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关键词： 蒺藜   吴茱萸   方法转换   靶向分离纯化   鉴定  

摘要： 中药化学成分复杂多样,对中药化合物进行系统分离纯化研究,可为其药理活性研究以及临床应用提供物质基础。然而传统的分离纯化方法往往费时费力,简化中药化合物的分离流程,减少人力物力的耗费,对分离效率的提升具有重要意义。本研究首先优化了一种高效液相色谱（HPLC）与超高效液相色谱质谱联用（UHPLC-MS）的转换方法,并将其应用于茱萸内消丸中两个重要的组成药味蒺藜与吴茱萸的分离流程中;其次通过优化色谱条件等对蒺藜与吴茱萸UHPLC-MS指纹图谱进行了表征;最后在成分鉴定的基础上通过正相硅胶、反向ODS、Sephadex LH-20等柱色谱及中高压制备高效液相色谱等方法,进行了蒺藜与吴茱萸中所含化合物定向分离与鉴定。具体研究内容和实验结果如下: 1.建立了一种HPLC与UHPLC-MS色谱条件快速转换的方法,通过色谱柱的选择、流速、进样体积、延迟体积、梯度洗脱程序等参数测定来快速实现方法转换。选取了七个色谱峰,比较它们在方法转换过程中的保留行为差异,最终发现HPLC上使用Cosmosil5C18-MS-II（4.6×250 mm,5μm）与UHPLC-MS上使用BEH C18（2.1×100 mm,1.7μm）以及UPLC C18（2.1×100 mm,1.6μm）可实现色谱峰保留行为的对应,对其建立函数关系可得:当使用BEH C18时,t HPLC=4.0061t UHPLC-MS-1.3094+tdelay;当使用UPLC C18时,t HPLC=3.9657t UHPLC-MS+0.0586+tdelay。通过此方法可使得分析时间缩短约4倍,同时大大减少了溶剂的消耗。将其应用于蒺藜的化合物分离流程中,通过定位目标化合物来验证此方法的可靠性,对此化合物进行鉴定,并进行靶向分离后,发现UHPLC-MS鉴定结果与分离后的化合物NMR鉴定结果相同,为后续进行蒺藜与吴茱萸的分离奠定了基础。 2.通过优化UHPLC-MS分析方法,如色谱柱、柱温、流速及流动相添加剂的种类等,对蒺藜75%乙醇提取物进行了快速鉴定。优化后的色谱条件为:UPLC C18色谱柱,0.1%乙酸-水和乙腈为流动相,柱温为35℃,流速为0.3 mL/min;最后通过高分辨质谱数据,通过数据拟合元素组成、标准品比对、文献报道和数据库检索等方法,最终从蒺藜提取物中共鉴定出89个化合物。在UHPLC-MS鉴定的基础上,本实验进一步选取其中20个相对响应较高的色谱峰,开展定向分离实验。通过正相硅胶、Sephadex LH-20、反向ODS等柱色谱及中高压制备高效液相色谱等方法,从蒺藜75%乙醇提取物中定向分离了20个化合物。利用MS、NMR等波谱学技术鉴定了它们的结构,分别为:ferulamide（1）、克罗酰胺（2）、kaempferol 3-O-β-D-glucoside（3）、erythro-guaiacylglycerol-8-O-4'-（coniferylalcohol）ether（4）、threo-guaiacylglycerol-8-O-4'-（coniferyl alcohol）ether（5）、kaempferol（6）、rutin（7）、tribulusamide C（8）、N-trans-cinnamoyltyramine（9）、N-trans-feruloyloctopamine（10）、异槲皮苷（11）、N-trans-caffeoyltyramine（12）、isorhamnetin（13）、N-p-反式香豆酰酪胺（14）、（E,E）-terrestribisamide（15）、N-trans-p-methoxycinnamoyl-3-hydoxyoctopamine（16）、异阿魏酸（17）、阿魏酸甲酯（18）、succinic acid（19）、白杨素（20）。其中,化合物4、5为首次从蒺藜属植物中分离得到。 3.通过类似的方法,优化吴茱萸提取物的UHPLC-MS分析方法。优化后的色谱条件为:BEH C18色谱柱,0.1%乙酸-水和乙腈为流动相,柱温为35℃,流速为0.3 mL/min;通过类似的鉴定方法,最终从吴茱萸提取物中共鉴定出94个化合物。在UHPLC-MS鉴定的基础上,进一步选取其中21个相对响应较高的色谱峰,开展定向分离实验,最终从吴茱萸95%乙醇提取物中共分离了21个化合物。利用MS、NMR等波谱学技术鉴定了17个化合物的结构,分别为:rutaevine（21）、evodol（22）、atanine I（23）、6β-acetoxy-5-epilimonin（24）、evodiamine（25）、obacunone（26）、goshuyuamide-Ⅱ（27）、1-methyl-2-nonyl-4（1H）-quinolone（28

