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关键词： 黄连-吴茱萸药对   脓毒症   代谢组学   转录组学   肠道菌群  

摘要： 脓毒症是一个重大的全球健康问题,其被定义为宿主对感染反应失调而导致的危及生命的器官功能障碍。随着研究的深入,肠道在脓毒症发展过程中的重要性逐步被人们所认识。黄连-吴茱萸配伍应用历史悠久,现代药理研究表明,其具有多种药理作用,在抗炎、抗溃疡及保护胃肠道等方面具有很好的疗效。因此,本论文旨在研究黄连-吴茱萸药对的物质基础,探究其配伍效应及作用机制,为黄连-吴茱萸药对抗脓毒症的作用提供理论基础,为其进一步开发提供科学依据。本论文共分为三章,各章的研究内容及结果如下:第一章文献研究第一节脓毒症肠黏膜损伤的研究进展正常机体的肠道黏膜屏障可以防止致病性细菌、毒素等穿过肠黏膜侵入血液循环和外周器官,从而维持机体内环境稳定。脓毒症发生时局部炎症反应可导致肠黏膜屏障损伤,进而加快脓毒症的发展速度甚至危及患者生命。因此,本节对脓毒症肠黏膜损伤的研究进展进行总结,同时也将中医药治疗肠黏膜屏障损伤的作用途径进行归纳,以期为后续的研究提供思路。第二节黄连-吴茱萸药对的研究进展药对是临床遣药组方常用的配伍形式之一,通过结合药物的性味和功效选择性地将两药进行组合配对,以达到协同增效或配伍减毒的作用。黄连-吴茱萸配伍应用历史悠久,临床常用左金丸(黄连:吴茱萸=6:1),出自于《丹溪心法》。因此,本节对黄连-吴茱萸配伍后的化学成分进行归纳,从其配伍增效及配伍解毒两方面进行总结阐述,并将其现代药理研究作用进行综述,为本论文研究奠定基础。第三节研究思路及方案设计本节旨在阐明论文研究思路、实验设计以及研究内容的整体框架。围绕黄连-吴茱萸药对,通过腹腔注射LPS复制脓毒症小鼠模型,拟开展如下研究工作:(1)阐释黄连-吴茱萸药对的化学成分;(2)评价黄连-吴茱萸配伍对脓毒症小鼠的保护作用;(3)揭示黄连-吴茱萸药对抗脓毒症的作用机制。第二章黄连-吴茱萸的化学成分与抗脓毒症作用研究第一节基于UPLC-Q-TOF/MS法的黄连-吴茱萸药对化学成分定性分析本节采用UPLC-Q-TOF/MS法对黄连-吴茱萸药对中的化学成分进行定性分析,共鉴定出17个化合物,分别为:9,10-dihydroxycolumbamine、吴茱萸次碱、2-羟基药根碱、Demethylene coptisine、8-氧化表小檗碱、药根碱、格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、去氢吴茱萸碱、13-甲基小檗碱、巴马汀、小檗碱、7-羟基香豆素、柠檬苦素和吴茱萸碱,其中包括15个生物碱类,1个柠檬苦素类,1个香豆素类,其中5个来源于吴茱萸,12个来源于黄连,以期为后续的药理机制研究提供理论基础。第二节基于层次分析与多指标正交试验对黄连-吴茱萸药对提取工艺研究本节采用层次分析法、多指标综合评分法结合正交试验对黄连-吴茱萸药对的提取工艺进行研究,以7种成分(盐酸小檗碱、表小檗碱、黄连碱、药根碱、盐酸巴马汀、吴茱萸碱、吴茱萸次碱)作为考察指标,结果表明,最佳提取工艺参数为料液比1:8 g/m L、提取3次、提取时间为1.5 h,该工艺合理可靠,重复性良好,可为黄连-吴茱萸药对后续的研究与开发提供参考。第三节黄连-吴茱萸配伍对脓毒症小鼠的保护作用评价本节通过腹腔注射LPS复制脓毒症小鼠模型,给予黄连-吴茱萸药对不同剂量(低剂量:0.78 g/kg、中剂量:1.56 g/kg、高剂量:3.12 g/kg)、黄连(1.30 g/kg)和吴茱萸(0.26 g/kg)进行干预,结果表明黄连-吴茱萸药对中剂量组(即临床等效剂量)可以提高脓毒症小鼠的生存率,显著降低脓毒症小鼠血清炎症因子的含量,同时可以上调紧密连接蛋白的表达,改善肠组织病理损伤情况,与其他剂量组及单味药黄连组和吴茱萸组相比,黄连-吴茱萸药对中剂量组的效果更为显著。第三章黄连-吴茱萸药对抗脓毒症作用机制研究第一节基于代谢组学的黄连-吴茱萸药对抗脓毒症作用机制研究本节研究基于UPLC-Q-TOF/MS的代谢组学方法研究黄连-吴茱萸药对抗脓毒症的作用机制,共筛选出23种差异代谢物(正离子模式下11种,负离子模式下12种),并构建了相关代谢途径。经过分析发现黄连-吴茱萸药对可能是通过抑制花生四烯酸代谢通路的过度激活,促使甘油磷脂代谢趋于正常,从而发挥抗脓毒症作用。与单味药黄连组和吴茱萸组相比,黄连-吴茱萸药对中剂量组调控多种差异代谢物的表达,干预多条代谢通路,从而达到更好的防治效果。第二节基于转录组学的黄连-吴茱萸药对抗脓毒症作用机制研究本节通过转录组学技术对空白组、模型组、黄连-吴茱萸中剂量组的小鼠结肠组织进行高通量测序,对筛选出的109个差异表达基因进行聚类分析、GO分析和KEGG通路富集分析等。结果表明,这些差异表达基因主要富集在HIF-1信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路等通路,表明黄连-吴茱萸可能通过调控相关基因表达,抑制上述与炎症相关的信号通路,发

