关键词:
抗体偶联药物
配体结合分析法
液相色谱与串联质谱联用法
定量分析
摘要:
抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC)有着低毒、高效的药物特点,在癌症治疗中发挥着重要作用。但是因其结构的复杂性,带来药代动力学(pharmacokinetic,PK)生物分析的困难。本研究建立一种应用配基结合分析法(ligand-binding assay,LBA)和液相色谱与串联质谱联用法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测食蟹猴血浆中ADC (RC108)的分析方法,用于分析定量食蟹猴血浆中的总抗体、结合抗体和游离药物。基于LBA法,在96孔板预包被rabbit anti-RC108 Fab和mouse anti-MMAE m Ab分别作为总抗体和结合抗体的试剂,加入待测样品,随后依次加入检测试剂goat anti-human Ig G (H+L)-HRP和显色液四甲基联苯胺(tetramethylbenzidine,TMB),H2SO4终止反应后,酶标仪450 nm/630 nm波长处读取数据;LC-MS/MS分析方法定量单甲基澳瑞他汀E (MMAE)浓度,并参考相关法规进行方法学验证。对RC108药物定量总抗体、结合抗体和游离药物的分析方法得到了良好的准确度和精密度,并对选择性、稀释线性、钩状效应和稳定性等进行了验证,均符合生物分析的要求。最终通过LBA法和LC-MS/MS法建立了一种兼具高灵敏与高通量的测定食蟹猴血浆中受试物RC108浓度(总抗体、结合抗体、游离MMAE)的生物分析方法,为后续非临床研究食蟹猴的PK研究提供技术支撑。