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关键词： 食管癌   ACSL4   FASN   恶性生物学行为   吉非替尼耐药   EMT  

摘要： 目的 探究长链酰基辅酶A合酶4(long-chain acylcoenzyme A synthase 4,ACSL4)调节脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)对食管癌细胞恶性生物学行为及吉非替尼耐药性的影响,并探讨相关机制。方法 收集35例新鲜食管癌及癌旁正常组织,30例食管癌伴吉非替尼耐药组织,qRT-PCR及免疫组化检测ACSL4及FASN表达差异。qRTPCR检测人正常食管细胞HET-1A,食管癌细胞系ECA109、EC9706、TE-1及TE-1/GR中ACSL4及FASN表达量。脂质体转染技术构建各组细胞,克隆形成和CCK-8实验检测细胞耐药及增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)信号通路蛋白表达。结果与食管癌旁正常组织相比,ACSL4与FASN基因在癌组织中表达均升高,且呈正相关。与HET-1A细胞相比,ACSL4表达量在ECA109、EC9706、TE-1细胞中明显增加。随着吉非替尼浓度升高,TE-1细胞中ACSL4表达量逐渐升高,且ACSL4在TE-1/GR细胞中的表达量高于TE-1。相较于Control组及si-NC组,si-ACSL4组细胞增殖及侵袭能力降低,凋亡数量增多,E-Cadherin表达量增高,N-Cadherin、Vimentin、β-catenin表达量降低。回复实验测得,与si-ACSL4组及siACSL4+oe-NC组相比,si-ACSL4+oe-FASN组细胞耐药能力升高,增殖及侵袭能力提升,细胞凋亡数量减少,E-Cadherin表达量降低,N-Cadherin、Vimentin、β-catenin表达量增高。结论ACSL4下调FASN表达,逆转食管癌TE-1/GR细胞对吉非替尼的耐药性,抑制TE-1/GR细胞增殖、侵袭并加速凋亡,这可能与调控EMT信号通路相关。

关键词： 构树多糖   提取工艺   结构表征   生物活性  

摘要： 构树(茎叶)中含有丰富的蛋白质,可以作为植物性蛋白原料替代畜禽饲粮中的部分豆粕,目前已经用于多种动物饲料,具有较高的营养价值。2018年,构树(茎叶)被纳入《饲料原料目录》,其饲用价值得到广泛关注;同时,构树也是一种传统的中草药,其果实(楮实子)、叶、根皮等多个部位均可入药。构树具有提高畜禽免疫、改善脂肪代谢、防治鸡球虫感染等药用功效,构树的药用价值正逐步得到研究人员的关注。以往对构树活性成分的研究多集中在黄酮类、生物碱、木脂素等,而对多糖活性的研究较少。构树多糖具有抗氧化、抗微生物、保肝、提高免疫等生物活性,在当前饲料禁抗和养殖减抗的政策背景下,构树多糖或许能够开发为一种新型的功能性饲料,在畜牧领域展现出广阔的应用前景。作者系统综述了构树多糖的提取工艺、结构表征和生物活性,并分析和总结了当前构树多糖的研究热点和不足,以期为构树多糖的进一步开发和在畜禽生产中的应用提供理论参考。

关键词： 奶牛乳房炎   明串珠菌   抑菌活性  

摘要： 【目的】从奶牛场环境和牛体样本中分离明串珠菌(Leuconostoc)并深入探究其生物学特性,为防治奶牛乳房炎提供益生菌菌株。【方法】通过菌体形态学观察及分子生物学手段对分离菌进行菌种鉴定,通过双层平板法分析菌株对奶牛乳房炎常见病原菌的抗菌活性,并分析其主要抑菌物质成分,建立生长曲线及产酸曲线,探究其消化道环境耐受特性,并通过药敏试验和溶血试验评估菌株的安全性。【结果】分离得到3株益生菌,在MRS琼脂培养基上均呈乳白色单菌落,镜检为革兰阳性球菌,分别命名为11、14和18号菌株。16S rDNA测序结果显示,11和14号菌株与NCBI登录的肠膜明串珠菌相似性均在99%以上,18号菌株与乳明串珠菌相似性在99%以上,确定3株分离株均为明串珠菌。3株明串珠菌对大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的抑菌圈直径均>19 mm,具有良好的抑菌活性。3株明串珠菌对大肠杆菌的抑菌物质主要包括有机酸、细菌素和过氧化氢;而11、14号菌株对肺炎克雷伯菌的主要抗菌物质包括有机酸和过氧化氢,18号菌株主要包括有机酸。生长曲线显示,3株明串珠菌生长规律基本一致,其中0～2 h为迟缓期,2～12 h为对数期,12 h后为稳定期,菌液产酸pH均稳定为4.0左右,具有较好的产酸性能。3株明串珠菌在人工胃液、人工肠液中培养4 h后的存活率均在56%以上,胆盐浓度为0.3%时,3株明串珠菌存活率均在26%以上,说明菌株具有良好的耐受性。药敏试验结果显示,3株明串珠菌对红霉素、米诺霉素、妥布霉素等高度敏感;对青霉素、氨苄西林和万古霉素耐受;对头孢呋辛、头孢曲松、左氧氟沙星等中度敏感。3株明串珠菌均不具有溶血性。【结论】本研究分离得到的3株明串珠菌均具有较好的抑菌特性和安全性,为后续开展益生菌防治细菌性奶牛乳房炎提供了研究基础。

