关键词:
异形南五味子
实时荧光定量PCR
内参基因
UBC
摘要:
土家族药血筒(植物学名:异形南五味子)以木质藤本茎入药,具有抗类风湿性关节炎、保肝、抗肿瘤、抗氧化的药用价值,是湖南、广东等地的常用药材。筛选合适稳定的内参基因是开展异形南五味子分子水平研究的基础。该研究选取GAPDH、TUA、Actin、UBQ、EF-1α、18S-rRNA、CYP、UBC、TUB、H2A、RPL共11个基因作为候选内参基因,通过实时荧光定量PCR检测11个候选内参基因在异形南五味子6个不同组织部位(藤茎-形成层以内、藤茎-形成层以外、果实、花、根和叶)与不同干预条件下[干旱胁迫、盐胁迫、茉莉酸甲酯(MeJA)处理]的基因表达水平,利用geNorm、NormFinder、ΔCT算法以及RefFinder软件对11个候选内参基因表达稳定性进行综合分析评价。综合以上分析结果表明,UBC与RPL基因在6个不同组织部位中较为稳定,UBC与GAPDH基因在不同干预条件下较为稳定。为了验证异形南五味子内参基因的可靠性,该研究进一步检测了异形南五味子主要成分——血筒素合成通路上的14个相关基因(KhFPS、KhIDI、KhCAS、KhSQE、KhSQS、KhSQS-2、KhHMGS、KhHMGR、KhMVD、KhMVK、KhDXR、KhDXS、KhPMVK、KhGGPS)在不同组织与不同干预条件中的表达水平。结果显示,分别以UBC与RPL或UBC与GAPDH作为内参基因,14个基因在异形南五味子不同组织部位或不同干预条件下表达趋势基本一致。综上,该研究筛选的UBC基因可作为异形南五味子不同组织部位与不同干预条件下的内参基因,为后续开展异形南五味子主要成分生物合成途径的研究奠定了基础。