关键词： 《诗经》   德译   祭祀仪式   译者  

摘要： 《诗经》是中国文学史上的第一部诗歌总集。它的产生和创作离不开周朝礼乐文明中祭祀文化的影响,因此祭祀仪式成为《诗经》译介过程中需要考量的重要文化因素。然而,关于《诗经》祭祀仪式的译介研究却不多见。基于此,本文以《诗经》中祭祀仪式的翻译作为切入点,以四个《诗经》德译本作为研究对象,即吕克特(Friedrich Rückert)的1833年译本、克莱默(Johann Cramer)的1844年译本、冯·施特劳斯(Victor von Stranβ)的1880年译本和西蒙(Rainald Simon)的2015年译本,参考译者主体性理论,探究如下问题:其一,在翻译祭祀仪式时,四位译者的主体性如何发挥;其二,哪些因素可能影响了译者的主体性表现。《诗经》主要包含七种祭祀仪式,分别是祭祀祖先、祭祀社稷、祭祀上天、籍田礼、祭祀山川、祭祀农神和雩祭。其中,描写祭祖仪式的诗歌最多,约占总量的80%。在翻译这些祭祀仪式的过程中,四位译者的主体性主要体现在四个层面:其一,译者们选择了不同的源文本。两位译者将《诗经》的拉丁文译本转译成德语,两位译者则将《诗经》的中文版本直译成德语。其二,译者们使用不同的翻译策略和翻译方法来再现《诗经》中的祭祀仪式。他们在归化策略和异化策略中做出选择,并使用省译、替换、字译等多种翻译方法。其三,四位译者在翻译祭祀仪式时塑造出不同的语言风格。他们构建不同的韵律和节奏,使用不同方法再现原文叠词的形式特点。其四,四位译者在翻译同祭祀仪式相关的文化专有项时也存在差异。有些译者删除了这些词语或没有解释这些词语的潜在含义,有些译者则利用注释详细阐释了这些词语隐含的祭祀文化。由《诗经》祭祀仪式翻译显示的四位译者的主体性表现主要受四大因素的影响:首先,四位译者所处的时代背景不同。从19世纪到21世纪,德国和中国在政治、经济和文化层面的实力差距逐渐缩小,这影响了译者对中国祭祀文化的理解、阐释和翻译。其次,德国汉学在19世纪和21世纪的发展水平不同。这为四位译者翻译《诗经》中的祭祀仪式提供了不同程度的帮助,影响了《诗经》的德译进展。而且,四位译者秉持不同的美学思想和翻译理念。译者们对诗歌形式、韵律观念和翻译忠实原则的不同看法促使他们在翻译祭祀仪式时得出不同的结果。此外,四位译者具有不同的个人经历和社会身份。他们在翻译祭祀仪式时各有侧重,形成了不同的翻译风格。总之,通过研究四个《诗经》德译本,本文较为全面地分析了《诗经》祭祀仪式在19和21世纪的德译情况,补充了以往的《诗经》德译研究,拓宽了中华典籍德译的研究范围。本文着眼于译者,提出了一个探究译者主体性的具体表现和影响因素的分析框架。基于上述分析框架、丰富的译文实例和深入的文本分析,本文考察了四位《诗经》译者对古代中国祭祀文化的重构情况,为未来的中华典籍外译提供参考。

