关键词：
黄连-吴茱萸药对
脓毒症
代谢组学
转录组学
肠道菌群
摘要：
脓毒症是一个重大的全球健康问题,其被定义为宿主对感染反应失调而导致的危及生命的器官功能障碍。随着研究的深入,肠道在脓毒症发展过程中的重要性逐步被人们所认识。黄连-吴茱萸配伍应用历史悠久,现代药理研究表明,其具有多种药理作用,在抗炎、抗溃疡及保护胃肠道等方面具有很好的疗效。因此,本论文旨在研究黄连-吴茱萸药对的物质基础,探究其配伍效应及作用机制,为黄连-吴茱萸药对抗脓毒症的作用提供理论基础,为其进一步开发提供科学依据。本论文共分为三章,各章的研究内容及结果如下:第一章文献研究第一节脓毒症肠黏膜损伤的研究进展正常机体的肠道黏膜屏障可以防止致病性细菌、毒素等穿过肠黏膜侵入血液循环和外周器官,从而维持机体内环境稳定。脓毒症发生时局部炎症反应可导致肠黏膜屏障损伤,进而加快脓毒症的发展速度甚至危及患者生命。因此,本节对脓毒症肠黏膜损伤的研究进展进行总结,同时也将中医药治疗肠黏膜屏障损伤的作用途径进行归纳,以期为后续的研究提供思路。第二节黄连-吴茱萸药对的研究进展药对是临床遣药组方常用的配伍形式之一,通过结合药物的性味和功效选择性地将两药进行组合配对,以达到协同增效或配伍减毒的作用。黄连-吴茱萸配伍应用历史悠久,临床常用左金丸(黄连:吴茱萸=6:1),出自于《丹溪心法》。因此,本节对黄连-吴茱萸配伍后的化学成分进行归纳,从其配伍增效及配伍解毒两方面进行总结阐述,并将其现代药理研究作用进行综述,为本论文研究奠定基础。第三节研究思路及方案设计本节旨在阐明论文研究思路、实验设计以及研究内容的整体框架。围绕黄连-吴茱萸药对,通过腹腔注射LPS复制脓毒症小鼠模型,拟开展如下研究工作:(1)阐释黄连-吴茱萸药对的化学成分;(2)评价黄连-吴茱萸配伍对脓毒症小鼠的保护作用;(3)揭示黄连-吴茱萸药对抗脓毒症的作用机制。第二章黄连-吴茱萸的化学成分与抗脓毒症作用研究第一节基于UPLC-Q-TOF/MS法的黄连-吴茱萸药对化学成分定性分析本节采用UPLC-Q-TOF/MS法对黄连-吴茱萸药对中的化学成分进行定性分析,共鉴定出17个化合物,分别为:9,10-dihydroxycolumbamine、吴茱萸次碱、2-羟基药根碱、Demethylene coptisine、8-氧化表小檗碱、药根碱、格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、去氢吴茱萸碱、13-甲基小檗碱、巴马汀、小檗碱、7-羟基香豆素、柠檬苦素和吴茱萸碱,其中包括15个生物碱类,1个柠檬苦素类,1个香豆素类,其中5个来源于吴茱萸,12个来源于黄连,以期为后续的药理机制研究提供理论基础。第二节基于层次分析与多指标正交试验对黄连-吴茱萸药对提取工艺研究本节采用层次分析法、多指标综合评分法结合正交试验对黄连-吴茱萸药对的提取工艺进行研究,以7种成分(盐酸小檗碱、表小檗碱、黄连碱、药根碱、盐酸巴马汀、吴茱萸碱、吴茱萸次碱)作为考察指标,结果表明,最佳提取工艺参数为料液比1:8 g/m L、提取3次、提取时间为1.5 h,该工艺合理可靠,重复性良好,可为黄连-吴茱萸药对后续的研究与开发提供参考。第三节黄连-吴茱萸配伍对脓毒症小鼠的保护作用评价本节通过腹腔注射LPS复制脓毒症小鼠模型,给予黄连-吴茱萸药对不同剂量(低剂量:0.78 g/kg、中剂量:1.56 g/kg、高剂量:3.12 g/kg)、黄连(1.30 g/kg)和吴茱萸(0.26 g/kg)进行干预,结果表明黄连-吴茱萸药对中剂量组(即临床等效剂量)可以提高脓毒症小鼠的生存率,显著降低脓毒症小鼠血清炎症因子的含量,同时可以上调紧密连接蛋白的表达,改善肠组织病理损伤情况,与其他剂量组及单味药黄连组和吴茱萸组相比,黄连-吴茱萸药对中剂量组的效果更为显著。第三章黄连-吴茱萸药对抗脓毒症作用机制研究第一节基于代谢组学的黄连-吴茱萸药对抗脓毒症作用机制研究本节研究基于UPLC-Q-TOF/MS的代谢组学方法研究黄连-吴茱萸药对抗脓毒症的作用机制,共筛选出23种差异代谢物(正离子模式下11种,负离子模式下12种),并构建了相关代谢途径。经过分析发现黄连-吴茱萸药对可能是通过抑制花生四烯酸代谢通路的过度激活,促使甘油磷脂代谢趋于正常,从而发挥抗脓毒症作用。与单味药黄连组和吴茱萸组相比,黄连-吴茱萸药对中剂量组调控多种差异代谢物的表达,干预多条代谢通路,从而达到更好的防治效果。第二节基于转录组学的黄连-吴茱萸药对抗脓毒症作用机制研究本节通过转录组学技术对空白组、模型组、黄连-吴茱萸中剂量组的小鼠结肠组织进行高通量测序,对筛选出的109个差异表达基因进行聚类分析、GO分析和KEGG通路富集分析等。结果表明,这些差异表达基因主要富集在HIF-1信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路等通路,表明黄连-吴茱萸可能通过调控相关基因表达,抑制上述与炎症相关的信号通路,发
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