关键词： 名山   镇岳   宗教   祭祀   崇拜  

摘要： 名山镇岳中的镇山文化，在山岳崇拜与文化中占有重要地位。其跨度非常之大，从先秦穿过历史时期，一直延续到现代。所以，对其主体五镇文化的关注与考索，可以上探其源，下索其流，探考其自然宗教与人文内涵。与之相较，有佛教菩萨名山、道教洞天福地、民间诸族信仰甚至海外镇山。由此，我们可知中国敬天法祖传统与国家祭祀礼制的一些轨迹，较之国外宗教性强的圣山崇拜，体现出政治与宗教文化之融会以及分流，具有独特价值。

关键词： TSPAN7   自闭症   动物模型   突触   Integrinβ1/FAK/SRC信号通路   阿尔茨海默病   吴茱萸碱   老年斑   Tau过度磷酸化   PI3K/AKT/GSK3β信号通路  

摘要： 背景:自闭症谱系障碍(autism spectrum disorder,ASD)是一种复杂的、具有高度遗传异质性的神经发育障碍疾病。遗传因素与环境因素的刺激等多种因素均是引起ASD发病的危险因素。四次跨膜蛋白7(Tetraspanin7,TSPAN7)是一种由位于X染色体上的Tspan7基因所编码的细胞表面糖蛋白,在脑组织中高度表达。在生理状态下,TSPAN7参与突触传递、神经元形态发生、树突状细胞(dendritic cell,DCs)和破骨细胞形态发生。研究发现,Tspan7的拷贝数变异与人类ASD的发生和发展密切相关。然而,TSPAN7在ASD的突触和突触完整性层面的潜在机制仍不清楚。为探究TSPAN7在自闭症中的作用,我们利用CRISPR/Cas9技术构建一个Tspan7基因敲除大鼠品系,以期建立Tspan7基因敲除的ASD大鼠模型,并利用该模型探究TSPAN7在自闭症中的作用机制。方法:(1)利用生物信息学分析、PCR、蛋白质印迹(Western blot,WB)和免疫荧光检测TSPAN7序列特征和表达谱。(2)通过CRISPR/Cas9技术构建Tspan7基因敲除大鼠品系(Tspan7-/-),并利用PCR和WB对其进行基因型鉴定和蛋白表达鉴定。(3)通过旷场、糖水偏好、三箱社交、Y迷宫和Morris水迷宫实验对野生型(Wild Type,WT)大鼠和Tspan7-/-大鼠在刻板行为、快感缺失、社交活动、学习记忆等四方面自闭症的行为表型进行分析。(4)应用核磁共振(magnetic resonance imaging,MRI)、苏木素伊红染色(haematoxylin-eosin staining,HE)和 Nissl 染色分析Tspan7-/-大鼠整体脑结构和神经元数量的改变。(5)通过qRT-PCR和Golgi-Cox染色观察Tspan7-/-大鼠大脑ASD相关基因的表达和神经元分支和树突棘数量的改变。采用免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测Tspan7-/-大鼠大脑神经元突触完整性。(6)采用WB和IF分析TSPAN7缺失引起的下游信号通路的表达变化。结果:(1)在生理条件下,TSPAN7在哺乳动物中的蛋白序列是高度保守的,在大鼠脑组织中表达最高。同时,TSPAN7蛋白在出生时表达较低,从0.5月龄开始至4月龄TSPAN7的表达明显增加。TSPAN7的亚细胞定位主要是在神经元细胞膜上高度表达。在病理条件下,TSPAN7在ASD、亨廷顿病(Huntington's disease,HD)、帕金森病(Parkinson's disease,PD)和阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者的脑组织中呈现低表达趋势,表明TSPAN7在神经系统疾病的发展进程中起关键作用。(2)成功构建Tspan7基因敲除大鼠,旷场、糖水偏好、三箱社交、Y迷宫和Morris水迷宫实验结果显示Tspan7-/-大鼠表现出刻板行为增多、快感降低、社交减少以及学习记忆损伤等ASD的典型行为学表型。(3)影像学结果显示:Tspan7-/-大鼠在整体水平表现出海马和大脑皮层体积减小的大脑结构的改变。(4)组织形态学显示,Tspan7-/-大鼠大脑海马区神经元数目减少并且排列松散。Tspan7-/-大鼠海马和大脑皮层的神经元树突和轴突分支、神经元复杂度、神经元顶端树突和基底树突的树突棘明显减少。(5)TSPAN7缺失导致大鼠大脑海马和皮层PSD95和SYN等突触相关蛋白表达和PSD95免疫标记的突触后膜和SYN免疫标记的突触前膜重叠点明显减少。(6)TSPAN7缺失抑制Integrinβ1/FAK/SRC信号通路的激活,进而下调PSD95、SYN和GluR1/2等突触相关蛋白的表达。(7)在Tspan7-/-大鼠原代神经元中,原癌基因酪氨酸蛋白激酶SRC(Proto-Oncogene Tyrosine-Protein Kinase Src,SRC)的重新激活能够恢复 PSD95、SYN 和GluR1/2等突触相关蛋白的表达和突触完整性。结论:TSPAN7在哺乳动物中的蛋白序列是高度保守的,并且在神经系统疾病的发展中起关键作用。我们成功构建Tspan7-/-大鼠,该大鼠出现刻板行为增多、快感降低及社交减少等行为学改变,再现人类ASD行为学表型;Tspan7-/-大鼠海马和皮层的神经元树突和轴突分支、神经元复杂度、神经元顶端树突和基底树突的树突棘明显减少,与人类ASD的脑组织病理学改变具有相似性;Tspan7-/-大鼠可作为人类ASD的动物模型。利用模型发现TSPAN7缺失通过抑制Integrinβ1/FAK/SRC信号通路激活,引起突触相关蛋白降低和突触完整性损失,是导致ASD的重要发病机制。背景:阿尔茨

