关键词:
结直肠癌
POLR2M
增殖
侵袭
细胞凋亡
摘要:
目的 探讨结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中POLR2M的表达及其对细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法 采用GEPIA2.0、TCGA和Kaplan-Meier Plotter数据库分别分析预测POLR2M在CRC组织和正常癌旁组织中的差异表达,以及采用Log-rank test法评估各组表达的预后差异。应用qRT-PCR法检测POLR2M在人CRC细胞系SW480、HCT-8、RKO、LOVO、DLD-1、HCT-1 16、SW620及人正常结直肠细胞系FHC中的表达。通过慢病毒稳定转染DLD-1和RKO细胞上调POLR2M,并分为对照组(LV-NC)和实验组(LV-POLR2M),利用干扰片段SiRNA瞬时转染SW620和SW480细胞下调POLR2M,并分为对照组(Si-NC)和实验组(Si-POLR2M),验证各组转染效率。运用CCK8、平板克隆、Transwell和划痕愈合实验检测细胞增殖、侵袭和迁移能力。利用流式细胞术检测POLR2M对细胞周期和凋亡的影响。结果 GEPIA2.0、TCGA和Kaplan-Meier Plotter数据库分析显示:POLR2M在CRC中的表达高于正常癌旁组织(P <0.05),且POLR2M表达与CRC组织学类型和淋巴结转移密切相关(P <0.05),与患者年龄、性别、肿瘤分级和脉管侵犯均无关(P>0.05);POLR2M过表达的患者预后不良(P <0.05)。qRT-PCR检测结果显示,与FHC细胞相比,SW480、HCT-8、RKO、LOVO、DLD-1、HCT-1 16、SW620细胞系中POLR2M的mRNA表达升高(F=97.7,P<0.05),并成功构建POLR2M稳定过表达和干扰细胞株。与LV-NC组相比,LV-POLR2M组DLD-1和RKO细胞的活力、集落数、穿过小室的细胞数和细胞迁移率均显著上升(P <0.05);与Si-NC组相比,Si-POLR2M组SW620和SW480细胞的活力、集落数、穿过小室的细胞数和细胞迁移率均显著下降(P<0.05)。下调POLR2M可诱导细胞周期阻滞在G1期,促进细胞凋亡(P<0.05)。结论 POLR2M在CRC中可能发挥促癌基因的作用,其高表达可显著促进CRC细胞的增殖及侵袭能力。