关键词： 祭祀辞   红丰仡佬语   词汇衔接手段   程式结构   篇章组织  

摘要： 仡佬族祭祀文化浓厚,祭祀时祭师会用仡佬语唱祭祀辞来祭拜祖先和神灵。由于仡佬族历史上缺乏与本民族语言相匹配的文字系统,这些祭祀辞只能世代口耳相传。随着经济全球化的高速发展,仡佬语和其他许多少数民族语言一样正面临着使用人口急剧减少乃至濒危的处境。作为仡佬语族语言文化的重要组成部分,祭祀辞更是处于即将失传的境地。因此,对这些祭祀辞的记录保护和研究有着积极的现实意义和重要的学术价值。目前有关仡佬语祭祀辞的工作和研究主要聚焦于收集、整理并关注其社会、文化、心理等诸层面,探讨其内部语言特征的研究很少。有鉴于此,本文以贵州省百里杜鹃管理区普底乡红丰村仡佬语祭祀辞为研究对象,对这些祭祀辞语篇的复现手段、同现手段和程式结构进行分析,并在此基础考察其篇章组织特征,为祭祀辞这种口头传统文本特征的语言学研究提供个案参考。具体而言,文章旨在回答以下几个问题:(1)红丰仡佬语祭祀辞主要运用了哪些衔接手段?(2)使用了什么样的程式结构?(3)在篇章组织上呈现出怎样的特征?研究发现:红丰仡佬语祭祀辞主要运用了词汇复现和词汇同现两种衔接手段。词汇复现包括同一词汇的复现、近义词的复现和概括性词汇的复现,词汇同现包括反义词的同现和词汇搭配的同现。程式结构方面,红丰仡佬语祭祀辞主要使用了话题结构和语气结构两大类结构。话题结构表现出明显的话题链结构。语气结构主要有陈述语气和祈使语气两种。这两种语气的交替使用体现了祭祀辞这种文体的突出特征,即通过指令鬼神以驱邪避害、求吉祈福,凸显了祭祀辞语篇提供信息、命令、请求、提醒和劝说等功能。在篇章组织层面,祭祀辞语篇呈现出连贯性、相似性、紧密性和对称性等鲜明的结构特征。其中连贯性表现为多条衔接链贯穿全篇或局部,相互交织,相互作用,共同构成祭祀辞语篇的主体网络。这些特征使得祭祀辞语篇便于吟颂、记忆,体现了祭祀辞这种口头文体特有的语篇组织特征。本研究加深了红丰仡佬语祭祀辞篇章特征的认识,也为祭祀辞的篇章语言学研究提供了个案参考。

