关键词： 尼罗罗非鱼   肝脏   Nr1d1   Ulk1b   昼夜节律性表达  

摘要： 为了探究GSK4112对生物钟以及自噬基因在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肝脏的昼夜表达规律的作用。本试验分别对尼罗罗非鱼注射等量生理盐水和GSK4112,并在注射24 h后的06:00、09:00、12:00、15:00、18:00、21:00、24:00时以及翌日03:00、06:00时采样,采样在一昼夜内完成。每组随机取3尾鱼进行解剖,取其肝脏样品采用RT-qPCR对mRNA表达水平,进行Matlab余弦分析,确定其节律性表达,并将注射前后肝脏样品用透射电镜检测自噬小体数量变化。结果表明:生物钟基因Nr1d1与自噬基因Ulk1b在对照组的尼罗罗非鱼肝脏中表达均具有显著性时间差异(P<0.05),且均呈现节律性振荡(P<0.3);但基因表达趋势不同,且达到峰值的时间亦不同。注射Nr1d1激动剂GSK4112后Nr1d1与Ulk1b在尼罗罗非鱼肝脏中均无昼夜节律性,虽然达到峰值的时间不同,但基因表达趋势相同,mRNA表达水平均表达量受到抑制,振幅和中值减小,且自噬小体数量也减少。这些结论表明了GSK4112在尼罗罗非鱼肝脏中对生物钟基因Nr1d1的表达起到抑制作用,同时影响其生物节律性。通过对下游自噬基因Ulk1b的昼夜节律调控,抑制自噬小体的数量,降低自噬的发生。本研究对鱼类由昼夜节律失调引起的自噬失调可能导致常见的代谢紊乱具有指导作用。

关键词： 昼夜节律基因   甲基化   突变   乳腺癌  

摘要： 目的探讨节律基因在乳腺癌中的表达变化、甲基化和突变情况。方法通过公共数据库中的乳腺癌数据对节律基因的表达和功能进行全面和系统的分析。结果乳腺癌中大多数节律基因均显示出高突变率,超过30%的节律基因在乳腺癌中都发生了显著突变,其中,周期基因2(PER2)在乳腺癌中突变率较高,高达1%。大多数节律基因在乳腺癌样本中呈低表达,大多数节律基因在乳腺癌样本中呈高甲基化。结论乳腺癌中大多数节律基因均显示出高突变率及低表达,表达水平的变化可能是异常甲基化导致的。

关键词： 昼夜节律   相位前移   PDE5抑制剂   基因表达   肝脏  

摘要： 目的研究磷酸二酯酶5(PDE5)抑制剂TF对小鼠昼夜节律相位前移的影响并探讨其对小鼠肝脏生物钟的作用机制。方法(1)跑轮实验:15只小鼠随机分为3组:对照组、西地那非(sildenafil)组和TF组。在小鼠原有节律的基础上将开灯时间提前8 h。改变光照当天ZT18时灌胃给药(30 mg/kg),记录小鼠的昼夜活动相移情况。(2)分子生物学实验:16只小鼠随机分为4组:对照组、西地那非组(30 mg/kg)、TF低剂量组(30 mg/kg)和TF高剂量组(60 mg/kg)。同跑轮实验条件,给药1 h后取小鼠肝脏,实时定量PCR法检测小鼠肝组织生物钟基因mRNA表达水平的变化,并对生物钟基因的蛋白表达产物进行免疫印迹分析。结果动物跑轮实验结果表明,在光照时间提前8 h后,与对照组相比[(9.400±0.548)d],西地那非组小鼠需(7.400±1.517)d、TF组小鼠需(7.200±1.304)d同步化到新的昼夜节律周期,两组均与对照组有显著性差异。在基因水平,与对照组相比,西地那非组和TF组肝组织bmal1、naps2的mRNA表达水平均呈现显著上调,西地那非组和TF组(60 mg/kg)clock的mRNA表达水平呈现显著上调,西地那非组和TF组(30 mg/kg)rorα的mRNA表达水平呈现显著上调,per2和rev-erbαmRNA表达水平均显著下调,而per1、cry1、cry2、dec1的mRNA表达水平无显著变化。与对照组相比,西地那非组和TF组肝组织BMAL1、CLOCK蛋白表达水平显著上调,TF组RORα蛋白表达水平显著上调,西地那非组和TF组(60 mg/kg)NPAS2蛋白表达水平显著上调,西地那非组和TF组PER2、REV-ERBα的蛋白表达水平显著下调。结论TF能促进小鼠昼夜节律相位前移,并可同时在转录和翻译水平改变小鼠肝脏多种核心生物钟基因的表达。