摘要： 勉县武侯墓清明祭祀活动是以民间信仰为主要内容的民间群众性活动和民间文化活动,也是全国唯一由蜀汉政权官方确立的、以祭祀诸葛亮为主要内容的大型祭祀活动,其历史可追溯到蜀汉景耀六年(263),距今已有1700多年历史,2007年时被陕西省人民政府批准列入第一批省级非物质文化遗产名录。

关键词： 诗经   颂诗   文化意蕴   祭祀  

摘要： 《诗经》中的颂诗主要是统治阶级歌功颂德的祭祀乐歌,但结合颂诗的产生背景、时代及它与西周礼乐文化的关系和它所开创的中国文学的“美颂”传统来看，具有深厚的文化意蕴。《诗经》颂诗是周代礼乐文明的产物，这些在礼乐背景下表现出的文化精神的诗歌，不断激励着人们的昂扬斗志和健美情操。

关键词： 阿尔茨海默病   熟地黄   山茱萸   细胞凋亡   PI3K-AKT  

摘要： 目的中医古籍文献中没有对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的病名记载,根据临床症状将AD归属于“郁证”、“呆病”、“善忘”等病症范围。从我们中医学的角度来说,虽然说AD病位在脑,但与肾有着密切的关系。大多数学者认为肾精亏虚、髓海不足等原因是造成AD的病理基础,同时在临床治疗上采取以补肾作为主要治疗法也纷纷取得了不错的治疗效果。在历朝历代熟地黄、山茱萸都是医学前辈们治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)常用的补肾复方的药对之一,而目前有关熟地黄-山茱萸药对配伍治疗AD的药效物质基础及作用机制尚不确定。因此本文从网络药理学的研究角度分析熟地黄-山茱萸药对配伍抗AD的潜在靶点及目标信号通路,再应用Aβ(β-amyloid)25-35损伤N2a(mouse neuroblastoma N2a cells)神经细胞建立的AD细胞模型进行体外细胞实验,验证熟地黄-山茱萸药对配伍改善Aβ25-35损伤神经细胞的保护作用及相关机制,验证网络药理学结果的可靠性,同时为临床应用熟地黄-山茱萸醇药对防治AD提供实验依据。材料与方法1.应用TCMSP(中药系统药理学数据库和分析平台,https://***/***)和BATMAN数据库(中药分子机制的生物信息学分析工具,http://***/bat man-tcm/),预测熟地黄、山茱萸药效物质基础及其相应的作用靶标;应用BATMAN数据库,预测熟地、山茱萸的药效物质基础和有效成分;利用TTD(Therapeutic target database,http://***/ttd/)、GAD(http://***/)、TCM SP等数据库,对AD的作用靶标进行筛选;运用Cytoscape软件,构建“熟地黄-山茱萸药效物质基础-AD病理作用靶标”的网络模型,揭示其在AD病理过程中的作用。在DAVID数据库中,通过GO注释及KEGG Pathway分析“熟地黄-山茱萸药效物质-AD病理作用靶标”,获得与AD病理作用密切关联的KEGG Pathway。通过上述研究,阐明地黄-山茱萸配伍对抗AD的可能途径。2.以Aβ25-35(20μmol/L)处理N2a细胞构建AD细胞模型,给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h。