关键词： 祭仪剧   社火和傩   文化内涵  

摘要： 中国传统戏剧是中华民族传统文化中的瑰宝，其数量庞大、形态多样，祭祀仪式剧便是其中一个独立且独特的戏剧类型，其热闹、随意的观演氛围有别于西方剧场，它是我国观演文化中独具特色的一部分。本文以甘肃社火和甘肃傩为例，探讨了祭祀仪式剧的文化内涵和社会功能。

关键词： 子午流注   穴位贴敷   吴茱萸   脑卒中   气虚秘  

摘要： 目的:本研究运用子午流注穴位贴敷联合吴茱萸热熨对老年脑卒中气虚秘患者进行干预,探究该方法对老年脑卒中气虚秘患者便秘症状、每周自主完全排便次数(SCBM)、便秘生活质量、中医证候、便秘助排药物使用情况的影响,并探索时间因素对穴位贴敷联合吴茱萸热熨的临床疗效影响,丰富子午流注理论的临床运用,提高穴位贴敷联合吴茱萸热熨对老年脑卒中气虚秘患者的疗效。方法:选取2021年12月至2022年12月在广西中医药大学附属瑞康医院康复医学科住院,符合纳入、排除标准的90例老年脑卒中气虚秘患者为研究对象,采用随机数字法分为A组(便秘常规护理组)、B组(穴位贴敷联合吴茱萸热熨组)、C组(子午流注穴位贴敷联合吴茱萸热熨组)各30例患者,干预过程中至干预结束三组共有5例脱落,最终纳入85例,A组28例、B组29例、C组28例。A组实施便秘常规护理,即饮食护理、生活护理、腹部按摩、盆底肌锻炼与心理护理等;B组在便秘常规护理基础上予穴位贴敷联合吴茱萸热熨,干预时间避开子午流注足太阴脾经最旺盛的巳时09:00-11:00,结合科室实际情况选为每天14:00-18:00,吴茱萸热熨每次20min,1次/天,吴茱萸熨敷结束后即进行中药穴位贴敷,每次贴敷时长为4h,1次/天,干预1周为一个疗程,共连续干预2周;C组便秘常规护理、吴茱萸热熨与穴位贴敷药物、疗程、取穴及操作方法均和B组一致,干预时间为每天子午流注足太阴脾经最旺盛的巳时09:00-11:00。于干预前、干预2周后评估患者便秘症状、SCBM、便秘生活质量、中医证候积分、临床疗效及便秘助排药物使用情况。结果:1.基线资料比较:三组患者一般资料、便秘症状得分、SCBM、便秘生活质量、中医证候积分差异均无统计学意义(P>0.05),均衡可比。2.便秘症状得分比较:(1)自身组内比较:三组患者干预后便秘症状各维度得分及总分均较干预前降低,差异具有统计学意义(P(27)0.05)。(2)干预后组间比较:干预后C组患者便秘症状各维度得分及总分均低于B组、A组,三组经Bonferroni检验两两比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。***比较:(1)自身组内比较:三组患者干预后SCBM均较干预前增多(P(27)0.05)。(2)干预后组间比较:干预后C组SCBM多于B组,B组多于A组(P(27)0.05)。4.便秘生活质量得分比较:(1)自身组内比较:三组患者干预后便秘生活质量各维度得分及总分均较干预前降低,差异具有统计学意义(P(27)0.05)。(2)干预后组间比较:干预后C组患者便秘生活质量各维度得分及总分均低于B组、A组,三组经Bonferroni检验两两比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.中医证候积分比较:(1)自身组内比较:三组患者干预后中医证候各维度积分及总分均较干预前降低,差异具有统计学意义(P(27)0.05)。(2)干预后组间比较:干预后C组患者中医证候各维度积分及总分均低于B组、A组,三组经Bonferroni检验两两比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。6.临床疗效比较:干预后,A组总有效率为42.86%(12/28),B组为72.41%(21/29),C组为92.86%(26/28),C组高于B组、A组,差异具有统计学意义(P(27)0.05)。7.助排药使用情况比较:A组使用助排药发生率为57.14%,B组为24.14%,C组为10.71%,C组低于B组、A组,差异具有统计学意义(P(27)0.05)。结论:1.子午流注穴位贴敷联合吴茱萸热熨可改善老年脑卒中气虚秘患者便秘症状,增加SCBM,提高生活质量,改善中医证候,提高临床疗效,并减少患者助排药的使用。2.针对老年脑卒中气虚秘患者,子午流注巳时穴位贴敷联合吴茱萸热熨在便秘症状、SCBM、生活质量、中医证候、临床疗效及助排药的使用方面的护理效果总体上优于便秘常规护理和非巳时穴位贴敷联合吴茱萸热熨干预,发挥中医护理技术及中医时间医学的的双重效应,因此改善效果更显著,说明子午流注理论具有临床应用的可行性及优势性,值得临床进一步研究与应用。