关键词： 双相情感障碍   转躁   昼夜节律通路基因   机器学习   预测模型  

摘要： 背景:双相情感障碍(bipolar disorder,BD)首发抑郁相易误诊为抑郁症(major depressive disorder,MDD),从而耽误治疗,影响预后,因此对这类患者的早期发现十分重要。昼夜节律紊乱与转躁密切相关,但尚未发现昼夜节律通路基因的基因多态性与转躁的关系,更未有人整合多维度数据进行转躁预测。本研究目的旨在结合临床特征和昼夜节律通路相关基因遗传多态性发现影响MDD转躁的危险因素,并通过机器学习(machine learning,ML)建立转躁预测模型。方法:本研究纳入70名通过随访未转躁的MDD患者(简称MDD组)和68名转躁后诊断为BD患者(简称BD组),选取昼夜节律通路基因标签单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)进行基因检测,使用SPSS软件对两组患者临床特征进行分析,采用UNPHASED 3.1.7软件包分析每个SNP的基因型频率、等位基因频率和单倍型与转躁的关联性,用Mplus8.0软件包分析昼夜节律通路基因的SNPs在HAMD-17中睡眠三项总得分与转躁之间是否存在中介效应。运用R 3.6.3进行特征筛选以及转躁预测模型的建立,并使用接受者操作特性曲线(receiver operating characteristic curve,简称ROC曲线)、校准图(calibration)、净重分类改善度(net reclassification improvement,NRI),决策曲线分析(decision curve analysis,DCA)进行模型评价。结果:本研究通过logistics回归分析发现发病年龄是转躁的危险因素;遗传多态性方面,通过基因型频率分析发现两组患者中的PER1rs2253820、PER1rs2735611、PER3rs12566042、PER3rs17031614、PER3rs79372391基因型频率存在明显差异,两组患者等位基因频率和单倍型分析未见明显差异;中介分析未发现昼夜节律通路基因的SNPs在HAMD-17量表中睡眠三项总得分与转躁之间存在中介效应。在特征选择中发现不仅首次发病年龄,而且住院次数和自杀企图也与转躁密切相关,同时特征选择结果显示多个昼夜节律通路基因的SNPs与转躁密切相关。本研究利用上述特征建立3种预测模型,使用4种评价方法评价模型,发现临床特征加SNPs的模型预测能力更好,表明联合临床特征和遗传因素建立的模型能更好的进行转躁预测。总结:通过本文的研究,发现了影响转躁的危险因素,并建立了转躁预测模型,对临床诊断具有一定的指导意义。

关键词： 老年   高血压   昼夜节律   颈动脉粥样硬化   斑块  

摘要： 目的 探讨老年高血压患者血压昼夜节律与颈动脉粥样硬化的相关性分析。方法 选取我院收治的90例老年高血压患者作为研究对象，根据其动态血压监测结果将其分异常昼夜节律（43例）和正常昼夜节律（47例），两组患者均接受颈动脉超声检查，测定其管腔内径、内膜中层厚度、颈内动脉、右侧颈内总动脉，及IMT值，记录两侧颈动脉斑块数量和大小等。结果 正常昼夜节律组RBIFIMT（0.74±0.21）mm低于异常昼夜节律组RBIFIMT（1.09±0.42）mm（P<0.05），正常昼夜节律组RICAIMT、RICAD、RCCAIMT、RCCAD等指标与异常昼夜节律组比较，P>0.05，比较无斑块检出率，正常和异常昼夜节律组无差异（44.68%vs46.51%，χ2=0.0303,P>0.8617），比较单发和多发性斑块检出率，正常和异常昼夜节律组有统计学意义（34.04%vs9.30%，χ2=7.9522,0.0048;21.28%vs44.19%，χ2=5.3965,P<0.0202）。结论 老年高血压患者血压所发生的昼夜节律变化与颈动脉粥样硬化存在关联，其血压昼夜节律异常提示可能存在靶器官损害，应及时就诊。

摘要： 本刊讯(通讯员王蕾)近日,首都医科大学宣武医院神经内科马欣教授团队发表论文,团队首次采用"压力感受器分布动脉粥样硬化总负荷(TAB-BRA)"这一新型指标来量化评估颈动脉窦和主动脉弓的总体动脉粥样硬化状况,通过对245名缺血性卒中患者进行头颈CT血管造影检查及24 h血压监测,发现TAB-BRA增加者更易伴有血压昼夜节律不良。该研究结果为探索异常血压昼夜节律的形成机制提供了新方向,也显示出TAB

