关键词:
盆底肌功能
仿生物电刺激
间充质干细胞
骨骼肌细胞
含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶-2
环磷腺苷效应元件结合蛋白
摘要:
目的 探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)/含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶(SHP-2)/蛋白激酶B(AKT)信号通路在人骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为骨骼肌细胞中的作用,以及该信号通路对产后盆底康复的影响。方法 于2022年11月—2023年4月在石家庄市第三医院实验室进行实验。利用人骨髓干细胞成骨分化数据集上的各种分析技术,揭示不同的基因表达模式和调控关系。使用人骨髓间充质干细胞系CP-H166进行实验,将细胞分为对照组(NC组)、5-氮胞苷组、5-氮胞苷+电刺激组、5-氮胞苷+电刺激+CREB抑制剂组和5-氮胞苷+电刺激+CREB激动剂组。通过Western blot、Fura-2钙离子荧光染色和免疫荧光染色等方法,检测各组细胞中相关蛋白和钙离子浓度的表达和分布。结果 在成骨分化的3或4 d与1或2 h的时间点比较中,火山图和平均差图分析显示CREB、SHP2、MyoD、MyoG、MYHC和TPM1等基因显著下调。Western blot检测结果显示,与对照组相比,5-氮胞苷和电刺激处理提高了CREB、SHP2、AKT、MyoD、MyoG、TPM1蛋白的表达水平(P<0.05)。加入CREB抑制剂后,SHP2和AKT的表达降低(P<0.05),进而减少MyoD、MyoG和TPM1的表达;而加入CREB激动剂后,上述蛋白含量升高(P<0.05)。Fura-2钙离子荧光染色结果表明,5-氮胞苷和电刺激可提高钙离子浓度(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,5-氮胞苷和电刺激处理增加了p-CREB和MyoD的表达和分布(P<0.05),加入CREB激动剂进一步增加了这些蛋白的表达(P<0.05),而加入CREB抑制剂则降低了其表达(P<0.05)。结论 CREB/SHP2/AKT信号通路在BMSCs分化为骨骼肌细胞过程中具有重要作用。调控该信号通路可以显著影响细胞的分化过程,促进产后盆底康复。