关键词： 大禹祭祀仪式   北川   民间信仰   非遗转向  

摘要： 一直以来，中国民间信仰都与政治系统之间有一种耦合关系。在这种起支配作用的文化逻辑和整体性秩序中，北川大禹祭祀仪式从一项地方性民间信仰演变成一项政策性省级非遗项目。从国家政策层面进行非遗保护相关工作的推进，为民间信仰在新时代的传承、发展赋予了新的正当性，这不仅体现了作为“小传统”的民间信仰适应社会发展变迁而迈向非遗的整体性趋势，更是作为优秀传统文化传承保护的典范，成为地方社会重要文化资源，为地方社会中的文旅经济发展、脱贫攻坚、乡村振兴等重大国家战略服务。

摘要： 长民规〔2023〕6号各县(市)区、开发区民政局、文明办、公安局、生态环境局、城管局、交通运输局、应急局、市场监督管理局、林园局、消防救援大队:现将《长春市文明祭祀工作管理办法》印发给你们,请结合实际,抓好贯彻落实。2023年8月9日长春市文明祭祀工作管理办法第一章总则第一条为建设文明城市,倡导文明祭祀,深化殡葬改革,扎实推进禁止生产、禁止销售、禁止焚烧封建迷信殡葬祭祀用品工作,

关键词： 先秦時期   祭品   犧牲   粢盛   禮制  

摘要： 祭祀是先秦社會重要的禮儀活動。人們認爲,通過向鬼神貢獻祭品可以建立人與鬼神的聯繫,藉以報答鬼神的恩惠或祈求鬼神的庇佑。因此,祭品成爲了先秦祭祀禮儀中重要的一環,貫穿祭祀活動的全過程。根據祭品的作用而言,獻祭祭品主要是爲了滿足鬼神的食用和使用兩方面的需求。滿足食用需求的祭品根據其物質屬性可以進一步劃分爲動物類、植物類兩個類別。動物類祭品包括了家養的牛、羊、豬、犬、雞、馬等六畜。漁獵獲取的鹿、虎、狼、兔、野豕、狐狢和魚類等。此外,還有俘獲的敵方首領、罪臣、奴隸等身份的人牲,也作爲動物類祭品使用。獻祭人牲有兩方面的目的,一是繼承自原始社會殺食敵方俘虜的傳統,二是通過殺戮俘虜、奴隸來向鬼神展現成果或供給鬼神伇使。植物類祭品主要包括農業種植的黍稷、稻粱、麥等穀物。野外採集的萍、藻、桃、栗、梅、菱等作物。此外,還包括用於調配肉羹食用的苦、藿、薇等鉶羹之菜。獻祭植物類祭品是商代已有的祭俗,周人將其作爲重要的祭祀禮節進一步加以規範。獻祭植物類祭品目的主要是爲了報答鬼神對農業的恩庇。供給鬼神使用的祭品主要包括車馬、幣帛、酒鬯、鹽。車馬供鬼神乘坐之用。幣帛作爲承載禱告鬼神之辭的載體使用。鬱鬯因其香味可吸引鬼神常被用於沃灌主祭之人和受祭之器。鹽在祭祀中使用則具有協調其他供給鬼神食用祭品之味道的作用。先秦時期的祭品來源、管理和使用皆有詳細的規範。動物祭品主要來源自家庭飼養、漁獵獲取、征斂與納貢等方式;植物類祭品主要來自農業種植和場甸採集。對於已經收斂的各類祭品,在祭祀之前也要通過巡查、檢視、清洗等方式加以處理。經過處理後保持清潔乾淨、完備無缺的祭品方可用於祭祀活動。在祭祀活動的進行中,人們根據祭品的種和祭祀對象採用燔燎、肆獻、血祭、貍沉等不同的方式獻祭祭品。祭品的選用反映了不同時代、不同階層人們的政治、經濟和文化理念。商代重視鬼神,多用大量動物犧牲向鬼神獻祭。殷周易代後,周公製禮作樂,對祭品選擇的種類、數量和使用方式等內容加以規範。周人在祭禮中充分反映了民爲神主的思想主張。強調內心的誠摯、德行的高尚比豐盛的祭品更得鬼神青睞。反映了周代禮制團結親族、整飭秩序的作用。戰國時期,諸侯國紛紛僭越禮制,周禮舊有的規範失去了約束力。先秦諸子皆對鬼神、祭祀之事表達態度,反映了戰國時期不同學派的思想主張。