采用CCK8法测定细胞存活率,寻求最佳的Aβ25-35的诱导浓度;Hoechst 33342和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;比色法和Western blot法分别检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性及蛋白表达;Western blot法检测p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达。结果1.筛选出熟地黄-山茱萸药对共41个活性成分,其中最终有效成分熟地黄4个,山茱萸20个;熟地黄-山茱萸的活性成分不仅调节人前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、毒蕈碱型胆碱受体M1(CHRM1)、毒蕈碱型胆碱受体M2(CHRM2)等10个靶标,还影响44个生物过程(例如乙酰胆碱受体活性、乙酰胆碱酯酶活性、胆碱酯酶活性、G蛋白偶联血清素受体活性、酶结合和血清素结合)和6条代谢途径(钙信号通路和胆碱能突触信号通路等)。根据网络药理学实验,并结合文献报道与AD的相关性,我们选取PI3K-AKT信号通路作为熟地黄-山茱萸药对改善AD神经细胞损伤进行后续实验研究。2.与空白对照组相比,经过Aβ25-35处理后的N2a细胞凋亡率显著升高,Caspase-3相对活性和蛋白表达下降,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值下降(P<0.05);给予低、高浓度的熟地黄-山茱萸醇提物作用24 h后,N2a细胞的凋亡率降低,Caspase-3活性及Cleaved caspase-3蛋白表达下降,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);与低剂量组比,高剂量组N2a细胞的凋亡率和Caspase-3相对活性降低,p-AKT/AKT比值升高(P<0.05)。结论通过网络药理学研究了熟地黄-山茱萸药对发挥抗AD作用的药效物质基础及作用机制,预测到干预AD的作用靶点与信号通路,并选取PI3K-AKT信号通路作为目标通路进行细胞实验验证。采用细胞模型实验证明熟地黄-山茱萸醇提物对Aβ25-35诱导的AD细胞损伤模型具有抗凋亡作用,作用机制可能与其激活PI3K-AKT信号通路抑制Capases-3活性及蛋白表达相关。

关键词： 青铜鼎   媒介   政治  

摘要： 鼎是中国青铜时代中最典型的青铜器。历经上古三代，鼎在铸造、装饰、使用场景等面向上具有鲜明而浓厚的宗教与政治色彩。本文将青铜鼎视为一种传播媒介，以媒介的三重隐喻为讨论范畴，考察鼎在早期人类社会的国家政治生活中所扮演的多重角色，及其在特定历史时空中的政治与文化功能。本文发现，从社会环境、传播渠道和语言三种常用的媒介隐喻出发，青铜鼎从沟通鬼神的祭祀法器到彰显世俗权威的政治工具，以其极具时间偏向的稳定特质持续为历代帝王彰显功绩，最终建构并维护了封建宗法礼制的等级制度。

摘要： 为增强文化认同，坚定文化自信，发扬三国文化，传承武侯遗风，弘扬中华传统美德，2023年4月5日，由陕西省非物质文化遗产保护中心、中共勉县县委、勉县人民政府主办，勉县文化和旅游局牵头，勉县武侯墓博物馆、《百花》杂志承办，汉中市科技职业中等专业学校（城固师范学校）协办的中国·勉县2023癸卯年诸葛武侯清明祭祀大典在勉县武侯墓博物馆圆满礼成。