EVO以观察其对肿瘤的抑制作用,对瘤体组织进行HE染色观察给药后核分裂像的减少,对瘤体组织进行免疫组化染色检测增殖相关蛋白Ki-67及凋亡相关蛋白Caspse-3、Caspase-9,通过透射电镜和TUNEL染色观察肿瘤组织中凋亡细胞,对裸鼠心、肝、脾、肺、肾进行HE切片染色观察药物安全性。结果:成功建立裸鼠皮下移植瘤模型,吴茱萸碱处理组较对照组肿瘤体积明显减少(P<0.05),EVO 20mg/kg组较10mg/kg组对肿瘤的抑制作用更为明显(P<0.05);HE染色镜下观察,与对照组相比,实验组瘤体组织中出现核浆比下降,细胞核分裂像减少;免疫组化结果显示,实验组裸鼠瘤体组织较对照组瘤体组织中Ki-67表达下调,Caspase-3、Caspase-9表达上调;透射电镜结果显示,EVO 10mg/kg组出现细胞早期凋亡,20mg/kg组出现细胞晚期凋亡;TUNEL染色结果显示,实验组瘤体组织较对照组瘤体组织阳性表达上升;HE染色镜下观察,与对照组相比,实验组心、肝、脾、肺、肾组织无明显异常;20mg/kg组饮水量及饮食量高于对照组并具有统计学差异,三组之间体重无明显差异。结论:吴茱萸碱抑制体内实验中肾母细胞瘤的增殖并促进肿瘤细胞凋亡,EVO处理后肿瘤组织中增殖相关蛋白Ki-67表达下调,凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9表达上调。