关键词： 吴茱萸碱   过氧化氢   肝损伤   线粒体凋亡   C-Jun氨基端激酶/线粒体裂变因子通路  

摘要： 目的 探究吴茱萸碱对过氧化氢（H2O2）所致L-O2肝细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法 将L-O2肝细胞分为对照组、H2O2组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组；对照组细胞为正常培养的L-O2细胞，H2O2组细胞用120μmol·L-1的H2O2处理细胞6 h,低、中、高剂量实验组细胞分别用4、8和16μmol·L-1的吴茱萸碱处理细胞24 h后，再用120μmol·L-1的H2O2继续处理细胞6 h。用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测各组细胞存活率，用流式细胞术法检测各组细胞凋亡情况，用JC-1染色法检测各组细胞线粒体膜电位，用化学发光仪检测三磷酸腺苷（ATP）水平，用蛋白质印迹法检测各组细胞相关蛋白表达水平。结果 对照组、H2O2组、高剂量实验组细胞存活率分别为（100.00±3.92）%、（64.09±2.69）%和（94.89±5.78）%,细胞凋亡率分别为（3.05±0.27）%、（19.75±1.47）%和（5.58±0.34）%,JC-1红/绿荧光比值分别为2.55±0.37、0.55±0.03和2.11±0.11,裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cl Caspase-3）蛋白表达水平分别为0.34±0.02、1.07±0.05和0.40±0.04,细胞色素（Cyt C）蛋白表达水平分别为0.30±0.02、0.91±0.09和0.35±0.03,磷酸化C-Jun氨基端激酶（p-JNK）蛋白表达水平分别为0.32±0.03、1.04±0.04和0.52±0.05,线粒体裂变因子（Mff）蛋白表达水平分别为0.31±0.04、0.94±0.15和0.45±0.05。以上指标，H2O2组与对照组比较，高剂量实验组与H2O2组比较，差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 吴茱萸碱预处理可通过改变线粒体膜电位介导线粒体凋亡途径，抑制细胞凋亡，从而减轻H2O2所致的L-O2肝细胞损伤，这可能与JNK/Mff通路有关。