关键词： 培养组学   测序技术   微生物组   疾病研究   临床应用  

摘要： 随着人类微生物组计划的提出与实施,微生物菌群在疾病发生发展中的作用越来越被重视,测序技术被广泛应用于相关研究中,并取得了长足进展,但也存在检测阈值较高以及无法获得活菌等不足。作为一门新兴技术,培养组学通过模拟细菌的生存环境,采用不同的培养条件,旨在尽可能多地分离和培养出不同的细菌群落,并对相应细菌进行准确鉴定。这一技术广泛应用于不同疾病的微生物菌群特征研究。该文综述了培养组学在各类疾病研究中的应用,并探讨了其与其他组学技术结合在微生物菌群研究中的良好前景。

关键词： 牦牛   生产性能   血清生化   经济效益   瘤胃微生物多样性  

摘要： 为研究冷季不同饲养方式对牦牛生产性能、血清生化指标、经济效益及瘤胃微生物多样性的影响,试验选用48头体重相近的公牦牛,随机分为6组,每组8个重复,每个重复1头牛。各组分别为:A组(天然牧草);B组(40%天然牧草+30%青贮玉米秸秆+30%白酒糟+矿物盐);C组(50%青贮玉米秸秆+50%白酒糟+矿物盐);D组(50%天然牧草+50%精料);E组(天然牧草+矿物盐);F组(40%天然牧草+60%青贮玉米秸秆+矿物盐)。预饲期15 d,正饲期60 d。结果表明:(1)在生产性能和血清生化指标方面,与其他组相比,D组的平均日增重(ADG)显著升高(P<0.05);C组的尿素氮(BUN)含量最高,显著高于A组、E组和F组(P<0.05);A组和D组的葡萄糖(Glu)含量最高,均显著高于其余各组(P<0.05);D组的甘油三酯(TG)含量最高,显著高于C组、E组及F组(P<0.05);A组和D组的谷草转氨酶(AST)含量最高,均显著高于C组(P<0.05)。(2)在经济效益方面,饲料成本最低的是C组,其极显著低于其余各组(P<0.01);C组每日经济效益最高,其极显著高于其余各组(P<0.01)。(3)在Alpha多样性上,E组的Ace指数和Chao指数均最低,均极显著低于A、B、C、D组(P<0.01);在Beta多样性上,在OTU水平下,D组和B组的微生物群落与其他组相比相似度水平较低,两组的相似度水平也较低(P<0.05);在群落组成及差异物种分析上,各组在门水平上群落组成相似,属水平上群落组成差异较大,在科至属水平上共鉴定到55种差异菌。综上所述,本试验条件下,从饲料成本和维持牦牛健康体况等方面综合考虑,冷季较适宜饲养方式是饲喂50%的青贮玉米秸秆和50%的白酒糟,这种方式可以用最少成本维持牦牛冷季健康且不掉膘,使牦牛健康的度过冷季,是值得向牧区大力推广的冷季牦牛养殖方式。