关键词： 昼夜节律   DNA甲基化   单核苷酸多态性   血小板   氯吡格雷抵抗   冠心病  

摘要： 一、昼夜节律基因甲基化与氯吡格雷抵抗风险的关系研究目的:氯吡格雷抵抗(clopidogrel resistance,CR)指氯吡格雷治疗下的血小板活化和聚集未得到抑制,导致心血管事件的发生。本研究旨在探讨急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者中生物钟基因ADCY3、PLCB1、GNAS和GRIA2的DNA甲基化与CR之间的关系。方法:研究总共纳入60名符合要求的ACS患者,其中30名为CR患者。进行临床资料收集和肘前静脉采血之后,采用Verify-Now P2Y12比浊法检测血小板功能。使用QIAamp DNA Blood试剂盒提取外周血中的DNA。使用重亚硫酸氢盐焦磷酸测序法检测四个位点cg02447122、cg02524009、cg19640589和cg13254556的甲基化水平。采用实时荧光定量PCR检测基因m RNA的表达。结果:通过检测生物钟基因的甲基化水平发现,cg13254556的DNA低甲基化可能会增加罹患CR的风险(NCR vs CR(%):43.74±9.71 vs 39.22±7.55,P=0.049),这在亚组分析的非高血压患者中更为显著(NCR与CR(%):44.45±7.29 vs 36.47±6.84,P=0.018)。在T2DM亚组中,cg02447122的高甲基化可能会升高CR的风险(NCR与CR(%):7.86±1.53 vs 9.60±0.82,P=0.017)。通过检测4个生物钟基因的m RNA表达发现,T2DM亚组中CR患者的ADCY3的表达降低(NCR与CR:0.87±0.32 vs 0.57±0.17,P=0.044)。结论:昼夜节律基因ADCY3和GRIA2的启动子甲基化可能参与调节患者对氯吡格雷的不同反应。二、昼夜节律基因多态性与氯吡格雷抵抗风险的关系研究目的:近期国内外的研究表明,氯吡格雷抵抗(clopidogrel resistance,CR)的原因可能与血小板的活性受昼夜节律变化的影响有关。本研究目的在于评估稳定性冠心病患者中,相关昼夜节律基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与CR之间的关系。方法:我们总共纳入204名稳定性冠心病患者,其中96名为CR患者。临床资料收集和血小板功能评估之后,进行人体外周血DNA的提取,并利用Genome Lab SNPstream基因分型系统对23个昼夜节律相关基因的SNP进行分型,并建立显性遗传模型和隐性遗传模型。用Logistic回归分析昼夜节律基因多态性与CR风险的关联强度。然后进行外周血RNA的提取,根据最佳拟合遗传模型,使用荧光定量PCR检测CLOCK、CRY1、CACNA1C、PRKCG的相对表达。结果:根据CR与23个SNP的遗传相关性分析,位于昼夜节律基因CRY1、CACNA1C和PRKCG的基因多态性可能参与调节患者对氯吡格雷的不同反应。基因CLOCK rs180126位点的多态性可能导致该基因m RNA的高表达,并可能诱发氯吡格雷抵抗;基因PRKCG的rs3745406位点的TC基因型可能会降低该基因m RNA的表达,导致氯吡格雷抵抗的发生。结论:昼夜节律基因参与了CR的发生,CLOCK、CRY1、CACNA1C和PRKCG的SNP改变了氯吡格雷的疗效。

关键词： 昼夜节律   不稳定动脉粥样硬化斑块   炎症  

摘要： 目的研究人循环血中具有昼夜节律性的基因,分析其相关炎症功能,及其对动脉粥样硬化的潜在影响。方法通过分析人循环血液中具有昼夜表达节律性基因的相关数据,利用LSPR算法分析其中基因表达的昼夜节律性,利用GOterm数据库分析相关基因主要功能集中免疫炎症,结合人动脉粥样硬化不稳定斑块高表达相关基因,分析昼夜节律性炎症因子对易损斑块的影响。结果具有昼夜节律性的相关基因主要功能为免疫炎症、淋巴细胞激活、白细胞激活、细胞因子的调节、T细胞激活等,相关炎症基因与不稳定冠状动脉粥样硬化斑块相关,昼夜节律干扰后相关节律性减弱或消失。结论人循环血中具有昼夜节律性的因子的主要功能与免疫炎症相关,部分因子在易损斑块斑块中也高表达,节律紊乱干扰相关炎症因子节律性,其潜在影响急性冠脉事件的发生。

关键词： 心血管疾病   昼夜节律   Period基因  

摘要： 昼夜节律是机体依据外界环境发生的规律的周期性变化。生物钟通过整合太阳周期的时间信息,使生物体的生理与环境同步,从而形成昼夜节律。生物钟产生的昼夜振荡由时钟基因组成的自主反馈回路维持。Period(Per)基因家族是昼夜节律反馈通路中的核心成员,在心肌细胞及血管内皮细胞等中均有表达,参与血压、心率、心肌舒缩等心血管系统活动的调节。在Per和其他时钟基因的协同调控下,心血管系统的活动表现出明显的昼夜节律,且节律紊乱可导致各种组织损伤,从而诱发高血压、冠心病、心肌梗死、心力衰竭等各种心血管疾病。将Per基因作为靶点,有望成为防治心血管疾病研究的新方向。