关键词： 恶性黑色素瘤   吴茱萸碱   PD-L1   PI3K/AKT信号通路  

摘要： 背景:恶性黑色素瘤（Malignant melanoma）具有恶性度高、侵袭性强、易转移等特点,近年来应用抑制剂靶向程序性死亡受体-1（PD-1）与其配体PD-L1结合的免疫疗法成为黑色素瘤的治疗热点。PD-1是一种跨膜免疫球蛋白,它主要表达于T细胞表面,当其与肿瘤细胞表面表达的PD-L1结合时,不仅会出现T细胞活化的抑制作用,甚至还会诱导T细胞凋亡,从而减弱机体免疫系统的抗肿瘤效应,促使肿瘤免疫逃逸发生。我国传统中草药提取物吴茱萸碱（Evodiamine,EVO）,已被证实对多种肿瘤细胞具有明显的抑制作用,但EVO的抗肿瘤免疫作用尚未受到关注。大量研究证实EVO可调控PI3K/AKT信号通路,而PD-L1的表达受PI3K/AKT信号通路调节。目的:研究EVO对小鼠黑色素瘤的抑制作用以及对PD-L1表达的影响,探讨PI3K/AKT信号通路在其中发挥的作用,为黑色素瘤的免疫治疗提供新的思路。方法:1.使用浓度为2μM、4μM、6μM的EVO作用于小鼠黑色素瘤B16-F10细胞,通过CCK-8、平板克隆、Annexin V-FITC/PI、Transwell和伤口愈合实验评价EVO对B16-F10细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响。2.通过在C57BL/6小鼠背部皮下注射B16-F10细胞建立黑色素瘤同种皮下移植瘤模型。模型成功建立后,对小鼠进行分组,分别为未建模的健康小鼠Control组、给予EVO处理的成瘤小鼠EVO组和使用生理盐水对照的成瘤小鼠Model组。观察小鼠的生存状态、瘤体增长和脾脏体积的变化;HE染色观察肿瘤细胞及脾脏的组织病理变化;通过流式细胞术检测小鼠脾脏及骨髓中T细胞亚群浸润比例,观察EVO对小鼠体内免疫细胞的影响;免疫组织化学检测进一步验证瘤体及脾脏中T细胞的浸润;通过对小鼠体内重要脏器组织（心、肝、肺、肾）进行HE染色观察其组织病理学变化,评价EVO在体内的生物安全性。3.通过qRT-PCR、Western Blot实验研究EVO处理后的B16-F10细胞以及皮下移植瘤中PD-L1的表达。Western Blot实验观察PI3K/AKT信号通路及其相关因子的变化。结果:***-8、平板克隆、Annexin V-FITC/PI、Transwell和伤口愈合实验结果表明,EVO作用于小鼠黑色素瘤细胞B16-F10细胞后,能够明显抑制其增殖能力,以及侵袭、迁移能力,同时促进其凋亡能力（P<0.05）。2.使用EVO对黑色素瘤同种皮下移植瘤小鼠进行治疗后,能够显著抑制小鼠瘤体组织的体积及质量（P<0.001）;HE结果显示Model组肿瘤细胞形态各异,异型性明显,核分裂象多,核浆比例增大;EVO组肿瘤细胞的核分裂象少,核浆比例降低。***可显著抑制黑色素瘤荷瘤小鼠脾脏系数（P<0.01）;HE结果显示EVO组小鼠脾脏白髓与红髓边缘分界清晰,结构规整,且白髓内可见密集淋巴细胞浸润;流式细胞术结果表明,EVO组小鼠骨髓中的CD4+和CD8+T细胞及脾脏中的CD4+T细胞较Model组明显升高（P<0.05）;免疫组织化学结果亦显示EVO组小鼠脾脏及瘤体组织中CD4和CD8阳性表达强于Model组（P<0.05）;HE结果显示EVO组与Control组正常小鼠相比,两组小鼠各脏器均结构完整,边缘清晰,镜下未见组织变性、坏死及其他明显的病理变化。***-PCR、Western Blot及免疫组化实验结果显示,经EVO处理后的B16-F10细胞及移植瘤中的PD-L1表达较Model组均显著降低（P<0.01）;PI3K/AKT信号通路中相关分子P-PI3K、P-AKT在EVO组中的表达均降低（P<0.05）;使用AKT激动剂SC79和EVO联合处理B16-F10细胞后,其P-PI3K、P-AKT、PD-L1的表达相较仅使用EVO处理的细胞均升高（P<0.05）。结论:EVO能显著抑制小鼠黑色素瘤的生长,可能是通过调控PI3K/AKT信号通路抑制PD-L1的表达,从而改善肿瘤免疫微环境发挥的抗肿瘤作用。