关键词： 合作猪   CXCL12基因   克隆   生物信息学   表达  

摘要： 【目的】对合作猪基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor 1,SDF-1(CXCL12))基因进行克隆及生物信息学分析,并检测其在不同组织中的表达水平,为研究CXCL12基因的功能奠定基础。【方法】以合作猪心脏组织cDNA为模板,采用PCR扩增、克隆CXCL12基因CDS区序列并测序,对所获序列进行相似性比对及系统进化树构建。利用生物信息学软件对合作猪CXCL12蛋白进行理化性质及结构功能分析。运用实时荧光定量PCR检测CXCL12基因在合作猪各组织内的表达水平。【结果】合作猪CXCL12基因CDS区全长351 bp,编码116个氨基酸;与马的亲缘关系最近,与羚羊的亲缘关系最远。CXCL12蛋白不存在跨膜区和信号肽,但存在1个低复杂度的SCY结构域,亲水性指数为―0.347,属于亲水性蛋白,包含12个磷酸化位点;二级结构主要为无规则卷曲(54.31%)和α-螺旋(32.76%),三级结构与二级结构相一致;该蛋白主要分布于细胞核和线粒体,并与CCL21、CXCL9等蛋白存在相互作用。实时荧光定量PCR结果显示,CXCL12基因在合作猪肝脏中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01),在肾脏和心脏中的表达量极显著低于其他组织(P<0.01)。【结论】本研究成功克隆合作猪CXCL12基因CDS区,编码116个氨基酸,主要分布在细胞核和线粒体中,是一种稳定、亲水且无跨膜结构的分泌蛋白。CXCL12基因在合作猪肝脏中的表达量最高。本研究结果可为进一步揭示CXCL12基因调控合作猪免疫机制提供参考。

关键词： 旅游收入分配   涓滴效应   测度   提升路径  

摘要： 近年来，在推动共同富裕的进程中，民族村寨旅游收入分配不均的问题日益突显，在旅游市场规模较大的前提下，涓滴效应先富带动后富的实际效果如何？文章结合大理双廊镇下的案例地3村整体情况，对双廊村、大建旁村、长育村3个处于不同旅游发展阶段的村寨进行分析，利用熵值法、减贫等值增长率指数、空间自相关、障碍度模型，分层分类对旅游收入分配涓滴效应进行测度与分析。结果表明：1）案例地3村企业－家庭的就业涓滴效果最差，且分配效应的不佳导致旅游收入无法涓滴到本地群体；2）外来资本控制程度、参与商业活动机会是涓滴效应的主要障碍因子，双廊村存在外来－本地的负向涓滴；3）旅游发展后期的双廊村存在多类涓滴，中期的大建旁村涓滴深度较好，分配广度的问题逐渐突出，初期的长育村涓滴效果较差，区域涓滴优势暂未显现。该研究有助于提升旅游收入分配涓滴效应，在共同富裕目标下为民族村寨缩小旅游收入差距提供启示。

关键词： V(Ⅴ)   Shewanella oneidensis MR-1   生物炭   柱淋溶  

摘要： 自然环境中五价钒(V(V))毒性和迁移性远高于低价钒，易随雨水的淋滤作用迁移至地下水，造成地表与地下水污染。微生物能够将V(V)还原为毒性较低的V(IV)，减少其在土壤环境中的移动性和生物可利用性。本研究选用粒径0.80 mm竹炭为载体负载奥奈达希瓦氏菌(Shewanella oneidensis MR-1)，通过柱淋溶试验探究竹炭对V(Ⅴ)的持留以及S. oneidensis MR-1对V(Ⅴ)还原能力，并分别研究流速、初始V(V)浓度、溶液pH以及腐殖酸浓度等因素对V(V)迁移的影响。结果显示，负载细菌显著增强V(Ⅴ)在竹炭柱中的持留。淋溶液V(V)浓度分别为5、10、20、40、80 mg/L，当淋溶液体积为8 PV(PV为孔隙体积，60 mL)时，竹炭柱中流出液V(V)浓度分别为4.61、9.09、18.31、39.23、79.61 mg/L，而负载细菌竹炭柱流出液V(V)浓度则分别为0、1.07、3.48、4.63、12.13 mg/L，表明负载S. oneidensis MR-1可以降低柱中V(V)的移动性。微生物还原V(V)过程中，初始接菌量增加可以加快V(V)的还原；溶液pH 5.5–8.5条件下，经7 d培养后菌株对V(V)的还原率均超过95%，其中pH 7.5时V(V)还原率达到最高98.3%；腐殖酸浓度增加略微降低菌株对V(V)的还原能力。V(V)在竹炭柱淋溶过程，较低的淋溶液流速有利于竹炭对V(V)的吸附，并促进微生物对V(V)的还原反应；较高的接菌量有助于增强微生物对V(V)还原固定；当淋溶体积为8 PV，淋溶液pH 5.5时流出液中V(V)浓度为1.98 mg/L，而pH 8.5时流出液中V(V)浓度增加至13.69 mg/L，较低pH可以降低V(Ⅴ)在生物炭柱中的迁移性；腐殖酸在低浓度时促进微生物的还原作用，但在高浓度时可能会与V(Ⅴ)形成络合物，降低V(V)还原效率。研究表明，竹炭固定化微生物促进V(Ⅴ)的持留与还原，可用于土壤与地下水钒污染修复。